五加糖肽對(duì)雛雞大腸桿菌和新城疫的治療試驗(yàn)

馬海營(yíng) （山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 山東 泰安 271018） 張衛(wèi)紅 （深圳職業(yè)技術(shù)學(xué)院 廣東 深圳）

五加糖肽對(duì)雛雞大腸桿菌和新城疫的治療試驗(yàn)

馬海營(yíng) （山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 山東 泰安 271018） 張衛(wèi)紅 （深圳職業(yè)技術(shù)學(xué)院 廣東 深圳）

為研究五加糖肽對(duì)雞免疫增效作用及抗感染功效。選擇100羽10日齡的雛雞隨機(jī)分成5組。2個(gè)試驗(yàn)組分別攻毒大腸桿菌和雞新城疫病毒，然后用五加糖肽飲水，另外設(shè)2個(gè)感染對(duì)照組和1個(gè)空白對(duì)照組。檢測(cè)雞的增重率、保護(hù)率、死亡率，試驗(yàn)表明，五加糖肽有較好的免疫增效及抗細(xì)菌和病毒感染作用。

五加糖肽 雞 大腸桿菌 新城疫病毒 免疫增強(qiáng)

五加糖肽是深海紅藻中活性成分半乳糖肽類衍生物，由于其獨(dú)特的結(jié)構(gòu)，具有多種生物學(xué)活性，近年來(lái)，對(duì)其生物的活性研究表明，在抗氧化、抗腫瘤、抗凝血、抗病毒感染以及免疫調(diào)節(jié)[1,2]等方面具有重要活性。禽大腸桿菌病和新城疫會(huì)給養(yǎng)禽業(yè)帶來(lái)巨大危害，使用常規(guī)的抗菌和抗病毒藥物達(dá)不到預(yù)期效果，目前大多數(shù)抗病毒藥物及抗生素已被明令禁止用于禽類，防治疾病發(fā)生的最有效方法是提高機(jī)體免疫力。

五加糖肽是一種增強(qiáng)動(dòng)物機(jī)體免疫力的藥物。且對(duì)大多數(shù)病毒具有明顯的抑制作用，并能增強(qiáng)抗生素藥物的抗菌作用。本試驗(yàn)擬選擇該藥物對(duì)人工感染大腸桿菌或新城疫病毒的雛雞進(jìn)行防治療效試驗(yàn)，檢測(cè)統(tǒng)計(jì)雞的增重率、保護(hù)率、死亡率，以判定五加糖肽對(duì)雞的免疫增效及抗病原感染作用。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥物 五加糖肽由鶴壁泰德生化科技有限公司提供。

1.2 病原 大腸桿菌由山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)室提供，新城疫病毒由哈爾濱獸醫(yī)研究所惠贈(zèng)，SPF 雞胚購(gòu)自濟(jì)南家禽所，海蘭白雛雞購(gòu)自泰安市種雞場(chǎng)。

1.3 方法 （1）病原制備：將保存的大腸桿菌菌種接種于鮮血瓊脂平板，37℃培養(yǎng)18h，挑取有典型β-溶血菌落接種于肉湯培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)14h，用比濁法測(cè)定菌液濃度，復(fù)壯后每毫升含菌量達(dá)10億。取新城疫病毒液接種9日齡SPF雞胚，0.1ml/枚，37℃培養(yǎng)，收集24～72h死亡雞胚的尿囊液，并測(cè)定其效價(jià)為106.0EID50/0.1ml。（2）試驗(yàn)藥物的用法和用量：每日按每g加水25～30kg，連用4d，1次/d。（3）試驗(yàn)動(dòng)物及分組：100只10日齡臨床建健康海蘭白雛雞隨機(jī)分成5組，公母兼有，每組20只，均在相同的溫度、濕度、光照等條件下嚴(yán)格隔離飼養(yǎng)。大腸桿菌病感染雛雞頸部皮下注射接種雞大腸桿菌菌液0.2ml(10億/ml)，新城疫病毒尿囊液0.2ml(106.0EID50/0.1ml)頸部皮下注射9日齡雛雞。 試驗(yàn)分組及處理見(jiàn)表1。（4）觀察指標(biāo)：測(cè)定試驗(yàn)前和試驗(yàn)?zāi)╇u的體重，計(jì)算增重率。感染后每天觀察并記錄各試驗(yàn)組雞精神、采食、飲水、糞便、呼吸癥狀、死亡數(shù)、對(duì)死亡雞進(jìn)行病理剖檢和細(xì)菌分離。試驗(yàn)期為10d，結(jié)束時(shí)，計(jì)算每組的死亡率和保護(hù)率，檢測(cè)2組、4組和5組所剩雞只血清中新城疫抗體水平。

表1 試驗(yàn)組分組方法

2 結(jié)果

2.1 感染雞癥狀觀察 （1）大腸桿菌感染組，死亡前雛雞主要表現(xiàn)出精神沉郁，食欲下降，羽毛松亂，兩翅下垂，縮頸，閉眼昏睡，排灰白色或土黃色稀糞，有的發(fā)出尖叫聲，嚴(yán)重者臥地不起直至死亡。死后剖檢病變主要表現(xiàn)肝充血腫脹、易碎，肝包膜、心包膜、氣囊有大量纖維性滲出物，形成一層灰白色纖維素性膜。脾腫大，有小出血點(diǎn)；肝臟穿刺能分離培養(yǎng)出典型大腸桿菌。（2）新城疫感染組，病雞精神萎靡，飲食欲下降或廢絕；羽毛松亂，翅下垂，縮頸，精神沉郁；雞冠發(fā)紫，口流黏液，呼嚕甩鼻；呼吸困難，張口呼吸；排綠色稀糞。剖檢見(jiàn)口腔有黏液，氣管黏膜環(huán)狀出血；腺胃黏膜附有大量粘液，腺胃黏膜乳頭出血，肌胃角質(zhì)膜易剝離，黏膜有出血斑點(diǎn)；消化道黏膜有出血性卡他性炎癥，腸道黏膜淋巴濾泡處腫脹。有的病雞氣管充血、出血，有黏液，個(gè)別病雞支氣管內(nèi)有栓塞；肺臟呈暗紅色淤血。

2.2 藥物對(duì)感染雞增重及保護(hù)率的影響 大腸桿菌和新城疫治療組增重率分別為32.72%、34.4%，低于空白對(duì)照組平均增重率，但是明顯高于感染對(duì)照組，結(jié)果見(jiàn)表2。對(duì)大腸桿菌和新城疫的保護(hù)率分別為75%和65%，顯著高于感染對(duì)照組10%，但是仍然低于空白對(duì)照組100%。結(jié)果見(jiàn)表3。

表2 藥物對(duì)大腸桿菌和新城疫感染雞的增重影響 (g、%)

表3 藥物對(duì)雞感染大腸桿菌、新城疫的保護(hù)率 (羽、%)

2.2 藥物對(duì)新城疫抗體水平的影響 從表4和圖1中可以看出雛雞感染新城疫病毒10d后，新城疫抗體水平顯著升高，不進(jìn)行新城疫攻毒的試驗(yàn)組(5組)母源抗體20日齡時(shí)基本消失，新城疫治療組(2組)血清中新城疫特異性抗體效價(jià)平均值(7.54)明顯高于新城疫感染對(duì)照組(4組)的平均值(5.5)，且存活的13只雞機(jī)體內(nèi)抗體效價(jià)大都在7以上，有的甚至高于9，不用藥的一組(4組)血清中新城疫抗體雖然也明顯升高，但是效價(jià)為5和6，明顯低于感染用藥組。

表4 藥物對(duì)新城疫抗體水平的影響 (羽、log2)

附圖 新城疫抗體水平分布圖

3 討論

試驗(yàn)結(jié)果表明五加糖肽有很強(qiáng)的抗菌、抗病毒活性，明顯提高雛雞的體液免疫反應(yīng)。因此提示該藥物可在平時(shí)雞病防疫中搭配使用，以提高機(jī)體的免疫力，抑制細(xì)菌、病毒感染；在疫苗免疫時(shí)使用，能提高機(jī)體的免疫反應(yīng)，減少免疫應(yīng)激反應(yīng)。此外，五加糖肽的免疫調(diào)節(jié)作用及增強(qiáng)機(jī)體免疫力機(jī)制可能與其含有卡拉膠成分有密切關(guān)系。Nicklin等[3]認(rèn)為卡拉膠可通過(guò)對(duì)巨噬細(xì)胞的釋放炎癥因子功能進(jìn)行調(diào)節(jié)，魏元臣等[4]報(bào)道卡拉膠降解物能顯著促進(jìn)巨噬細(xì)胞增殖，并能增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬能力和釋放NO的能力，從而增強(qiáng)其免疫功能。但是卡拉膠尚有免疫抑制作用，Thomson等[2]認(rèn)為卡拉膠可以通過(guò)削弱T細(xì)胞依賴性抗原的體液免疫和補(bǔ)體系統(tǒng)的激活，抑制細(xì)胞免疫，發(fā)揮免疫抑制作用；Cochran等[5]發(fā)現(xiàn)口服卡拉膠可以顯著抑制T細(xì)胞的增殖；Vijayakumar等[6]研究發(fā)現(xiàn)卡拉膠多次注射對(duì)BALB/C小鼠具有免疫抑制作用。但是這種作用與抗感染作用的關(guān)系還有待進(jìn)一步研究。結(jié)論，五加糖肽具有良好的免疫增效作用和抗感染功效。

[1] Richou R, Lallouette P, Legger H. Carrageenan, adjuvating and immunity stimulating substance[J]. Comptes Rendus Hebdomadaires Des Séances de L'Académie Des Sciences, 1968,267(2): 257-259.

[2] Thomson A W, Fowler E F. Carrageenan: a review of its effects on the immune system [J]. Agents and Actions, 1981, 11(3): 265-273.

[3] Nicklin S, Baker K, Miller K. Carrageenan Induced Changes in the Immunomodulatory Capacity of Macrophages: An in Vitro Study[J]. Advances in Experimental Medicine and Biology, 1988, 237: 821-832.

[4] 魏元臣, 周革非, 李樹(shù)福等. 峰膠降解組分的體外免疫活性[J]. 食品科學(xué), 2009, 30(11): 232-236.

[5] Cochran F R, Baxter C S. Macrophage-mediated suppression of T lymphocyte proligeration induced by oral carrageenan administration [J]. Immunology, 1984, 53: 291-297.

[6] Vijayakumar R K, Muthukkaruppan V R. Immunoregulatory processes induced by carrageenan in BALB/C mice [J]. Immunological Investigations, 1990, 19: 163-183.

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