環(huán)氧化酶2及癌胚抗原在結(jié)腸癌分子病理研究中的作用研究

趙其輝蘇 堅(jiān)羅春艷

（1 湖南環(huán)境生物職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖南 衡陽 421005；2 南華大學(xué)附屬第二醫(yī)院，湖南 衡陽 421001）

環(huán)氧化酶2及癌胚抗原在結(jié)腸癌分子病理研究中的作用研究

趙其輝1蘇 堅(jiān)2羅春艷1

（1 湖南環(huán)境生物職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖南 衡陽 421005；2 南華大學(xué)附屬第二醫(yī)院，湖南 衡陽 421001）

目的研究環(huán)氧化酶2（COX-2）及癌胚抗原（CEA）在結(jié)腸癌分子病理研究中的作用。方法隨機(jī)選取2010年5月至2012年7月我院收治的46例結(jié)腸癌根治術(shù)患者的組織標(biāo)本作為研究對(duì)象，同時(shí)收集新鮮結(jié)腸癌組織遠(yuǎn)、近端癌旁1、2、3 cm的腸壁組織以及與腫瘤相距約8 cm正常腸壁組織，采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)環(huán)氧化酶2（COX-2）及癌胚抗原（CEA）與上述組織之間的表達(dá)情況。結(jié)果46例患者中腫瘤遠(yuǎn)、近端3 cm處腸壁病理切緣均呈現(xiàn)陰性；近端癌旁1、2、3 cm腸壁組織以及到距離腫瘤8 cm正常結(jié)腸組織之間具有遞減趨勢(shì)；近端、遠(yuǎn)端3 cm處CEAmRNA與COX-2mREA并沒有腫瘤組織表達(dá)的明顯，差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；同比正常組織，差異不明顯，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論臨床可選擇COX-2、CEA作為結(jié)腸癌分子邊緣研究的分子標(biāo)志物，二者具有一定的研究價(jià)值。

環(huán)氧化酶2；結(jié)腸癌分子；癌胚抗原；病理研究

隨著科學(xué)技術(shù)水平的不斷發(fā)展，醫(yī)療衛(wèi)生事業(yè)也得到了前所未有的跨步。目前，臨床方面視為判斷惡性腫瘤金標(biāo)準(zhǔn)的是組織病理學(xué)，且伴隨著分子生物技術(shù)的快速發(fā)展，絕大多數(shù)的醫(yī)學(xué)研究者希望從分子的角度去研究和分析腫瘤契機(jī)周圍組織的腫瘤浸潤情況，以便提高腫瘤疾病的治療效率[1-2]，但是，截止到目前，針對(duì)結(jié)腸癌分子邊緣的研究沒有確切的定論。本文隨機(jī)選取2010年5月至2012年7月我院收治的46例結(jié)腸癌根治術(shù)患者的組織標(biāo)本作為研究對(duì)象，現(xiàn)將具體的研究結(jié)果作如下匯報(bào)。

1 資料與方法

1.1 一般資料：隨機(jī)選取2010年5月至2012年7月我院收治的46例結(jié)腸癌根治術(shù)患者的組織標(biāo)本作為研究對(duì)象，所有患者均經(jīng)手術(shù)、病理學(xué)檢查確診為結(jié)腸癌，且術(shù)前均未經(jīng)過任何其他輔助治療。其中男性患者30例，女性患者16例，患者年齡30～80歲，平均年齡（29.5±7.5）歲。按照組織病理學(xué)劃分：其中黏液腺癌5例，低分化腺癌11例，中分化腺癌13例，高分化腺癌17例；按照TNM分期，其中Ⅰ期9例，Ⅱ期13例，Ⅲ期16例，Ⅳ期8例。

1.2 研究方法

1.2.1 制備標(biāo)本：取新鮮結(jié)腸癌手術(shù)標(biāo)本時(shí)，沿其腸管縱軸行切開術(shù)，采用氯化鈉（0.9%）溶液沖洗之后，以適量的力量牽拉腸壁，確保腸管伸展度與體內(nèi)形成一致的標(biāo)準(zhǔn)；于腫瘤中心組織處取一塊，以腫瘤邊緣為起始點(diǎn)，分別向腫瘤遠(yuǎn)端、近端的腸端從腫瘤邊緣起，每間隔1 cm即切取寬度約為0.3 cm全層腸壁組織，直至結(jié)腸癌腫近端、遠(yuǎn)端3 cm處，逐一取腫瘤組織、近端1、2、3 cm的組織和近端1、2、3 cm組織標(biāo)本，距腫瘤8 cm正常腸壁組織也需要選取，共計(jì)8處標(biāo)本。將一部分標(biāo)本快速放置在冰袋預(yù)冷的-80 ℃冷凍管之中保存；另一部分采用甲醛（10%）固定，并送往病理科進(jìn)行蘇木精-伊紅染色。

1.2.2 試驗(yàn)方法：按照試劑盒的使用說明書提取組織RNA，進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄；采用TapDNA聚合酶說明書行目的基因拓展；反應(yīng)條件：50 ℃需30 min、90 ℃需10 min；94 ℃需45 s、60 ℃需45 s（CEA需要55 ℃）、72 ℃需1 min，35個(gè)循環(huán)；延伸72 ℃需10 min。采用瓊脂糖凝膠電泳RT-PCR產(chǎn)物，并將凝膠成像分析系統(tǒng)按照密度掃描分析，采用COX-2的擴(kuò)增產(chǎn)物條帶灰度值、特定產(chǎn)物CEA以及看見基因β-actin條帶灰度值作為CEAmREA、COX-2 mREA的表達(dá)水平。計(jì)算方法如下：相對(duì)系數(shù)（表達(dá)強(qiáng)度）與β-actin表達(dá)強(qiáng)度的比值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：試驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料應(yīng)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（），計(jì)量資料比較行t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料行χ2檢驗(yàn)，若P＜0.05則表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 結(jié)腸癌及癌旁組織光鏡觀察結(jié)果：46例患者中腫瘤遠(yuǎn)、近端3 cm處腸壁病理切緣均呈現(xiàn)陰性；經(jīng)病理檢查，距腫瘤1、2 cm的遠(yuǎn)端腸壁組織病理陽性率分別是41.3%、15.2%。距腫瘤1、2 cm的近端腸壁組織病理陽性率分別是34.8%、8.7%。

2.2 腫瘤組織與其癌旁組織COX-2、CEA的RT-PCR檢測(cè)結(jié)果：腫瘤組織以及不同距離腫瘤切緣組織CEAmRNA、COX-2mRNA所表達(dá)的陽性率會(huì)隨著逐漸遠(yuǎn)離腫瘤，使位于各切緣位點(diǎn)兩指標(biāo)表達(dá)陽性率降低，見表1。

3 討 論

自20世紀(jì)初，相關(guān)學(xué)者第一次提出“分子切緣”的概念后，對(duì)分子水平進(jìn)行手術(shù)切緣的研究也在不斷的發(fā)展。就目前而言，國內(nèi)外對(duì)COX-2、CEA和結(jié)腸癌分子邊緣之間的關(guān)系還有待進(jìn)一步研究[3-4]。

通過研究發(fā)現(xiàn)，CEA和COX-2在結(jié)腸癌組織中的陽性表達(dá)率都超過了80%以上。因此，在臨床方面，可以將二者作為分子標(biāo)志物進(jìn)行研究，以此作為評(píng)價(jià)結(jié)腸癌邊緣安全性的依據(jù)[5-6]。

在本次試驗(yàn)中，46例患者中腫瘤遠(yuǎn)、近端3 cm處腸壁病理切緣均呈現(xiàn)陰性；近端癌旁1、2、3 cm腸壁組織以及到距離腫瘤8 cm正常結(jié)腸組織之間具有遞減趨勢(shì)；近端、遠(yuǎn)端3 cm處CEAmRNA與COX-2 mREA并沒有腫瘤組織明顯，差異顯著；同比正常組織，差異不明顯。由此可見，臨床可選擇COX-2、CEA作為結(jié)腸癌分子邊緣研究的分子標(biāo)志物，二者具有一定的研究價(jià)值。

表1 分析結(jié)腸癌組織和不同距離邊緣癌旁組織CEA和COX-2的半定量

[1]鐘華,廖愛軍,劉迪群,等.環(huán)氧化酶-2與大腸癌侵襲及轉(zhuǎn)移的關(guān)系[J].臨床醫(yī)學(xué),2012,32(4):4-5.

[2]楊曉東,邢春根,趙志東,等.環(huán)氧化酶2和癌胚抗原在結(jié)腸癌分子病理研究中的作用[J].中華胃腸外科雜志,2011,14(10):807-809.

[3]陳志康,歐陽植庭.癌胚抗原和環(huán)氧化酶2的表達(dá)與結(jié)直腸癌的關(guān)系[J].癌癥,2003,22(2):164-167.

[4]王愛娥,董書魁,王清娟,等.癌胚抗原在結(jié)直腸癌早期診斷和預(yù)后評(píng)估中的意義及其最新研究進(jìn)展[J].中國臨床康復(fù),2004,8(32):7265-7267.

[5]陳志康,歐陽植庭.E-鈣黏素和環(huán)氧化酶-2與結(jié)直腸癌的關(guān)系[J].實(shí)用癌癥雜志,2002,17(5):490-492.

[6]李紅霞,郭秦樂,周博,等.陜西人群環(huán)氧化酶-2(COX-2)啟動(dòng)子區(qū)基因多態(tài)性及與結(jié)直腸癌易感性的關(guān)聯(lián)研究[J].西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2014,35(4):522-550.

R735.3+5

B

1671-8194（2015）07-0131-02