HPLC聯合UV法測定煙酸片中煙酸的含量

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(1.南華大學附屬第二醫(yī)院藥劑科，湖南 衡陽 421001；2.南華大學附屬第二醫(yī)院呼吸內科)

·技術與方法·

HPLC聯合UV法測定煙酸片中煙酸的含量

吳廣1，曾賽麗2*

(1.南華大學附屬第二醫(yī)院藥劑科，湖南 衡陽 421001；2.南華大學附屬第二醫(yī)院呼吸內科)

目的建立一種精確可靠的HPLC/UV法用于測定煙酸片中煙酸的含量。方法：HPLC法采用Aglient C18色譜柱，以0.02 mol/L磷酸二氫鉀-乙腈(90∶10)為流動相等度洗脫，流速1.0 mL/min，檢測波長263 nm；UV法以磷酸二氫鉀-乙腈作為溶劑，在 263 nm 波長處測定吸光度；并通過檢測其線性范圍、精密度、準確度和加樣回收率對該方法進行驗證。結果： 煙酸檢測質量濃度在5.0～100.0μg/mL 范圍內，與吸光度和峰面積積分值呈良好的線性關系，UV法檢測r=0.9959，平均加樣回收率為99.57%，RSD=1.08%(n=6)；HPLC法檢測r=0.999 8，平均加樣回收率為99.62%，RSD=0.74%(n=6)。結論：HPLC法和UV法聯用操作簡捷、準確、重復性好，并且具有更好的專屬性，可用于煙酸片煙酸的含量測定和質量控制。

HPLC； UV； 含量測定； 質量控制； 煙酸

煙酸(nicotinic acid)也稱作維生素B3，是一種水溶性維生素。煙酸可以擴張周圍血管，臨床用于治療頭痛、偏頭痛、內耳眩暈癥等。此外，煙酸還可以促進消化系統(tǒng)的健康，減輕胃腸障礙；使皮膚更健康；降低血壓；減輕腹瀉等[1-2]。煙酸片作為化學藥品，在中國藥典中已經收錄[3]，中國藥典中測定煙酸含量的方法為酸堿滴定法。本文首次采用HPLC聯合UV法對煙酸片進行了含量測定，并證明本法結果方法可靠、重現性好、簡單易行、靈敏快速。

1 材料與方法

1.1儀器Agilent1100型高效液相色譜儀，包括四元梯度泵、DVW紫外檢測器、ChemStation工作站、手動進樣閥(美國安捷倫公司)；UV-2100型紫外分光光度計(日本島津公司)；電子分析天平(日本Shimadzu公司)；KQ-5200E型超聲波機(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2藥品與試劑煙酸對照品購自上海晶純生化科技股份有限公司(HPLC，批號：N103654)；樣品煙酸片為上海信宜九福藥業(yè)有限公司(批號：140501、140502、140503，規(guī)格均為50 mg)。磷酸二氫鉀、乙腈等流動相所用試劑均為色譜純，其他試劑為分析純，水為注射用水。

1.3色譜光譜條件參照《中國藥典》2010版一部以及相關文獻確定檢測波長，使用紫外分光光度計和高效液相色譜儀通過煙酸對照品得到煙酸峰的光譜圖。對于流動相的選擇，本研究參考相應文獻[4-6]，最終采用0.02 mol/L磷酸二氫鉀-乙腈(90∶10)為流動相，該流動相條件下出峰時間合適且可以得到很好的峰型。

HPLC法：Aglient C18(150 mm×4.6 mm,5 μm)；流動相：0.02 mol/L磷酸二氫鉀-乙腈(90∶10)；檢測波長:263 nm；流速1.0 mL/min；柱溫28 ℃；進樣量20 μL。

UV法：溶劑：0.02 mol/L磷酸二氫鉀-乙腈(90∶10)；檢測波長:263 nm。

1.4溶液的制備精密稱取適量經105 ℃干燥的煙酸對照品，置于棕色量瓶中，加入計算量的流動相制成每1 mL含50 μg的溶液，搖勻，作為對照品溶液；取樣品煙酸片10片，精密稱定，研細，取約0.10 g，精密稱定，至50 mL量瓶中，加相應量的流動相，如樣品不溶可采用超聲處理，取出，靜置，加流動相稀釋至刻度，將所配溶液過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。本實驗以0.02 mol/L磷酸二氫鉀-乙腈(90∶10)溶液作為陰性對照溶液。

1.5線性關系考察精密稱取煙酸對照品適量

加流動相制成每1 mL含250 μg的溶液。分別精密吸取0.5,1.0,2.0,5.0,10.0 mL測定，以對照品含量為橫坐標，以吸光度或峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，結果煙酸在5.0～100.0 μg/mL范圍內，呈良好的線性關系，UV法測得回歸方程：y=0.293 7x+0.052 7,r=0.995 9(n=5)。HPLC法測得回歸方程：y=575.47x-10.265,r=0.999 8(n=5)。

1.6方法的控制通過樣品穩(wěn)定性試驗測定樣品的穩(wěn)定性；通過重復性試驗和準確度試驗，樣品含量和加樣回收率進行方法的質控分析。

2 結 果

2.1檢測波長的確定從煙酸標準品光譜圖(圖1)觀察發(fā)現，煙酸在263 nm處有最大吸收，參照《中國藥典》2010版一部，選取263 nm作為檢測波長。

圖1 煙酸標準品UV色譜圖

2.2系統(tǒng)適用性試驗按色譜條件，取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照液進樣，記錄色譜(圖2)。結果表明陰性對照液對煙酸含量測定結果無干擾，該方法適用于本研究。

2.3穩(wěn)定性測定試驗在本試驗條件下，分別取同一份在室溫放置0,4,8,12,24h后的供試溶液各測1次。結果，UV法測得其相對標準偏差(RSD)=0.65%，HPLC法測得其RSD=0.50%，表明供試品溶液在24 h內穩(wěn)定性良好。

圖2 HPLC色譜圖 a.對照品；b.供試品；c.陰性對照品

2.4精密度測定試驗取同一份供試品溶液20 μL，連續(xù)重復進樣6次。結果，UV法測得其RSD=0.35%，HPLC法測得其RSD=0.45%，表明儀器的精密度良好。

2.5重復性試驗取同一批號(批號140501)樣品6份，參照方法制備供試品溶液，分別進樣測定。結果，UV法測得其RSD=0.95%，HPLC法測得其RSD=0.86%，表明該方法重復性良好。

2.6樣品含量測定取3批樣品，按方法制備樣品溶液，用UV法及HPLC測定樣品中煙酸含量，計算RSD，結果見表1。

表1煙酸含量的測定結果(n=4)

批號UV法含量(mg/片)RSD(%)HPLC法含量(mg/片)RSD(%)14050149.540.5049.380.5514050250.380.4250.640.4814050350.660.6951.050.72

表2UV法加樣回收率試驗測定結果

樣品含量(mg)加入量(mg)測得量(mg)回收率(%)X(%)RSD(%)20.1210.0429.6898.4020.1210.6430.5699.3020.1215.1235.56100.9199.571.0820.1215.4335.87100.9020.1220.6240.3699.0720.1219.9839.6498.85

表3HPLC法加樣回收率試驗測定結果

樣品含量(mg)加入量(mg)測得量(mg)回收率(%)X(%)RSD(%)20.1210.0429.8598.9020.1210.6430.4599.0020.1215.1235.43100.5099.620.7420.1215.4335.77100.6020.1220.6240.4699.3020.1219.9839.8099.40

3 討 論

煙酸是人體和動物中不可缺少的營養(yǎng)成分，它參與組織的氧化還原過程，具有促進細胞新陳代謝和擴張血管的功能，能促進人體和動物的生長發(fā)育。煙酸廣泛應用在醫(yī)藥、食品和飼料上，近年來，不斷開發(fā)出新的用途。因此對煙酸含量的檢測需要更加精細和靈敏。

目前煙酸含量檢測的方法有很多種，其中《中國藥典》2010版采用酸堿滴定法測定煙酸片的含量[7-9]，該方法操作繁瑣，誤差較大，檢測限較低，不能用來監(jiān)測人體內血藥濃度的變化。而本實驗建立了HPLC法聯合UV法測定煙酸含量，通過對含量測定方法的進行了系統(tǒng)性研究，UV色譜圖中顯示不同濃度的煙酸在263nm波長處有特征吸收峰；而UV法檢測r=0.9959，平均加樣回收率為99.57%，RSD=1.08%(n=6)，HPLC法檢測r=0.9998，平均加樣回收率為99.62%，RSD=0.74%(n=6)；以上結果表明UV法具有很強的專屬性，HPLC法相對精確度高，兩種方法的聯合使用能夠更好地保證檢測結果的準確性。

總之，在本試驗條件下，HPLC聯合UV法測定煙酸片中煙酸含量的方法操作簡捷、準確、重復性好，具有更好的專屬性，可用于煙酸片及相關藥物的質量控制，具有很好的市場應用前景。

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DeterminationoftheNicotinicAcidinNicotinicAcidTabletsbyHPLCCombinedwithUV

WU Guang

(DepartmentofPharmacy,theSecondAffiliatedHospital,UniversityofSouthChina,Hengyang,Hunan421001,China)

ObjectiveTo establish an accurate and reliable HPLC/UV method for the quantitative determination of nicotinic acid in nicotinic acid tablets.MethodsThe chromatographic separation conditions employed for HPLV method were chosen using Aglient C18 column.0.02 mol/L potassium dihydrogen phosphate (Ph 6.8)-acetonitrile (90∶10) were used as the mobile phase pumped at a flow rate of 1.0mL/min and a detection wavelength at 263 nm was used.UV method use potassium dihydrogen phosphate (Ph 6.8)-acetonitrile (90∶10) as solvent,and the detection wavelength were at 263 nm.The linearity,precision,accuracy,recovery rate and other content were tested to validate the method.ResultsThe linear range of nictinic acid was 5.0～100.0 μg/mL.With UV method (r=0.995 9),the average recovery is 99.57% (RSD=1.08%,n=6);with HPLC method (r=0.999 8),the average recovery is 99.62% (RSD=0.74%,n=6).ConclusionThe HPLC/UV method is simple,accurate,high-specificial and reproducible.This method can be used for the quality control nicotinic acid tablets.

HPLC; UV; content determination; quality control; nicotinic acid

10.15972/j.cnki.43-1509/r.2015.03.024

2014-12-24；

2015-04-07

*通訊作者，E-mail：2814940758@qq.com.

R927.2

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(此文編輯：秦旭平)