淺談醫(yī)學(xué)高職院校人類外周血染色體制備實(shí)驗(yàn)教學(xué)經(jīng)驗(yàn)與體會

林美娜

(漳州衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，福建漳州363000)

淺談醫(yī)學(xué)高職院校人類外周血染色體制備實(shí)驗(yàn)教學(xué)經(jīng)驗(yàn)與體會

林美娜

(漳州衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，福建漳州363000)

醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)是與臨床醫(yī)學(xué)結(jié)合緊密的一門過渡性學(xué)科，它已成為醫(yī)學(xué)高職院校教育中不可缺少的基礎(chǔ)課程，有效的醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)對學(xué)生很好的掌握相關(guān)操作技能并促進(jìn)其學(xué)習(xí)、記憶理論知識具有舉足輕重的作用。本文主要根據(jù)七年多的臨床細(xì)胞遺傳學(xué)工作經(jīng)驗(yàn)結(jié)合六年的本學(xué)院實(shí)驗(yàn)教學(xué)情況淺談人類外周血染色體制備在高職院校的實(shí)驗(yàn)教學(xué)經(jīng)驗(yàn)與體會。

高職院校；醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)；細(xì)胞遺傳學(xué)；染色體制備；實(shí)驗(yàn)教學(xué)

醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)是遺傳學(xué)與醫(yī)學(xué)相結(jié)合的一門交叉學(xué)科，它在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、預(yù)防醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的影響及作用越來越受到人們的重視，已成為醫(yī)學(xué)科學(xué)領(lǐng)域發(fā)展最活躍的前沿學(xué)科之一。醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)已成為醫(yī)學(xué)高等職業(yè)教育中不可缺少的基礎(chǔ)課程[1]。醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)課的開設(shè)和實(shí)踐可以激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，促使學(xué)生很好的掌握相關(guān)操作技能并鞏固已學(xué)的理論知識。其教學(xué)質(zhì)量的提高應(yīng)得到重視。細(xì)胞遺傳學(xué)是醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)的一重要部份，本文主要根據(jù)七年多的臨床細(xì)胞遺傳學(xué)工作經(jīng)驗(yàn)并結(jié)合六年的本學(xué)院實(shí)驗(yàn)教學(xué)情況，淺談人類外周血染色體制備在高職院校的實(shí)驗(yàn)教學(xué)經(jīng)驗(yàn)與體會。

1 強(qiáng)調(diào)本課程的重要性，激發(fā)學(xué)生的積極性

近幾年來，高職單獨(dú)招生政策在全國高等職業(yè)院校得到了大力推行。然而，某些專業(yè)單招生數(shù)量較少，如醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)、衛(wèi)生檢驗(yàn)與檢疫專業(yè)，只能采用單招生與統(tǒng)招生混編的方式[2]。統(tǒng)招生動手能力不如單招生，而單招生自覺性較差，兩種生源的學(xué)生互相影響，給教育教學(xué)帶來一定困難。醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)是一門相對深奧的學(xué)科，多數(shù)高職生存在畏難情緒。因此，強(qiáng)調(diào)課程的重要性，激發(fā)學(xué)生的積極性非常重要。

為了發(fā)揮學(xué)生的學(xué)習(xí)積極性和主動性，在教學(xué)中結(jié)合有關(guān)的案例、科學(xué)事件、新聞故事，采取啟發(fā)式教學(xué)方法十分有效[3]。比如說舉例有關(guān)近幾年越來越得到重視的唐氏篩查。唐氏篩查主要針對的就是唐氏綜合征。唐氏綜合征(Down’s syndrome，DS)又稱為21-三體綜合征或先天愚型，是由于21號染色體異常引起的常染色體疾病，新生兒發(fā)病率在1/ 700-1/800[4]。由于患病胎兒2/3在孕早期自發(fā)流產(chǎn)，故實(shí)際發(fā)病率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于這個(gè)數(shù)字[5]。強(qiáng)調(diào)遺傳學(xué)的應(yīng)用就在身邊。再比如例舉臨床上接觸到的兩性畸形案例，滿足學(xué)生的好奇心，激起學(xué)生學(xué)習(xí)興趣。

2 學(xué)生身體力行實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備工作，強(qiáng)化專業(yè)技能

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備工作是檢驗(yàn)工作中最臟最累的部分，讓學(xué)生參與有助于培養(yǎng)敬業(yè)精神、吃苦耐勞的素質(zhì)和一絲不茍的認(rèn)真態(tài)度。讓學(xué)生參加實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備，這種訓(xùn)練是和臨床實(shí)際工作相吻合[6]。特別是人類外周血染色體制備實(shí)驗(yàn)，無菌觀念強(qiáng)，試劑濃度精確度要求高，讓學(xué)生身體力行嚴(yán)格按照要求做好實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備工作，能強(qiáng)化專業(yè)技能。

3 采集學(xué)生標(biāo)本，親自完成人類外周血染色體制備

細(xì)胞遺傳學(xué)檢查是較早用于遺傳病診斷（主要是染色體病和腫瘤診斷）的重要手段，即通常所指的染色體核型分析。一般染色體核型分析包括取材→樣品預(yù)處理→接種→細(xì)胞培養(yǎng)→細(xì)胞收獲→滴片→讀片與核型分析等過程[7]。好的核型分析依賴于染色體標(biāo)本的制備，即核型分析前的一系列步驟。為了增加學(xué)生的實(shí)驗(yàn)熱情，讓學(xué)生互相采集標(biāo)本，親自完成人類外周血染色體制備。

4 結(jié)合高職生實(shí)驗(yàn)情況，強(qiáng)調(diào)染色體制備影響因素

由于整個(gè)實(shí)驗(yàn)周期長，操作繁瑣，多環(huán)節(jié)易受不確定因素干擾，對實(shí)驗(yàn)結(jié)果甚有影響[8]。標(biāo)本的新鮮與否，1640培養(yǎng)基配方，培養(yǎng)溫度與培養(yǎng)時(shí)間，秋水仙素的濃度與作用時(shí)間，離心的速度與時(shí)間，低滲的時(shí)間，預(yù)固定液用量，固定時(shí)間與次數(shù)，各吹打操作的手法與力度，滴片時(shí)玻片預(yù)冷的程度與滴片的高度，烤片的溫度與時(shí)間，片齡，顯帶時(shí)胰酶的終濃度與顯帶的時(shí)間，Giensa染液的質(zhì)量等等無一不影響著染色體的制備。以下側(cè)重討論幾種影響因素。

4.1 培養(yǎng)溫度與培養(yǎng)時(shí)間在標(biāo)本新鮮，培養(yǎng)基穩(wěn)定的前提下，培養(yǎng)溫度的恒定是培養(yǎng)成功的關(guān)鍵。外周血淋巴細(xì)胞宜在37℃的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。培養(yǎng)箱質(zhì)量問題引起的溫度波動弧度與頻率大或是人為的頻繁打開培養(yǎng)箱的門等引起的培養(yǎng)溫度不穩(wěn)定都不利于細(xì)胞的生長與繁殖。培養(yǎng)溫度若低于37℃，細(xì)胞生長速度減慢，活力降低，細(xì)胞體積小，染色體呈團(tuán)狀或收縮不分散，可以繼續(xù)37℃培養(yǎng)96 h，使細(xì)胞獲得旺盛的分裂能力[9]。37℃恒溫下，培養(yǎng)的最佳時(shí)間是68~72h，縮短培養(yǎng)時(shí)間，細(xì)胞繁殖總數(shù)減少，分裂相也隨之減少；延長培養(yǎng)時(shí)間，細(xì)胞過了分裂最旺盛的時(shí)期，細(xì)胞總數(shù)不少，分裂相比例較小。多年的實(shí)驗(yàn)表明，縮短或延遲培養(yǎng)24h，尚可收獲相對較多的分裂相。

4.2 秋水仙素的濃度和作用時(shí)間秋水仙素可抑制微管的合成使細(xì)胞處于分裂中期，又有生物毒性，影響細(xì)胞生長[10]。秋水仙素除了能抑制紡錘絲的形成，使染色體停留在分裂中期，它還能使染色體縮短加粗。秋水仙素的濃度和作用時(shí)間與收獲到的中期細(xì)胞染色體的數(shù)量及形態(tài)關(guān)系密切，秋水仙素的濃度越高、作用時(shí)間越長，中期細(xì)胞就越多、染色體越短（見圖1-A）。反之，秋水仙素的濃度越低，作用時(shí)間越短，中期細(xì)胞就越少、染色體越長。合適的秋水仙素濃度與作用時(shí)間的搭配，可以獲得中等數(shù)量的分裂相（分裂相太密集也不利于染色體分散）和長短適中的染色體（見圖1-B）。

4.3 低滲時(shí)間低滲處理是染色體制備的一關(guān)鍵步驟。長時(shí)間（45~60min）低滲處理將導(dǎo)致染色體更長、更黏、難以分散且顯帶質(zhì)量不好；短時(shí)間低滲處理容易導(dǎo)致細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜包裹在染色體周圍，影響染色體分散和顯帶質(zhì)量[11]。

4.4 預(yù)固定液用量預(yù)固定液的用量也是染色體分散好壞的影響因素之一。過量的預(yù)固定液會使醇類、脂類凝固形成胞漿背景，影響染色體分散。有研究者研究結(jié)果顯示，在預(yù)固定環(huán)節(jié)，不同的預(yù)固定劑量對標(biāo)本染色體分散質(zhì)量有明顯的影響，隨著預(yù)固定劑量的加大，細(xì)胞間相互黏連明顯，較難用氣泡吹打均勻，制片時(shí)細(xì)胞易于成團(tuán)，所得標(biāo)本的質(zhì)量差[12]。

4.5 各吹打步驟的手法與力度在外周血染色體制備過程中應(yīng)用到吹打操作的有低滲、預(yù)固定、固定三個(gè)環(huán)節(jié)。在這三個(gè)環(huán)節(jié)中低滲的時(shí)間，預(yù)固定液用量，固定時(shí)間與次數(shù)對染色體分散的影響至關(guān)重要，但是吹打的手法與力度也不容忽視。力度太小，染色體分散不好；力度太大，染色體散得太開，容易丟失；用力不均，染色體要么聚集成團(tuán)要么散得太開（見圖1-C）。通過實(shí)驗(yàn)，筆者認(rèn)為低滲前吹打力度可稍大些，低滲后由于細(xì)胞腫脹，染色體相對容易分散，力度可適當(dāng)小些，采用氣泡吹打均勻的手法為宜，所得染色體分散良好（見圖1-D）。

圖1 G顯帶Giemsa染色圖

5 認(rèn)真完成實(shí)驗(yàn)報(bào)告，及時(shí)消化所學(xué)知識

人類外周血染色體制備的實(shí)驗(yàn)雖然周期長，操作繁瑣，但是可以分解成細(xì)胞培養(yǎng)、收獲滴片、顯帶染色獨(dú)立的三次課，以靈活適應(yīng)高職學(xué)生實(shí)驗(yàn)課安排的不連貫性；染色體制備的影響因素特別多，不同實(shí)驗(yàn)室的各環(huán)節(jié)操作差異大，占人數(shù)優(yōu)勢的學(xué)生可以采用分組的辦法適當(dāng)作對比實(shí)驗(yàn)，親自體驗(yàn)同一環(huán)節(jié)不同變量的影響結(jié)果，以加深印象，熟練操作，鞏固理論知識。此外，每次實(shí)驗(yàn)課后都要求學(xué)生認(rèn)真書寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告，并在實(shí)驗(yàn)報(bào)告中體現(xiàn)出其主動思維的過程。教師通過批閱實(shí)驗(yàn)報(bào)告，了解和掌握學(xué)生的實(shí)驗(yàn)情況及學(xué)生的獨(dú)立思考和分析問題的能力[13]。學(xué)生通過認(rèn)真完成實(shí)驗(yàn)報(bào)告，及時(shí)消化所學(xué)知識。

6 結(jié)語

具備成熟的醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)操作技術(shù)是提高高職院校相應(yīng)實(shí)驗(yàn)教學(xué)質(zhì)量的基礎(chǔ)，只有技術(shù)成熟，才能知道該如何有效的分批分組學(xué)生，該針對哪個(gè)變量進(jìn)行對比實(shí)驗(yàn)，該強(qiáng)調(diào)或注意哪個(gè)步驟的操作等等。同時(shí)，結(jié)合高職學(xué)生實(shí)際情況，激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)興趣，調(diào)動實(shí)驗(yàn)積極性，增強(qiáng)獨(dú)立操作能力，促進(jìn)知識消化理解，提高實(shí)驗(yàn)教學(xué)質(zhì)量，以高效培養(yǎng)適用型醫(yī)學(xué)人才。

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R446.11+1

A

1674-1129(2015)06-0812-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2015.06.048

2015-07-27；

2015-10-27)