江西野生白花鳳仙花組培快繁技術(shù)研究

廖忠明，李丹丹，張付遠(yuǎn)，鐘曉紅，劉良源

(1.江西環(huán)境工程職業(yè)學(xué)院，江西贛州341000;2.江西省林業(yè)有害生物防治檢疫局，江西南昌330077)

白花鳳仙花(White Impatiens balsamina)原記載特產(chǎn)四川峨眉山，生于海拔1 000 m以下溝邊或小溪邊潮濕草地。鳳仙花科僅有水角屬(Hydrocera BI)和鳳仙花屬(Impatiens L)2個屬，全世界有900余種。主要分布于亞洲熱帶和亞熱帶及非洲，少數(shù)種在歐洲，亞洲溫帶地區(qū)及北美洲也有分布。水角屬為單種屬，產(chǎn)于印度和東南亞，鳳仙花屬是本科中最大的屬。我國2屬均產(chǎn)，已知有220余種［1］。

2012年江西省科技支撐計劃項(xiàng)目“野鳳仙分子生物學(xué)研究與市場開發(fā)”(20112BBF60048)課題組在江西省宜春市銅鼓縣大溈山實(shí)地考察時發(fā)現(xiàn)一種鳳仙花屬植物，并拍攝生境，采回標(biāo)本，經(jīng)查對確認(rèn)為白花鳳仙花［2］，該種在此以前尚未有報道，系江西新記錄。其植株緊密，花朵大，顏色鮮艷，生長快且整齊，珍稀奇特，適合盆栽及綠化使用。由于種質(zhì)資源較少，致使生產(chǎn)受到制約;同時常規(guī)的栽培方式易引起植物種質(zhì)退化，繁殖系數(shù)降低及感染病毒、病害等問題。而組培快繁具有提高苗木質(zhì)量，使品種純化，繁殖系數(shù)高，繁殖速度快等優(yōu)點(diǎn)。筆者通過對江西野生白花鳳仙花組培快繁研究，以期為江西野生白花鳳仙花種質(zhì)資源保存和優(yōu)質(zhì)種苗的工廠化生產(chǎn)提供技術(shù)參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 將江西省宜春市銅鼓縣大溈山野生白花鳳仙花移植至江西環(huán)境工程職業(yè)學(xué)院溫室內(nèi)，待其長出新枝后，剪去帶有頂芽和腋芽的莖段，去掉葉片，先用自來水沖洗40 min，再用洗潔精清洗表面浮塵。在無菌條件下用75%乙醇消毒10 s，無菌水沖洗2次，0.1%氯化汞消毒3～5 min，再用無菌水沖洗5次。將處理好的材料切成約2cm并帶有1個芽的莖段接種到預(yù)先配制好的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 不同基本培養(yǎng)基對江西野生白花鳳仙花誘導(dǎo)和生根的影響。將滅菌好的帶有頂芽和腋芽的白花鳳仙花莖段接種到不同基本培養(yǎng)基內(nèi)，基本培養(yǎng)基分別為MS、1/2MS、1/4MS，瓊脂0.7%，白砂糖 2.5%，附加激素，pH 5.8 左右，121℃高溫滅菌20 min。培養(yǎng)溫度(25±2)℃，光照1 500～2 000 lx，光照時間 8 h/d。

1.2.2 不同濃度激素對江西野生白花鳳仙花誘導(dǎo)分化的影響。將滅菌好的帶有頂芽和腋芽的白花鳳仙花莖段接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基內(nèi)，培養(yǎng)基為 MS+6-BA 2.0～4.0 mg/L+NAA 0.3 ～0.8 mg/L，瓊脂 0.7%，白砂糖 2.5%，pH 5.8 左右，121℃高溫滅菌20 min。培養(yǎng)條件同“1.2.1”。通過改變6-BA和NAA的濃度，共為6個處理(每個處理接種3瓶，每瓶接種5個芽)，篩選最佳的誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基配方。

1.2.3 不同濃度激素對江西野生白花鳳仙花生根的影響。不定芽伸長至3～5 cm時，自基部切下，接種到生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基為 MS+NAA 0.1 ～2.0 mg/L+IBA 0.2 ～0.6 mg/L，培養(yǎng)基均加入瓊脂粉0.7%，pH6.0左右，共設(shè)8個處理，每處理接種15瓶，每瓶接種15株，培養(yǎng)條件同“1.2.1”，以篩選最佳的生根培養(yǎng)基。

1.3 統(tǒng)計標(biāo)準(zhǔn) 分化率=分化莖段數(shù)/接種段數(shù)×100%

增殖倍數(shù)=分化不定芽數(shù)量/接種數(shù)

生根率=生根苗數(shù)/接種段數(shù)×100%

2 結(jié)果與分析

2.1 不同培養(yǎng)基對江西野生白花鳳仙花誘導(dǎo)分化和生根的影響 由表1可知，以MS培養(yǎng)基誘導(dǎo)效果最佳，1/2MS次之，1/4MS效果最差。芽繁殖倍率:MS培養(yǎng)基最高可達(dá)5.02倍，比1/4MS培養(yǎng)基高51.5%。苗的生長高度:MS培養(yǎng)基的苗生長量比1/2MS培養(yǎng)基提高了21.2%，比1/4MS培養(yǎng)基提高了13.0%。根的條數(shù):3種培養(yǎng)基的影響結(jié)果差異不明顯，因此，使用MS培養(yǎng)基時不宜減量。

2.2 不同濃度激素對江西野生白花鳳仙花誘導(dǎo)分化的影響 由表2可知，培養(yǎng)15 d時，7種處理有些開始分化出不定芽，30 d后7個處理中以處理②6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.4 mg/L為最佳，分化出的不定芽為叢生狀，且多達(dá)81個小芽，生長粗壯，分化率達(dá)93%，增殖倍數(shù)4。其次是處理③6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L，不定芽總數(shù) 89個，生長粗壯，分化率達(dá)100%，增殖倍數(shù)5.4，但芽較細(xì)弱。表明，芽的誘導(dǎo)和分化與6-BA、NAA濃度有密切關(guān)系，一定量的6-BA、NAA對不定芽的誘導(dǎo)和分化有促進(jìn)作用。

表1 不同培養(yǎng)基對江西野生白花鳳仙花誘導(dǎo)分化和生根的影響

表2 不同濃度激素對江西野生白花鳳仙花誘導(dǎo)分化的影響

2.3 不同濃度激素對江西野生白花鳳仙花生根的影響 由表3可知，培養(yǎng)20 d時，8種處理有些開始分化出不定芽并開始生根，60 d后8個處理中以處理⑦IBA 0.6 mg/L+NAA 1.0 mg/L的效果最佳，生根率最高，根數(shù)最多，根長最長，苗和根長勢最好，其次是處理⑥IBA 0.6 mg/L+NAA 0.5 mg/L。表明，根的生長和苗的增殖與IBA、NAA濃度有密切關(guān)系，IBA、NAA的濃度比例對生根和苗的增殖影響較大。

表3 不同濃度激素對江西野生白花鳳仙花生根的影響

3 結(jié)論與討論

該研究結(jié)果表明，江西野生白花鳳仙花誘導(dǎo)分化與生根的最佳基本培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基;誘導(dǎo)分化效果最佳培養(yǎng)基為 MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.4 mg/L，分化出的不定芽為叢生狀，且達(dá)81個小芽，生長粗壯，分化率達(dá)93%，增殖倍數(shù)4;生根培養(yǎng)效果最佳培養(yǎng)基為MS+IBA 0.6 mg/L+NAA 1.0 mg/L，生根率最高，根數(shù)最多，根長最長，苗和根長勢最好。目前對鳳仙花的組培研究較少，而白花鳳仙花尚未見報道。該試驗(yàn)材料于2012年在江西首次發(fā)現(xiàn)，該研究對于該野生資源的保護(hù)與利用具有一定的推動作用。

［1］中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會.中國植物志:第47卷第二分冊［M］.北京:科學(xué)出版社，2001.

［2］《江西植物志》編輯委員會.江西植物志:第二卷［M］.北京:中國科學(xué)技術(shù)出版社，2004.