投喂蠶豆對(duì)羅非魚(yú)肝損傷及非特異性免疫功能的影響

陳度煌

（福建省淡水水產(chǎn)研究所，福建福州 350002）

羅非魚(yú)是我國(guó)淡水養(yǎng)殖的主要水產(chǎn)品之一。研究表明，投喂蠶豆可使羅非魚(yú)肉質(zhì)變緊硬而爽脆，不易煮爛，切成魚(yú)絲不易拉斷，韌性和咀嚼性增加，風(fēng)味獨(dú)特，是改善羅非魚(yú)肉質(zhì)的一種獨(dú)特方式，有利于羅非魚(yú)加工和出口，顯著提高了養(yǎng)殖的經(jīng) 濟(jì) 效 益 （ 倫 峰 ，2006；Grigorakis 和 Alexis，2005）。而目前有關(guān)投喂蠶豆對(duì)魚(yú)體免疫力影響的研究卻鮮見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)用浸泡蠶豆、配合飼料飼養(yǎng)羅非魚(yú)，研究投喂蠶豆對(duì)羅非魚(yú)肝損傷及非特異性免疫功能的影響，以期為更合理使用蠶豆進(jìn)行肉質(zhì)脆化提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 試驗(yàn)用新吉富羅非魚(yú)（NEW GIFT，Oreochromis niloticus）由福建省淡水水產(chǎn)研究所榕橋試驗(yàn)基地提供，初始體重為 （118.62±10.28）g，每桶放養(yǎng) 10 尾。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)設(shè)兩個(gè)處理：試驗(yàn)組投喂浸泡蠶豆，對(duì)照組投喂配合飼料，每組設(shè)3個(gè)重復(fù)。餌料營(yíng)養(yǎng)水平測(cè)定值如表1所示。

表1 餌料營(yíng)養(yǎng)水平 %

1.3 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)在玻璃鋼圓桶中進(jìn)行，每個(gè)圓桶內(nèi)徑100 cm，高度90 cm，水深60～70 cm，使用小循環(huán)系統(tǒng)使其保持微流水狀態(tài)。試驗(yàn)開(kāi)始前，羅非魚(yú)用3%食鹽水消毒后放入暫養(yǎng)池，進(jìn)行為期7 d左右的適應(yīng)性馴化，待魚(yú)適應(yīng)后正式試驗(yàn)。采取固定人員專(zhuān)門(mén)管理：

（1）飼料和蠶豆嚴(yán)格按組投喂，投喂前將蠶豆于1%食鹽水中浸泡24 h。每日投餌2次，投喂時(shí)間一般為上午 7∶00 ～ 7∶30，下午 17∶00 ～ 17∶30。投飼量根據(jù)魚(yú)攝食狀況而定，一般為魚(yú)體重量的3%～4%，詳細(xì)記錄各組別的實(shí)際投餌量。

（2）每天定時(shí)測(cè)定水溫。溶解氧，記錄魚(yú)活動(dòng)情況，試驗(yàn)期間水溫維持在26.0～31.5℃，溶解氧5.0～ 7.0 mg/L.。

（3）試驗(yàn)用水為經(jīng)過(guò)曝氣的自來(lái)水，每天進(jìn)行加換水，排污，一般每天換水量在30%～40%，試驗(yàn)時(shí)間為60 d。

1.4 樣品采集 試驗(yàn)期滿(mǎn)羅非魚(yú)禁食24 h后，參考白潔（2008）的方法適當(dāng)修改，每桶取樣5尾，用一次性注射器進(jìn)行心臟采血，置于1.5 mL離心管內(nèi)，于室溫下靜置2 h，然后放到4℃冰箱16 h，再以2500 r/min離心析出血清，-40℃保存，備用待測(cè)。

1.5 測(cè)定指標(biāo)和方法 天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、腺苷脫氨酶（ADA）、乳酸脫氫酶 （LDH）、 酸性磷酸酶 （ACP）、 堿性磷酸酶（AKP）、髓過(guò)氧化物酶（MPO）、溶菌酶（LSZ）均采用試劑盒測(cè)定，測(cè)試盒購(gòu)自南京建成科技有限公司，具體操作方法及計(jì)算方法參照試劑盒說(shuō)明書(shū)。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析 試驗(yàn)結(jié)果采用 “平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。用SPSS 17.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，顯著性水平為0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 投喂蠶豆對(duì)羅非魚(yú)肝損傷的影響 由表2可見(jiàn)，投喂蠶豆組的羅非魚(yú)血清AST、ALT和ADA活性分別較對(duì)照組提高13.67%、12.93%、19.12%（P ＜ 0.05），LDH 活性無(wú)顯著變化（P ＞ 0.05）。

表2 投喂蠶豆對(duì)羅非魚(yú)肝損傷的影響

2.2 投喂蠶豆對(duì)羅非魚(yú)非特異性免疫功能的影響 由表3可見(jiàn)，投喂蠶豆組的血清ACP和AKP活性與對(duì)照組相比，分別降低22.96%、19.70%（P＜0.05），MPO和LSZ活性雖也下降，但差異不顯著（P＞0.05），說(shuō)明長(zhǎng)期投喂蠶豆一定程度上降低了羅非魚(yú)非特異性免疫功能。

表3 投喂蠶豆對(duì)羅非魚(yú)非特異性免疫功能的影響

3 討論

3.1 投喂蠶豆對(duì)羅非魚(yú)肝損傷的影響 天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）和丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）是水產(chǎn)動(dòng)物血清中兩種重要的轉(zhuǎn)氨酶。在正常代謝過(guò)程中，血清中AST和ALT活性值都會(huì)維持一定水平，當(dāng)機(jī)體組織中毒、發(fā)生病變，或者受損傷的組織范圍較大，可引起血清中AST和ALT濃度上升，活性突然持續(xù)性增強(qiáng)。當(dāng)肝細(xì)胞受到外來(lái)物質(zhì)的損傷時(shí)，細(xì)胞膜的通透性加大，大量ALT和AST滲入血液，肝的ALT和AST活性明顯下降，而血液中ALT和AST活性升高（陳鵬飛等，2005）。血清腺苷脫氨酸（ADA）主要來(lái)源于肝臟，因其為肝細(xì)胞的胞漿酶，所以任何原因所造成的肝細(xì)胞損傷，其肝細(xì)胞膜的通透性均會(huì)增強(qiáng)，致使血清中的ADA酶的活性升高，故該酶可以作為反映肝實(shí)質(zhì)損傷的指標(biāo)。乳酸脫氫酶（LDH）是糖的無(wú)氧酵解和糖異生的重要酶系之一，廣泛存在于心臟、肝臟、肺以及其他各組織內(nèi)，組織一經(jīng)損傷血清中該酶即見(jiàn)升高，肝細(xì)胞損傷或者壞死后，會(huì)向血液釋入大量的 LDH（賀麗虹等，2004；惠天朝等，2000）。

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，投喂蠶豆使得魚(yú)體血清中肝損傷指標(biāo)AST、ALT和ADA活性顯著上升，可能是肝細(xì)胞膜功能的完整性遭到破壞，影響膜的流動(dòng)性和其他各項(xiàng)功能，進(jìn)而損害了羅非魚(yú)肝臟功能，這可能是蠶豆中的某種特殊化學(xué)因子起作用導(dǎo)致的。而LDH活性在試驗(yàn)期內(nèi)與對(duì)照組相比變化不大，原因有待進(jìn)一步研究。

3.2 投喂蠶豆對(duì)羅非魚(yú)非特異性免疫功能的影響 魚(yú)類(lèi)為較低等變溫脊椎動(dòng)物，其特異性免疫應(yīng)答相對(duì)低下，而非特異性免疫系統(tǒng)在其防御病原體感染中具有非常重要的意義 （Tonya等，2000）。 酸性磷酸酶（ACP）、堿性磷酸酶（AKP）、髓過(guò)氧化物酶（MPO）、溶菌酶（LSZ）是評(píng)價(jià)魚(yú)類(lèi)非特異性免疫力的常用指標(biāo)。其中，ACP是水產(chǎn)動(dòng)物體內(nèi)公認(rèn)的巨噬細(xì)胞溶酶體的標(biāo)志酶，在體內(nèi)直接參與磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)移和代謝，其活力的高低反映了巨噬細(xì)胞的激活程度（李麗娟等，2013）。同時(shí)，ACP也是吞噬溶酶體的重要組成部分，在血細(xì)胞進(jìn)行吞噬和包囊反應(yīng)時(shí)，會(huì)釋放酸性磷酸酶。

AKP是磷酸酶的一種，血清中的AKP主要來(lái)源于肝臟和骨骼，能將對(duì)應(yīng)底物去磷酸化，生成磷酸根離子和自由的羥基，直接參與磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)移，以及鈣磷代謝。堿性磷酸酶能夠通過(guò)改變病原體的表面結(jié)構(gòu)，增強(qiáng)機(jī)體對(duì)病原體的識(shí)別和吞噬能力，起調(diào)理素的作用，加速吞噬細(xì)胞的吞噬和病原體的降解速度，進(jìn)而提高魚(yú)體的抗病力，可作為機(jī)體免疫標(biāo)志酶（王玲等，2008）。

MPO是魚(yú)體內(nèi)一種重要的氧化酶，它是由中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和某些組織的巨噬細(xì)胞分泌的血紅素蛋白酶，主要存在于嗜中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞中。吳越等（2005）研究表明，MPO能催化過(guò)氧化氫與氯反應(yīng)，產(chǎn)生次氯酸，具有很強(qiáng)的抗微生物作用，可直接影響機(jī)體的免疫功能。

LSZ是水產(chǎn)動(dòng)物體內(nèi)一種重要的非特異性免疫因子，存在于魚(yú)體的吞噬細(xì)胞和血清中，對(duì)病原體有重要的防御作用。溶菌酶在機(jī)體免疫過(guò)程中，通過(guò)催化水解細(xì)菌細(xì)胞壁黏肽的乙酰胺基多糖，導(dǎo)致細(xì)菌裂解死亡。同時(shí)能清除其他抗菌因子作用后所殘余的細(xì)菌細(xì)胞壁，并增強(qiáng)其他免疫因子的抗菌敏感性，誘導(dǎo)調(diào)節(jié)其他免疫因子的合成與分泌，共同抵制外來(lái)病原的入侵 （葉丹和連賓，2003）。魚(yú)類(lèi)血清溶菌酶活力的高低是衡量機(jī)體免疫狀態(tài)的指標(biāo)之一。血清溶菌酶活力提高，其免疫能力也相應(yīng)提高。相反，魚(yú)類(lèi)血清溶菌酶的活性降低，機(jī)體免疫力降低。

本試驗(yàn)中，與普通配合飼料相比，用浸泡蠶豆投喂羅非魚(yú)后，魚(yú)體的非特異性免疫力降低，特別是ACP和AKP指標(biāo)顯著降低，可能是由于蠶豆適口性差，以及抗?fàn)I養(yǎng)因子（蛋白酶抑制劑、單寧等）的存在。用蠶豆作為單一餌料脆化羅非魚(yú)肉質(zhì)，魚(yú)體攝食量減少，營(yíng)養(yǎng)不平衡，胃腸道各種消化酶活力降低，對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收及利用能力也降低，使得脆化期間魚(yú)體所需營(yíng)養(yǎng)得不到滿(mǎn)足，從表觀上看，魚(yú)體的生長(zhǎng)受到抑制，同時(shí)，各種非特異性免疫酶的合成和分泌受到了抑制，降低了魚(yú)體的免疫力，削弱了魚(yú)體的抗病能力。而MPO和LSZ活性雖也有下降趨勢(shì)，但差異不顯著，原因可能是試驗(yàn)時(shí)間還不夠長(zhǎng)，有條件的話，將做重復(fù)試驗(yàn)，延遲試驗(yàn)時(shí)間至90 d。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，以浸泡蠶豆飼養(yǎng)新吉富羅非魚(yú)，雖可明顯脆化羅非魚(yú)肉質(zhì)，但卻一定程度上造成魚(yú)體肝臟的損害，降低魚(yú)體非特異性免疫功能。

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