高氏舒筋丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

曲艷麗 王洪瑩

（長春市食品藥品檢驗所，吉林 長春 130012）

高氏舒筋丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

曲艷麗 王洪瑩

（長春市食品藥品檢驗所，吉林 長春 130012）

目的建立高氏舒筋丸的質(zhì)量控制方法。方法采用TLC方法對處方中的三七、赤芍進行了定性鑒別；采用了HPLC方法測定士的寧的含量。結(jié)果薄層色譜中斑點清晰，易于識別；士的寧線性范圍為0.293～2.929 μg，r=0.9997（n=5），平均回收率為98.8%，RSD=1.1%。結(jié)論該方法可準(zhǔn)確地進行定性、定量檢測，能有效的控制該制劑的質(zhì)量。

高氏舒筋丸；薄層色譜法；高效液相色譜法；士的寧

高氏舒筋丸系長春德惠骨外傷醫(yī)院的多年驗方，是由三七、赤芍、馬錢子粉、杜仲、香加皮等多味藥組成的中藥丸劑，具有舒筋活絡(luò)之功效，用于各種肌腱、韌帶及軟組織損傷，臨床治療效果顯著。為保證療效，更好地控制藥品質(zhì)量，長春德惠骨外傷醫(yī)院委托筆者研究制定了此制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。本文采用薄層色譜法對制劑中三七、赤芍進行了鑒別；采用HPLC法對馬錢子粉中的士的寧含量進行了測定。結(jié)果表明該法對高氏舒筋丸的質(zhì)量控制有實際意義。

1 儀器與材料

DIONEX高效液相色譜儀（美國戴安公司，配有UVD107U紫外檢測器）； KQ-300VDE雙頻數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

士的寧對照品（批號：110705-200306，純度以97%計，供含量測定用）、三七對照藥材（批號：120941-200506）、芍藥苷對照品（批號：110736-201337）、以上對照品、對照藥材均由中國食品藥品檢定研究院提供。

高氏舒筋丸樣品（規(guī)格：9 g，批號：130901、130902、130903）、陰性樣品均由長春德惠骨外傷醫(yī)院提供，乙腈為色譜純、水為超純水，庚烷磺酸鈉與磷酸二氫鉀等其他試劑均為分析純。

2 定性鑒別

2.1 三七的薄層色譜鑒別：取本品2丸，剪碎，加硅藻土適量，研勻，加水飽和正丁醇100 mL，超聲處理40 min，濾過，濾液加正丁醇飽和的水洗滌3次，每次40 mL，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。另取三七對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。再取除去三七藥材的陰性樣品，制成陰性樣品溶液。吸取上述兩種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（15∶40∶22∶10）10 ℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點顯色清晰。陰性對照無干擾。結(jié)果見圖1。

2.2 赤芍的薄層色譜鑒別：取本品1丸，剪碎，加硅藻土適量，研勻，加甲醇60 mL，加熱回流提取60 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20 mL使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取3次，每次25 mL，提取液再用正丁醇飽和的水洗滌2次，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶10∶5∶0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫溶液，105 ℃加熱至斑點顯色清晰。陰性對照無干擾。結(jié)果見圖2。

圖1 三七TLC圖

圖2 赤芍TLC圖

3 含量測定[1]

3.1 色譜條件。色譜柱：Agilent公司色譜柱(ZORBAX SB-C18，4.6 mm ×250 mm，5 μm)；流動相：乙腈-0.01 mol/L庚烷磺酸鈉與0.02 mol/L磷酸二氫鉀等量混合溶液（用10%磷酸調(diào)節(jié)pH值為2.8）（19∶81）；檢測波長260 nm，流速為1.0 mL/min。進樣量：10 μL。

3.2 對照品溶液的制備：取士的寧對照品約10 mg，精密稱定，置10 mL量瓶中，加三氯甲烷適量使溶解，并稀釋至刻度，搖勻。精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

圖3 高氏舒筋丸HPLC色譜圖

表1 加樣回收率試驗結(jié)果

表2 樣品含量測定結(jié)果（n=3）

3.3 供試品溶液的制備：取重量差異項下的本品適量，剪碎，混勻，取約8 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加氫氧化鈉試液3 mL，混勻，放置30 min，精密加入三氯甲烷50 mL，密塞，稱定重量，置水浴上回流提取2 h，放冷，再稱定重量，用三氯甲烷補足減失的重量，搖勻，濾過，用三氯甲烷30 mL分次洗滌濾渣及濾器，合并三氯甲烷液，置分液漏斗中，用1%硫酸溶液振搖提取5次（30、30、20、20、20 mL），合并酸液，用30%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至10～11，用三氯甲烷振搖提取5次（30、30、20、20、20 mL），合并三氯甲烷液，回收至干，殘渣加甲醇適量使溶解，轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

3.4 陰性對照溶液的制備：取不含馬錢子粉的陰性樣品，依3.3項下方法制備，即得。

3.5 空白干擾實驗：精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10 μL，分別注入液相色譜儀，同法測定，結(jié)果在士的寧峰相應(yīng)的位置上，陰性對照無干擾，結(jié)果見圖3。

同時必須重新審視耕地功能，把握耕地生產(chǎn)—生態(tài)的功能性演變規(guī)律，保護耕地多元化功能。需要貫徹區(qū)域經(jīng)濟社會的可持續(xù)發(fā)展的理念，科學(xué)、動態(tài)的認識耕地的多功能性，樹立耕地綜合價值觀。耕地多功能性保護不僅強調(diào)了耕地利用的合理方向，也增強了嚴(yán)格保護耕地的說服力和行動能力。

3.6 線性關(guān)系考察：精密稱取士的寧對照品7.55 mg，置10 mL量瓶中，加三氯甲烷適量使溶解，并稀釋至刻度，搖勻。精密量取2 mL，置10 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得，作為對照品溶液。精密吸取對照品溶液2、5、10、15、20 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積為縱坐標(biāo)，進樣量（μg）為橫坐標(biāo)，測得回歸方程為Y=2769.7 X-2.2479，r=0.9997（n=5）。

3.7 精密度試驗：取同一對照品溶液，按正文色譜條件連續(xù)進樣6次，測得峰面積，計算，其RSD=0.1%，表明精密度良好。

3.8 重復(fù)性試驗：取批號130903的樣品6份，按3.3項下方法制成供試品溶液，測定，結(jié)果RSD=1.6%。表明本品測定方法重復(fù)性良好。

3.9 穩(wěn)定性試驗：精密吸取同一供試品溶液10 μL，分別在0、4、8、12、24 h測定峰面積，結(jié)果RSD=1.1%，表明供試品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.10 加樣回收率試驗：精密稱取批號為130901的樣品約4 g（已知含量為0.60毫克/丸）6份，每份分別精密加入對照品貯備液（0.574 mg/mL）0.5 mL，按正文方法制備及測定。結(jié)果見表1。

結(jié)果樣品的平均回收率為98.8%（n=6），表明本法準(zhǔn)確度較好。

3.11 樣品含量測定：取樣品，按3.3項下方法制備供試品溶液，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，按上述色譜條件測定，以外標(biāo)法（峰面積）計算樣品中士的寧含量。結(jié)果見表2。

4 討 論

4.1 馬錢子粉為方中主要藥味，其主要化學(xué)成分為士的寧、馬錢子堿等生物堿[2]，其中士的寧約占總堿的35%～55%[3]，有通絡(luò)止痛、散結(jié)消腫之功效，用于跌打損傷，骨折腫痛，風(fēng)濕頑痹，麻木癱瘓，癰疽瘡毒，咽喉腫痛[4]，但有毒，為保證療效及用藥安全，故制定了處方中馬錢子粉的含量測定方法，以士的寧為測定指標(biāo)。曾參考中國藥典2010年版一部[4]，取樣品加入氫氧化鈉試液3 mL，混勻，放置30 min后精密加入三氯甲烷50 mL，置水浴上回流提取2 h，蒸干后定容至5 mL量瓶，過濾后，取10 μL進入高效液相色譜儀進行測定。結(jié)果，士的寧層析附近有干擾峰，更換多個品牌的色譜柱也分離不開。改用3.3項下的供試品制備方法，去除了雜質(zhì)干擾，高效液相色譜分離度達到了要求。

4.2 曾經(jīng)對藥方中的杜仲、香加皮等多味藥味進行薄層鑒別，因投料比例較小，薄層效果不好，或陰性有干擾，或斑點不清晰，故未收入此研究標(biāo)準(zhǔn)中。

4.3 中藥材多在泥土中種植，重金屬及砷鹽易超出限度范圍，曾試驗增加“重金屬”檢查項目及“砷鹽”檢查項目。取三批樣品，參照中國藥典2010年版一部附錄Ⅸ E及Ⅸ 項下檢驗。在“重金屬”的檢查結(jié)果中，樣品管中顯出的顏色明顯淺于對照管；在“砷鹽”的檢查結(jié)果中，樣品的砷斑顏色明顯淺于標(biāo)準(zhǔn)砷斑，故未列入標(biāo)準(zhǔn)正文。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:一部[S].2005年版.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2005:637.

[2]肖培根,李大鵬,楊世林,等.新編中藥志[M].第二卷.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2002:80.

[3]趙陸華.中藥高效液相色譜法應(yīng)用[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2005:183.

[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:一部[S].2010年版.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:48.

Quality Standard of Gaoshishujin Pills

QU Yan-li, WANG Hong-ying
(Changchun Institute for Food and Drug Control, Changchun 130012, China)

ObjecticeTo establish a method for quality contrnl of Guoshi shujin Pills.MethodThe Notoginseng radix et rhizome, Paeoniae radix rubra in this medicine was identified by TLC; the content of Strychnine were mersured by HPLC.ResultThe stots in TLC were clear and well distinguished; The method was linear within a range of 0.293-2.929 μg of the Strychnine; r=0.9997(n=5), The average recovery was 98.8%, and RSD was 1.0%.ConclusionThe method is simple, sensitive, and accurate. It can be used to control the quality of Gaoshishujin Pills.

Gaoshishujin Pills; TLC; HPLC; Strychnine

R927.11

B

1671-8194（2015）05-0037-02