糖尿病大鼠坐骨神經(jīng)cAMP、cGMP與微循環(huán)相關(guān)性及益氣活血通絡(luò)中藥的干預(yù)作用

糖尿病大鼠坐骨神經(jīng)cAMP、cGMP與微循環(huán)相關(guān)性及益氣活血通絡(luò)中藥的干預(yù)作用

趙蕓蕓張文風(fēng)王秀閣1

(長春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林長春130117)

摘要〔〕目的觀察糖尿病(DM)大鼠坐骨神經(jīng)環(huán)磷酸腺苷(cAMP)、環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)與微循環(huán)相關(guān)性及益氣活血通絡(luò)方的干預(yù)作用。方法采用鏈脲佐菌素復(fù)制DM大鼠模型，并隨機分為模型組、中藥組、彌可保組，同時設(shè)正常對照組。觀察益氣活血通絡(luò)中藥對大鼠血液流變學(xué)、坐骨神經(jīng)cAMP、cGMP含量的影響。結(jié)果DM大鼠血液流變學(xué)、坐骨神經(jīng)cAMP、cGMP含量均發(fā)生改變，益氣活血通絡(luò)方藥對二者有明顯改善作用。結(jié)論DM大鼠血液流變學(xué)與坐骨神經(jīng)改變cAMP、cGMP含量具有相關(guān)性，益氣活血通絡(luò)中藥通過對二者的改善從而防治DM周圍神經(jīng)病變。

關(guān)鍵詞〔〕糖尿??；血液流變學(xué)；cAMP、cGMP；益氣活血通絡(luò)方

中圖分類號〔〕R285.5〔文獻標(biāo)識碼〕A〔

基金項目：吉林省科技發(fā)展計劃項目(No.20140311001YY)；長春市科技計劃項目(No.2013374)

通訊作者：張文風(fēng)(1970-)，女，博士后，教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事中藥復(fù)方的配伍及機制研究。

1長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院

第一作者：趙蕓蕓(1992-)，女，在讀本科，主要從事中藥復(fù)方的配伍及機制研究。

血液流變學(xué)是糖尿病(DM)診斷、治療、療效觀察的客觀指標(biāo)之一〔1〕，其異常變化對DM的慢性并發(fā)癥發(fā)生及發(fā)展影響較大。以往研究表明，益氣活血通絡(luò)方可以降低DM大鼠血糖、提高其體重、坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度、改善血清胰島素、C肽以及抑制細胞凋亡等作用〔2～8〕。本文探究DM大鼠血液流變性與坐骨神經(jīng)環(huán)磷酸腺苷(cAMP)、環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)含量相關(guān)性及其作用，旨在揭示中藥復(fù)方的作用機制。

1材料與方法

1.1模型的建立雄性健康Wistar大鼠，體重(240±20)g。適應(yīng)性飼喂1 w后，禁食12 h，將鏈脲佐菌素臨用配成2%濃度溶液，按劑量50 mg/kg左下腹腔內(nèi)單次注射，72 h后取尾血測血糖，血糖≥16.7 mmol/L作為DM大鼠。適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后將成模大鼠隨機分為模型組、中藥組、彌可保組各10只。并取體重、鼠齡相匹配的同批血糖值在正常范圍內(nèi)正常大鼠10只作為正常對照組。連續(xù)觀察8 w后處死。由于高血糖及并發(fā)感染，模型組死亡3只，彌可保組死亡2只，中藥組死亡1只。

1.2實驗設(shè)備AnkeTDL-5-A型離心機(上海醫(yī)療器械有限公司)，GC-911-r-放射免疫計數(shù)器(中國科技大學(xué)實業(yè)總公司)，F(xiàn)ASCO-3010全自動血液流變快測儀(重慶大學(xué)維多生物工程研究所)。

1.3藥品及試劑益氣活血通絡(luò)方組成藥物(黃芪、桂枝、生地、水蛭)均購于長春市同仁堂藥房，長春中醫(yī)藥大學(xué)王淑敏教授鑒定，煎制成2 g/ml，置4℃冰箱保存?zhèn)溆?。cAMP、cGMP放射免疫分析藥盒(北京北方生物技術(shù)研究所，批號121020、121026)。

1.4血液流變學(xué)檢測大鼠麻醉后，腹主動脈取血，肝素抗凝，應(yīng)用FASCO-3010全自動血液流變快測儀測定。

1.5大鼠坐骨神經(jīng)cAMP、cGMP檢測大鼠在麻醉狀態(tài)下，切開雙側(cè)股后部皮膚，分離出雙側(cè)坐骨神經(jīng)。剪下后快速放入干冰中保存。在冰浴環(huán)境下，將坐骨神經(jīng)放入盛有2 ml冷的0.05 mol/L醋酸緩沖液(pH 4.75)的勻漿器內(nèi)，將組織粉碎后，懸浮液倒入10 ml試管內(nèi)，用2 ml無水乙醇洗勻漿器，然后將乙醇倒入懸浮液中混勻，靜止5 min，3 500 r/min離心15 min，將上清液收集在小瓶內(nèi)，用2 ml 75%乙醇洗勻漿器和沉淀2次，混勻，3 500 r/min離心15 min，合并上清液，60℃水浴中吹干，殘渣放于4℃保存。嚴(yán)格按照試劑測定盒的要求檢測。

1.6統(tǒng)計學(xué)方法選用SPSS13.0軟件進行單因素方差分析和q檢驗。

2結(jié)果

2.1各組大鼠血液流變學(xué)變化與正常對照組相比，模型組、中藥組、彌可保組大鼠全血度、紅細胞聚集指數(shù)及剛性指數(shù)明顯升高(P<0.05)；與模型組相比，中藥組顯著差異，而彌可保組沒有顯著差異，見表1。

2.2各組大鼠坐骨神經(jīng)cAMP、cGMP含量的變化與模型組相比，中藥組動物的cAMP、cGMP含量明顯升高(P<0.05)；中藥組與彌可保組相比無顯著差異(P>0.05)，見表1。

表1　各組大鼠血液流變學(xué)及CAMP、CGMP變化的比較

與正常對照組比較：1)P<0.01，2)P<0.05；與模型組比較:3)P<0.01，4)P<0.05

3討論

DM存在著不同程度的血液流變學(xué)改變。研究表明，DPN時神經(jīng)血流灌注減少且神經(jīng)內(nèi)膜缺氧，神經(jīng)微血管也有不同程度的病變發(fā)生，這些異常變化的程度與神經(jīng)病理變化和臨床癥狀程度極為相關(guān)。

cAMP、cGMP廣泛存在于動物機體的各種組織中。cAMP具有各種調(diào)節(jié)功能，神經(jīng)組織中cAMP、cGMP含量下降的同時，Na+-K+-ATP酶的活性也降低，將影響神經(jīng)的正常動作電位，使神經(jīng)傳導(dǎo)速度減慢。cGMP信號的產(chǎn)生是鳥苷酸環(huán)化酶(GC)催化的，其中的一類胞內(nèi)可溶性環(huán)化酶與NO的傳導(dǎo)有關(guān)，NO有使血管舒張的作用〔9〕。

益氣活血通絡(luò)方由黃芪、水蛭、葛根、生地組成。研究表明，黃芪可擴張血管，改善血行增強機體免疫力；水蛭可抗血栓形成、抗凝血、降血脂、改善血液流變學(xué)和微循環(huán)；葛根可改善微循環(huán)、擴張血管、增加血流、提高局部血流量。本研究結(jié)果表明，DM大鼠血液流變性及坐骨神經(jīng)cAMP、cGMP含量變化。血液流變性改變表現(xiàn)為血黏度升高，紅細胞聚集指數(shù)及剛性指數(shù)發(fā)生變化。血液流變性變化的同時伴隨神經(jīng)組織中cAMP、cGMP含量降低，證實了二者的相關(guān)性。

益氣活血通絡(luò)方能改善DM大鼠血液流變性，升高神經(jīng)組織中cAMP、cGMP含量，可能是其促進神經(jīng)軸突的再生和修復(fù)的作用及機制之一。

4參考文獻

1苗述楷，蔡惠文.糖尿病并發(fā)癥防治學(xué)〔M〕.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2000：4.

2張文風(fēng).益氣活血通絡(luò)法對糖尿病大鼠血清胰島素、C肽的影響〔J〕.湖南中醫(yī)雜志，2008；24(6)：98-9.

3張文風(fēng).益氣活血通絡(luò)法防治糖尿病周圍神經(jīng)病變的實驗研究〔J〕.中醫(yī)藥信息，2008；6：24-5.

4張文風(fēng)，蘇鑫，粟栗.糖尿病大鼠坐骨神經(jīng)AGEs的表達及益氣活血通絡(luò)方的干預(yù)研究〔J〕.上海中醫(yī)藥雜志，2010；44(3)：25-6.

5張文風(fēng)，樸今哲，蘇鑫，等.從血液流變學(xué)和神經(jīng)傳導(dǎo)速度評價益氣活血通絡(luò)法對糖尿病周圍神經(jīng)病變的干預(yù)作用〔J〕.時珍國醫(yī)國藥，2010；21(2)：686-8.

6李鐵成，張文風(fēng).糖尿病大鼠坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度與其超微結(jié)構(gòu)的相關(guān)性及益氣活血通絡(luò)中藥的干預(yù)研究〔J〕.時珍國醫(yī)國藥，2010；21(7)：1657-9.

7張文風(fēng)，鐘慧群，汪勤.糖尿病大鼠坐骨神經(jīng)細胞凋亡及其調(diào)控基因的表達及益氣活血通絡(luò)方的干預(yù)研究〔J〕.時珍國醫(yī)國藥，2011；22(4)：1121-3.

8鐘慧群，張文風(fēng)，蘇鑫，等.糖尿病大鼠糖化血清蛋白與AGES的相關(guān)性及中藥的干預(yù)作用〔J〕.時珍國醫(yī)國藥，2011；22(6)：1453-5.

9孫大業(yè).細胞信號傳導(dǎo)〔M〕.第3版.北京：科技出版社，2003：124.

〔2014-10-17修回〕

(編輯李相軍/滕欣航)