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    香菇中粗多糖含量測定的方法比較

    2015-12-25 02:02:40何東慧郭曉燕
    現(xiàn)代食品 2015年13期
    關(guān)鍵詞:測定方法苯酚香菇

    ◎何東慧 郭曉燕

    (譜尼測試集團股份有限公司,北京 100000)

    香菇,又名香菌、花菇、冬菇、香蕈等,俗稱中國蘑菇,是一種重要的食藥用栽培真菌。香菇肉質(zhì)肥厚細(xì)嫩,味道鮮美,香氣獨特,營養(yǎng)豐富,是一種食藥同源的食物,具有很高的營養(yǎng)、藥用和保健價值。隨著人們生活水平的提高,香菇食品、藥品、保健品等制品將日益受到人們的青睞。

    多糖是由多個單糖分子縮合、失水而成,是一類分子機構(gòu)復(fù)雜且龐大的糖類物質(zhì)。它包括有淀粉、纖維素、糖元等。一般檢測的粗多糖并不包含所有的多糖,是指從植物、中草藥或真菌中提取的活性多糖,具有水溶性。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,人們逐漸認(rèn)識到多糖具有極其重要的生物功能。多糖與免疫功能的調(diào)節(jié)、細(xì)胞與細(xì)胞的識別、細(xì)胞間物質(zhì)的轉(zhuǎn)運、癌癥的診斷與治療等都有著密切的關(guān)系,近年來又發(fā)現(xiàn)多糖的糖鏈能控制細(xì)胞的分裂和分化、調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長和衰老。

    關(guān)于食用菌中粗多糖測定的方法沒有國家標(biāo)準(zhǔn),只有一個農(nóng)業(yè)部推薦的方法。另外,《保健食品功效成分檢測方法》介紹了幾種粗多糖的測定方法。本文就香菇中粗多糖含量的測定方法:農(nóng)業(yè)部推薦方法和《保健食品功效成分檢測方法》中苯酚-硫酸法進行了一些介紹和討論。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    (1)干香菇;

    (2)硫酸;

    (3)無水乙醇;

    (4)苯酚;

    (5)80%乙醇溶液;

    (6)葡萄糖,使用前應(yīng)于105℃烘干至恒重;

    (7)80%苯酚溶液;

    (8)5%苯酚溶液:吸取5mL苯酚溶液(2.1.7),溶于75mL水中,混勻,現(xiàn)用現(xiàn)配;

    (9)100mg/L標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液:稱取0.1000g葡萄糖(2.1.6)于100mL燒杯中,加水溶解,定容至1000mL,置4℃冰箱中貯存。

    1.2 儀器

    紫外可見分光光度計;分析天平,感量為0.001g;超聲提取器;離心機。

    1.3 實驗方法

    1.3.1 實驗原理

    在硫酸作用下,粗多糖先水解為單糖,單糖迅速脫水生成糖醛衍生物,該衍生物與苯酚反應(yīng)生成的溶液在490nm下有特征吸收,以此測定樣品中粗多糖含量。

    1.3.2 樣品的提取

    方法一:稱取0.5g左右粉碎過20mm孔徑篩的樣品,置于50mL具塞離心管內(nèi),加5mL水浸潤樣品,然后緩慢加入20mL無水乙醇(即溶液中乙醇的濃度為80%),使用渦旋振蕩器振搖,使混合均勻,于4℃冰箱中靜置4小時以上,在以4000r/min離心5min,棄去上清液。不溶物用10mL乙醇溶液洗滌、離心。用水將上述不溶物轉(zhuǎn)移入圓底燒瓶,加入50mL蒸餾水,裝上磨口的空氣冷凝管,于沸水浴中提取2h。冷卻至室溫,過濾,將上清液轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中,用水洗滌殘渣2~3次,洗滌液轉(zhuǎn)至容量瓶中,加水定容。此溶液為樣品測定液。

    方法二:稱取混合均勻的樣品1.0~2.0g,置于100mL容量瓶中,加水80mL左右,于沸水浴中加熱1小時,冷卻至室溫后補加水至刻度,混勻后過濾,棄去初濾液。準(zhǔn)確吸取5mL濾液置于50mL離心管中,加入無水乙醇20mL,混勻,于4℃冰箱靜置4小時以上,以4000r/min離心5min,棄去上清液,殘渣用80%乙醇溶液10mL洗滌,離心后棄去上清液。殘渣用水溶解并定容至50mL。此溶液為樣品溶液。

    線性方程為y=9.418 4x+0.008 3,R2=0.999 6

    1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線

    方法一:分別吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖工作溶液置于20mL具塞玻璃試管中,用蒸餾水補至1.0mL。向試液中加入1.0mL苯酚溶液,然后快速加入5.0mL硫酸(與液面垂直加入,勿接觸試管壁,以便與反應(yīng)液充分混合),靜置10min。使用渦旋振蕩器使反應(yīng)液充分混合,然后將試管放置于30℃水浴中反應(yīng)20min,490nm測吸光值。以葡萄糖質(zhì)量為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo),制定標(biāo)準(zhǔn)曲線。

    方法二:吸取標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖工作液的體積及試劑加入量同方法一,試劑加入后,置于沸水浴中加熱15min,冷卻后,同樣在490nm測吸光值。以葡萄糖質(zhì)量為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo),制定標(biāo)準(zhǔn)曲線。

    1.3.4 測定

    分別吸取方法一和方法二的樣品溶液1mL于20mL具塞試管中,分別按1.3.3步驟操作,測定吸光度。同時做空白試驗。

    1.3.5 結(jié)果計算

    樣品中粗多糖含量按下面兩個公式計算。

    方法一:

    其中:X—樣品中粗多糖含量,g/100g;

    C1—方法一中從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得樣品定容液中含糖量,mg;

    C2—方法二中從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得樣品定容液中含糖量,mg;

    m1—方法一中樣品質(zhì)量,g;

    m2—方法二中樣品質(zhì)量,g。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 兩種方法標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

    按照上述方法要求,分別繪制方法一和方法二的標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)序列分別見表1和表2,曲線線性圖見圖1和圖2。從圖1和圖2看出,方法二的線性要比方法一線性好。

    表1 方法一葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)序列表

    圖1 方法一葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

    線性方程為y=9.139 7x+0.002 3,R2=0.996 4

    表2 方法二葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)序列表

    圖2 方法二葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

    2.2 兩種方法的精密度分析

    按照上述兩種方法分別測定同一個干香菇樣品,測定結(jié)果見表3。通過數(shù)據(jù)比較得出,兩種方法測定結(jié)果比較接近,但方法二的精密度較高。

    2.3 兩種方法的準(zhǔn)確度分析

    分別對兩種方法進行加標(biāo)回收實驗,實驗數(shù)據(jù)見表4。由于加入葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液為單糖溶液,再加入乙醇進行分離時,葡萄糖很容易被分離出去,故標(biāo)品均在顯色前加入,所以兩種方法的準(zhǔn)確度都很好。

    表3 樣品測定結(jié)果

    表4 樣品加標(biāo)回收實驗

    2.4 兩種測定法的比較

    從分析結(jié)果來看,兩種方法測定結(jié)果沒有明顯的差異。下面對這兩種方法的區(qū)別、優(yōu)缺點分別進行分析。

    表5 兩種測定方法的區(qū)別

    2.4.1 兩種測定方法的區(qū)別

    兩種測定方法的區(qū)別見表5。

    2.4.2 兩種方法優(yōu)缺點

    兩種方法的優(yōu)缺點見下表6。

    表6 兩種方法優(yōu)缺點

    3 結(jié)論

    香菇中粗多糖的測定方法比較簡單,但實際操作過程比較麻煩,要注意的方面很多。比色法測定多糖并非特異性反應(yīng),方法靈敏度高,在測定過程中會出現(xiàn)偏差較大的結(jié)果,主要是操作不夠嚴(yán)謹(jǐn)所致,反復(fù)沉淀、洗滌、棄上清液、樣液的轉(zhuǎn)移等都是造成測定結(jié)果偏差的原因。在操作過程中要多思考,控制好操作過程,這樣才能得到較好的實驗結(jié)果。

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