Leica ST5020全自動染色機(jī)在常規(guī)病理中的應(yīng)用

張 偉，彭大云，周永梅，賴?yán)m(xù)文

Leica ST5020全自動染色機(jī)在常規(guī)病理中的應(yīng)用

張 偉，彭大云，周永梅，賴?yán)m(xù)文

介紹了Leica ST5020全自動染色機(jī)在石蠟切片蘇木精－伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色及細(xì)胞學(xué)涂片巴氏染色中的應(yīng)用體會。根據(jù)Leica ST5020全自動染色機(jī)能夠針對石蠟切片和細(xì)胞學(xué)涂片編寫相應(yīng)的程序并進(jìn)行染色的原理以及全自動染色機(jī)智能化的設(shè)計(jì)，解決了以往傳統(tǒng)手工染色繁瑣、費(fèi)時費(fèi)力、質(zhì)量不穩(wěn)定等問題，提高了切片的染色質(zhì)量，有助于病理醫(yī)生做出準(zhǔn)確、快速的診斷。

全自動染色機(jī)；蘇木精－伊紅染色；巴氏染色

0 引言

隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展和自動化儀器應(yīng)用的普及，病理科常規(guī)染色從繁瑣的人工染色發(fā)展到全自動染色機(jī)批量產(chǎn)出。全自動組織切片染色機(jī)避免了人工染色中的隨意性、工作效率低、質(zhì)量不穩(wěn)定等因素的影響，逐漸為各大醫(yī)院病理科及相關(guān)實(shí)驗(yàn)室所接受并使用[1]。我科引進(jìn)Leica ST5020全自動染色機(jī)應(yīng)用于常規(guī)蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色及細(xì)胞學(xué)涂片巴氏染色，因其設(shè)計(jì)的工作環(huán)境及試劑質(zhì)量和國內(nèi)有一定的差異，開始使用時按照出廠設(shè)計(jì)，染色效果不盡如人意。在使用過程中我們根據(jù)國內(nèi)試劑標(biāo)準(zhǔn)和工作環(huán)境，摸索制定了新的染色程序及試劑的使用管理程序，切片的處理效率明顯提高，染色質(zhì)量效果穩(wěn)定，現(xiàn)將使用體會報告如下。

1 Leica ST5020全自動染色機(jī)

ST5020是德國Leica公司生產(chǎn)的全自動染色機(jī)，設(shè)備由軟、硬件2個部分組成，軟件系統(tǒng)通過彩色薄膜晶體管（thin film transistor，TFT）觸摸屏來實(shí)現(xiàn)各種程序的操作。各染色程序的設(shè)定通過不同顏色顯示在“程序”菜單，對不同的染色程序，儀器通過玻片入口處的感應(yīng)裝置自動感應(yīng)不同顏色的夾子后執(zhí)行相應(yīng)的染色程序。配有試劑管理系統(tǒng)，該系統(tǒng)日志列出了所有的試劑站點(diǎn)以及每一站點(diǎn)上分配的試劑及其運(yùn)行過程。試劑更換可根據(jù)染色架數(shù)目、天數(shù)設(shè)定試劑管理閾值，提高了試劑的利用率，尤其是在產(chǎn)出的樣本片數(shù)和連續(xù)加載容量上尤為突出，最少200片/h（依據(jù)程序最多可達(dá)900片/h），加載容量最大量可達(dá)12架（同時可擁有4種不同的染色程序）。硬件系統(tǒng)有機(jī)械臂、炭濾器和40個試劑站點(diǎn)，試劑容量為450 mL。在使用管理上，儀器設(shè)立了訪問級別、操作員和管理員，操作員只能操作儀器，管理員負(fù)責(zé)輸入密碼進(jìn)入管理級別、設(shè)定和更改操作程序。

2 使用方法

2.1 儀器與設(shè)備

德國Leica ST5020自動染色機(jī)和CV5030自動蓋片機(jī)及附帶設(shè)備。

2.2 試劑

改良Harris蘇木素[2]、1%醇溶性伊紅[2]、EA50染色液、80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇、無水乙醇、二甲苯、1%鹽酸乙醇、1%氨水、苯酚（石炭酸）二甲苯（1∶3）混合液。

2.3 方法

2.3.1 常規(guī)石蠟切片

HE染色[2-3]，石蠟切片厚3 μm，裱帖在載玻片上，在載玻片的磨砂面正確標(biāo)出組織塊的編號，放入染色機(jī)配套的玻片籃中，以紅色玻片籃配套頭為HE染色程序標(biāo)記，即可上機(jī)染色，程序見表1。

程序完成后自染色出口處取出切片，置入CV5030自動蓋片機(jī)中，使用中性樹膠封固。

2.3.2 脫落細(xì)胞學(xué)涂片巴氏染色

將涂片放入染色機(jī)配套的玻片籃中，以黃色玻片籃配套頭為巴氏染色程序標(biāo)記，即可上機(jī)染色[3]，程序見表2。

表1 常規(guī)石蠟切片HE染色

表2 脫落細(xì)胞學(xué)涂片巴氏染色

程序完成后自染色出口處取出切片，置入CV5030自動蓋片機(jī)中，使用中性樹膠封固。

3 結(jié)果

石蠟切片HE染色及脫落細(xì)胞學(xué)涂片巴氏染色透明性好、鮮艷、均勻、胞核和胞質(zhì)著色良好、對比清晰。

4 討論

4.1 病理制片質(zhì)量開始標(biāo)準(zhǔn)化

隨著病理切片質(zhì)量控制的深入開展，病理制片質(zhì)量逐漸標(biāo)準(zhǔn)化。傳統(tǒng)的組織切片染色多為人工處理，常靠經(jīng)驗(yàn)控制，操作繁瑣、費(fèi)時費(fèi)力，受人為因素影響較大，逐漸被自動染色機(jī)所代替。全自動組織切片染色機(jī)通過計(jì)算機(jī)的精確編程設(shè)計(jì)，處理程序操作，確保了切片染色質(zhì)量的高效、穩(wěn)定，同時降低了工作強(qiáng)度，大大改善了工作環(huán)境，避免了病理技術(shù)員長期接觸有害的二甲苯[4]。病理切片水平由傳統(tǒng)的經(jīng)驗(yàn)控制轉(zhuǎn)變?yōu)榭茖W(xué)的質(zhì)量控制。自動染色機(jī)和自動蓋片機(jī)能讓操作者在進(jìn)行切片、貼片的同時，自動完成染色蓋片[5]。每個玻片籃可放置30張載玻片，每張載玻片上可裱貼2個組織塊切片，可進(jìn)行大批量玻片的染色，而且可同時設(shè)制多個染色程序，石蠟切片HE染色與脫落細(xì)胞學(xué)的巴氏染色2種不同的染色程序可同時進(jìn)行，總體效率得到了提高。染色機(jī)的各步驟由計(jì)算機(jī)控制，各步驟所設(shè)定時間精準(zhǔn)，在計(jì)算機(jī)程序設(shè)定控制下，自動感應(yīng)染色架上不同顏色的夾子，執(zhí)行相應(yīng)的染色程序，不會因操作者的不同而出現(xiàn)明顯的波動[6]。染色機(jī)的機(jī)械臂起落都相對平穩(wěn)緩慢，減少了試劑間的相互污染，水流沖洗環(huán)節(jié)的水通過底部的自動出水閥平緩控制水壓，使流水自下而上地平穩(wěn)流出，而且溢水口設(shè)在上端，底部流水沖洗更加徹底，幾乎不會出現(xiàn)掉片現(xiàn)象，染色效果更穩(wěn)定。染色蓋片的過程中，對人體影響最大的是二甲苯，由于染色機(jī)和蓋片機(jī)的操作是在相對封閉的狀態(tài)下，而且通過裝有炭濾器的排氣口，減少了有毒氣體對工作環(huán)境的污染，安全性較好。

4.2 試劑使用

為保證切片良好的染色對比度，我們采用改良Harris蘇木素作為細(xì)胞核染液。優(yōu)點(diǎn)是試劑配后即可使用，染色力強(qiáng)，染色時間只需5 min。細(xì)胞核返藍(lán)上增加了1%氨水，縮短了流水返藍(lán)的時間。胞漿染色采用1%乙醇伊紅，染色時間短、色彩鮮艷。為防止切片脫水不充分，我們在酒精和二甲苯之間設(shè)置了1∶3的苯酚二甲苯，這樣避免了南方因天氣潮濕切片模糊發(fā)白的現(xiàn)象，增加了切片脫水透明的效果。細(xì)胞學(xué)涂片染色采用巴氏染色，染色具有多色性，適用于上皮細(xì)胞染色，尤其適于觀察鱗狀上皮細(xì)胞的分化程度以及陰道涂片觀察女性激素水平。

4.3 試劑更換

每天開機(jī)前定時檢查試劑量，根據(jù)試劑管理系統(tǒng)日志，失效試劑須及時更換[7]。根據(jù)我科試劑管理的具體情況設(shè)定天數(shù)，蘇木素每2周過濾1次，每月更換；伊紅每周用中性濾紙過濾后，加入等量的新的染液后繼續(xù)使用，可連續(xù)使用5～6周；脫蠟的二甲苯及水化的梯度乙醇每周全部更換；脫水透明的液體更換可采用前移法，即廢棄第一缸乙醇或二甲苯，將后面的依次前移，只在最后一缸相應(yīng)的乙醇或二甲苯槽中加入新的液體；蒸餾水須每日更新。為保證流水沖洗的質(zhì)量，我們設(shè)定專門的流水沖洗程序，每天染色前完成該程序，保證每個沖水槽都流水通暢，保證染色質(zhì)量。

4.4 儀器的保養(yǎng)

機(jī)器外部每天進(jìn)行常規(guī)的清潔，每天染色結(jié)束后，內(nèi)部染色缸之間的溢液應(yīng)及時用紗布吸干后再用酒精擦拭，水洗槽應(yīng)每日將水放盡。每周清掃一次裝置的染液臺架，取出染液槽時，注意各槽的槽位置，打掃后放回原處，用抹布擦拭。水槽底部的進(jìn)水孔每周用毛刷清洗干凈，排水孔每周清洗，防止生霉、堵塞，影響染色質(zhì)量。一般每2個月全面清潔一次染色機(jī)，定時更換碳濾器?？傊瑱C(jī)器的維護(hù)與保養(yǎng)不可忽視，必要時應(yīng)與廠家服務(wù)人員聯(lián)系進(jìn)行專業(yè)維護(hù)與保養(yǎng)[8-9]。

（????）（????）

[1]馬恒輝，章如松，周航波，等.全自動染色機(jī)在常規(guī)染色中的應(yīng)用[J].中華病理學(xué)雜志，2006，35（3）：183-184.

[2]龔志錦，詹镕洲.病理組織制片和染色技術(shù)[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1994：48-53.

[3]Carson F L，Hladik C.Histotechnology：a self-instructional text[M]. 2nd ed.Chicago：American Socity of Clinical Pathologists Press，1996：86-87.

[4]劉泳冬，董愉，車麗洪.全自動染色機(jī)在常規(guī)HE染色中的應(yīng)用體會[J].實(shí)用醫(yī)技雜志，2007，14（12）：1 585-1 586.

[5]孔靜萍，王紅衛(wèi)，張雯靜，等.Leica自動染色機(jī)蓋片機(jī)的使用體會[J].現(xiàn)代實(shí)用醫(yī)學(xué)，2008，20（6）：482.

[6]胡維維，李廣民，段光榮，等.研制改造全自動病理組織染色機(jī)[J].診斷病理學(xué)雜志，2000，7（4）：74.

[7]董芳，姜衛(wèi)國，趙曉東.HE自動染色機(jī)應(yīng)用體會[J].中華病理學(xué)雜志，2004，33（2）：179-180.

[8]王伯云，李玉松，黃高昇，等.病理學(xué)技術(shù)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：130-140.

[9]張秀智，趙煥芬，徐明堂，等.全自動染色機(jī)染色過程中伊紅染液的應(yīng)用體會[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2013，29（2）：218-219.

（收稿：2014-07-17 修回：2014-10-20）

（欄目責(zé)任編校:李 影）

Application of Leica ST5020 automatic staining machine in pathological staining

ZHANG Wei,PENG Da-yun,ZHOU Yong-mei,LAI Xu-wen
(Department of Pathology,Guangzhou General Hospital of Guangzhou Military Area Command,Guangzhou 510010,China)

The experience of applying leica ST020 staining machince to HE staining and Pap staining of cytologic smear was introduced.Leica ST5020 automatic staining machine can realize HE staining of paraffin section and Pap staining of cytologic smear,with corresponding procedures prepared for the staining of paraffin section and cytologic smear.The implementation of automatic and intelligent staining eliminates the defects due to manual operation,and thus contributes to the rapid and accurate diagnosis by the pathologist.[Chinese Medical Equipment Journal，2015，36（6）：127-128，139]

automatic staining machine;HE staining;Pap staining

R318.6；TH776

A

1003-8868（2015）06-0127-03

10.7687/J.ISSN1003-8868.2015.06.127

張 偉（1972—），男，主管技師，主要從事臨床病理技術(shù)方面的研究工作，E-mail:ZW54177@126.com。

510010廣州，廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院病理科（張 偉，彭大云，周永梅，賴?yán)m(xù)文）