HPLC法測(cè)定金芪膠囊中芍藥苷的含量

彭金香，吳　灃，陳秋鳳，陳龍全

1.湖北民族學(xué)院中醫(yī)藥學(xué)院(湖北 恩施 445000)

2.恩施自治州中心醫(yī)院(湖北 恩施 445000)

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HPLC法測(cè)定金芪膠囊中芍藥苷的含量

彭金香1,2，吳灃1，陳秋鳳1，陳龍全*

1.湖北民族學(xué)院中醫(yī)藥學(xué)院(湖北 恩施 445000)

2.恩施自治州中心醫(yī)院(湖北 恩施 445000)

【摘要】目的建立HPLC法對(duì)金芪膠囊中芍藥苷的含量測(cè)定方法。方法選擇Hypersil ODS柱(200mm×4.6mm,5μm)；乙腈-0.1%磷酸溶液(12∶88) 為流動(dòng)相；流速1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)230nm，柱溫為30℃。結(jié)果金芪膠囊中芍藥苷的含量在0.31～2.45μg的范圍內(nèi)，有良好的線(xiàn)性關(guān)系，r=0.9996，平均回收率為99.33%，穩(wěn)定性(RSD)=0.14%，金芪膠囊中芍藥苷的含量為0.5897mg/g。結(jié)論該方法操作易行，穩(wěn)定可靠，可用于金芪膠囊的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】金芪膠囊；芍藥苷；高效液相色譜法

金芪膠囊是恩施州中心醫(yī)院經(jīng)批準(zhǔn)生產(chǎn)的自制制劑，處方由黃芪、白芍、廣金錢(qián)草、茵陳、川楝子(炒 )、郁金、香附(醋制)、雞內(nèi)金(炒)、六神曲(炒)、白術(shù)(炒)、黃連、丹參、延胡索等17味中藥組成。其功效主要為清肝利膽，和胃止痛。用于急慢性膽管、膽囊炎，慢性胃炎，慢性結(jié)腸炎等。該制劑臨床療效準(zhǔn)確，作用顯著。白芍是君藥，為毛茛科植物芍藥的干燥根，其質(zhì)量要求含芍藥苷不得少于1.2%[1]。目前對(duì)該制劑的質(zhì)量控制只有部分粉碎藥材顯微鑒別、黃芪甲苷的定性檢驗(yàn)等，沒(méi)有針對(duì)主藥進(jìn)行含量監(jiān)測(cè)。本研究采用高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定金芪膠囊中芍藥苷的含量,該方法操作易行，穩(wěn)定可靠，可用于金芪膠囊的質(zhì)量控制。

1　儀器與試藥

高效液相色譜儀(LC-20AD,日本島津)；自動(dòng)進(jìn)樣器(SIL-10ADvp)，檢測(cè)器(SPD-M10Avp )，十萬(wàn)分之一的電子分析天平(BP211D，德國(guó)塞多利斯)，HS6I50型數(shù)控超聲波清洗器( 昆山市超聲儀器有限公司)。

芍藥苷對(duì)照品(110736-200732，中國(guó)藥品生物制品檢定所) ；甲醇、乙腈為色譜純，磷酸、乙醇為分析純，水為娃哈哈純凈水。金芪膠囊(批號(hào)2013203，2014079；2014100)及陰性樣品由恩施州中心醫(yī)院制劑室提供。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱Hypersil ODS柱(200mm×4.6mm,5μm )；乙腈-0.1%磷酸溶液(12∶88) 為流動(dòng)相[2]；流速1.0mL/min[3]；檢測(cè)波長(zhǎng)230nm[4]，柱溫為30℃[5]，理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算不低于2 000[6]，進(jìn)樣量為10μL[7]。

2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取干燥至恒重的芍藥苷12.24mg,加甲醇并定于100mL量瓶中作為對(duì)照液。

2.3供試品溶液的制備精密稱(chēng)取金芪膠囊內(nèi)容物5g，置具塞錐形瓶中，加甲醇50mL[8]，稱(chēng)定質(zhì)量,超聲處理(功率240W,頻率24kHz)[9]，放冷，再稱(chēng)定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，過(guò)0.45μm微孔濾膜[10],即得。

2.4干擾試驗(yàn)精密稱(chēng)取不含白芍的陰性樣品5g，置具塞錐形瓶中，加甲醇50mL。稱(chēng)定質(zhì)量,超聲處理(功率240W,頻率24kHz)，放冷，再稱(chēng)定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，過(guò)0.45μm微孔濾膜,即得。

精密量取芍藥苷對(duì)照品溶液、供試 品溶液和陰性樣品溶液10μL分別注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，供試品與對(duì)照品溶液在相應(yīng)的位置上有相同的峰，而陰性樣品不干擾測(cè)定,見(jiàn)圖1~圖3。

圖1　芍藥對(duì)照品 　　　　　　　　　　　　圖2　供試品　　　　　　　　　　　　 圖3　陰性對(duì)照

2.5標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備精密量取對(duì)照品溶液2.5，5，10，15，20μL分別進(jìn)樣，按“2．1”的色譜條件測(cè)定，以進(jìn)樣質(zhì)量為橫坐標(biāo)、峰面積積分值為縱坐標(biāo)，經(jīng)線(xiàn)性回歸，回歸方程為Y=1.06×10X+6.75×105，r=0.9996。芍藥苷在0.31～2.45μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.6精密度試驗(yàn)精密量取芍藥苷對(duì)照品溶液(0.1224mg/mL)10μL,依照“2.1”的色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次,記錄峰面積,計(jì)算芍藥苷 RSD=0.95%,表明精密度良好。

2.7穩(wěn)定性考察取同一批樣品，按供試品溶液制備方法制備，分別在0、3、6、9、12、24h，進(jìn)樣10μL，記錄峰面積，RSD=1.09%,表明芍藥苷在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8重復(fù)性試驗(yàn)取同一批金芪膠囊供試品5份,按“2.3”項(xiàng)下方法制備,精密吸取10μL，進(jìn)樣，記錄峰面積。芍藥苷RSD=1.43%，表明重復(fù)性良好。

2.9加樣回收率試驗(yàn)精密稱(chēng)取已知含量的金芪膠囊內(nèi)容物5份，分別加入芍藥苷對(duì)照品1mL(0.1224mg/mL)，按“2.3”項(xiàng)下的方法進(jìn)行處理,進(jìn)樣10μL，計(jì)算芍藥苷的回收率為99.33%，RSD=0.14%,見(jiàn)表1。

2.10樣品含量測(cè)定取3批樣品,按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,精密吸取供試品溶液10μL，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定,每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)定3次,記錄峰面積，用外標(biāo)法計(jì)算芍藥苷含量,結(jié)果見(jiàn)表2。

表1　芍藥苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

表2　樣品中芍藥苷含量測(cè)定結(jié)果

3　討論

芍藥苷是白芍的最主要的藥用成分，具有鎮(zhèn)靜、解痙、抗炎等作用。芍藥苷的含量越高，藥用價(jià)值越大，不同白芍的芍藥苷含量差別很大，為保證金芪膠囊的療效穩(wěn)定，需要監(jiān)測(cè)白芍中芍藥苷的含量。芍藥苷的性質(zhì)穩(wěn)定，受熱不分解，目前常用測(cè)量方法是HPLC法，其分離效能高、靈敏度高、分析速度快，所以，金芪膠囊中的芍藥苷的含量測(cè)定適合用HPLC法。

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Determination of Content of Paeoniflorin Jinqi Capsules by HPLC

PENG Jin-xiang1,2,WU feng1,CHEN Qiu-feng1,etal.

(1.SchoolofTraditionalChineseMedicine,HubeiUniversityforNationalities,Enshi445000,China;

2.CentralHospitalofEnshiAutonomousPrefecture,Enshi445000,China)

【Abstract】Objective To establish a method for content determination of paeoniflorin in HPCL produced Jinqi capsule.Methods Column Hypersil ODS column (200mm×4.6mm,5μm );mobile phase, acetonitrile phosphoric acid solution (12∶88); flow rate:1.0mL/min;detection wavelength:230nm,the column temperature was 30℃.Results The content of paeoniflorin Jinqi Capsules in the range of 0.31 to 2.45μg showed a linear relationship,good r=0.9996,the average recovery was 99.33%,RSD=0.14%,and the content of paeoniflorin Jinqi Capsules was 0.5897mg/g.Conclusion Being easy, stable and reliable,The method can be used for quality control of Jinqi capsules.

【Key words】Jinqi Capsules; paeoniflorin; HPLC

[收稿日期2014-07-20]

【中圖分類(lèi)號(hào)】R286

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1008-8164(2014)03-0035-02

作者簡(jiǎn)介彭金香(1985- )，女，湖北恩施人，藥品檢驗(yàn)師，碩士在讀，研究方向：民族藥學(xué)；*

通信作者陳龍全，教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：民族藥學(xué)。