維胺酯在大鼠體內(nèi)的血藥濃度及組織分布

王鵬 張蓓蓓 繆曉輝? 倪武

維胺酯在大鼠體內(nèi)的血藥濃度及組織分布

王鵬 張蓓蓓 繆曉輝? 倪武

目的 研究SD大鼠口服維胺酯（Via）后體內(nèi)的血藥濃度及組織分布情況。方法 大鼠口服Via后，通過(guò)高效液相色譜檢測(cè)各時(shí)間點(diǎn)血漿和組織中藥物濃度，采用DAS2.0軟件進(jìn)行房室模型擬合并計(jì)算藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)。結(jié)果 大鼠口服Via125 mg/kg，所得血漿藥時(shí)曲線符合二室模型，主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)：t1/2（β）為（2.22±0.52）h；Tmax為（0.83±0.13）h；Cmax為（3.90±1.05）mg/L。Via口服后15min內(nèi)可迅速分布至各主要組織器官，1 h后藥物在脂肪組織濃度最高，皮膚、肌肉組織次之，骨骼最低。7 h后各組織藥物濃度均明顯下降。結(jié)論 Via在體內(nèi)吸收迅速、清除較快、分布廣泛，在脂肪和皮膚組織中濃度最高。

維胺酯 血藥濃度 組織分布 高效液相色譜

目前Via已廣泛應(yīng)用于多種皮膚病治療，尤其對(duì)中、重度痤瘡療效顯著［2，3］，然而，該藥物在皮膚及其他組織器官中的分布情況尚未清楚。因此作者參考相關(guān)文獻(xiàn)，選擇快速、簡(jiǎn)便的高效液相色譜藥物濃度測(cè)定法（HPLC）［4］，對(duì)其在大鼠體內(nèi)組織分布特點(diǎn)進(jìn)行研究，旨在為臨床用藥的安全性、有效性和擴(kuò)大適應(yīng)證提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備 （1）藥物與試劑：Via膠囊規(guī)格25 mg/粒；Via標(biāo)準(zhǔn)品（重慶華邦公司），以甲醇配制成1 g/L儲(chǔ)備液，避光低溫保存?zhèn)溆?；甲醇（色譜純），乙腈（色譜純），羧甲基纖維素鈉（分析純），重蒸餾水。（2）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：健康合格一級(jí)SD大鼠，雌雄各半，體重180～200 g，由中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。（3）主要儀器：依利特P230高效液相色譜儀（大連依利特科學(xué)儀器公司）；Diamonsil C18 色譜柱（200 mm×4.6 mm，5μm）；組織勻漿機(jī)（寧波新芝儀器有限公司）；低速臺(tái)式離心機(jī)（長(zhǎng)沙高創(chuàng)儀器有限公司）；高速臺(tái)式離心機(jī)（長(zhǎng)沙英泰儀器有限公司）；漩渦振蕩儀（上海第一醫(yī)學(xué)院儀器廠）；電子分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）。

1.2 方法 （1）血液樣品的采集和預(yù)處理：選取健康合格一級(jí)SD大鼠6只，雌雄各半，體重180～200 g，實(shí)驗(yàn)前禁食18h，按動(dòng)物體重計(jì)算給藥劑量，實(shí)驗(yàn)當(dāng)天灌胃給予125 mg/kg的Via混懸液（使用5‰羧甲基纖維素鈉配制）。于給藥前（0）以及給藥后0.5、0.75、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12 h采尾靜脈血0.2 ml，3000 r/min離心10min分離血漿備用。精確移取血漿0.1 ml，加入0.3 ml乙酸乙酯，旋搖3min，12000 r/min離心10min，精確移取上層有機(jī)相0.2 ml至空白試管，常溫下氮?dú)獯蹈桑?.1 ml流動(dòng)相溶解，取20 μl進(jìn)樣，所有操作和保存過(guò)程均嚴(yán)格避光。（2）組織樣品采集和預(yù)處理：選取健康合格一級(jí)大鼠24只，體重200 g 左右，隨機(jī)分為4組，每組6只，雌雄各半。給藥方法同上。分別在15min、1 h、4 h、7 h四個(gè)時(shí)間點(diǎn)將動(dòng)物處死，心臟取血1ml，在相同部位切取心、肝、脾、肺、腎、腦、皮膚、脂肪、肌肉、睪丸或子宮和卵巢適量，稱(chēng)重，用1：3（W/V）蒸餾水制成組織勻漿，取此勻漿1ml，加3ml乙酸乙酯提取，旋搖3min，3000r/min 離心10min，精確移取上層有機(jī)相2ml至空白試管，常溫下氮?dú)獯蹈桑?.1 ml流動(dòng)相溶解，12000 r/min離心5min，取上層清液20 μl進(jìn)樣。骨組織取自大鼠股骨，洗去骨髓，稱(chēng)重，按1 ：3（W/V）加入甲酸若干，置40 ℃水浴中溫孵30min，待其完全溶解后用0.1mol/L NaOH調(diào)pH至6.0，取1ml同上方法處理并進(jìn)樣分析。（3）測(cè)定條件：依利特P230高效液相色譜儀，Diamonsil C18色譜柱（200mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相為甲醇：水（95：5，V/V），使用前經(jīng)0.45μm的過(guò)濾膜超聲脫氣；柱溫25℃；流速為1 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為370nm；20μl固定進(jìn)樣環(huán)。（4）血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立：采用大鼠空白血漿配成藥物濃度為31、122、488、195、781μg/L的Via標(biāo)準(zhǔn)液，按前述血漿處理辦法進(jìn)行處理、測(cè)定，所得數(shù)據(jù)用加權(quán)最小二乘法進(jìn)行線性回歸。（5）組織標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立：采用大鼠空白混合組織勻漿配成藥物濃度為25、98、391、1560、6250、25000 μg/L的Via標(biāo)準(zhǔn)液，按前述組織勻漿處理辦法進(jìn)行處理、測(cè)定，所得數(shù)據(jù)采用加權(quán)最小二乘法進(jìn)行線性回歸。（6）回收率、精密度：采用大鼠空白混合組織勻漿配制低、中、高3種濃度（0.1、1.0、5.0 mg/L）的Via質(zhì)控樣品，各5管，于同一天作預(yù)處理后采用HPLC分析，計(jì)算日內(nèi)精密度。以后每天配制上述3種濃度的質(zhì)控樣品各5份，連測(cè)3 d，計(jì)算日間精密度和方法回收率。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以%表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜ 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 檢測(cè)方法的建立 在甲醇：水（95：5；V/V）條件下，Via色譜峰與內(nèi)源性物質(zhì)分離良好，峰形對(duì)稱(chēng)，保留時(shí)間較短（6.2min），見(jiàn)圖 1。

圖1 樣品測(cè)定色譜圖

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線、回收率、精密度 血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y=0.0634x+9.772，濃度范圍為31～7810μg/ L，r2=0.9987。組織勻漿標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y=0.5251 x+3.557，線性范圍為6.1～25000 μg/L，r2=0.9998?；厥章室约熬芏冉Y(jié)果見(jiàn)表1。

表 1 組織勻漿樣品回收率和精密度測(cè)定結(jié)果［n=5，（x±s）］

2.3 大鼠口服Via時(shí)曲線 大鼠口服Via 125mg/kg后，不同時(shí)間測(cè)定的血藥濃度值采用DAS2.0藥代動(dòng)力學(xué)軟件擬合處理，得到藥-時(shí)曲線（見(jiàn)圖2）。主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見(jiàn)表2。根據(jù)藥時(shí)曲線，0～0.83 h為吸收相，0.83～2.5 h為平衡相，2.5～12.0 h為消除相。模型擬合為二室模型。

圖2 SD大鼠口服Via后血漿藥物濃度—時(shí)間曲線

表2 Via在SD大鼠體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)［n=6，（x±s）］

2.4 Via在SD大鼠組織中的分布 大鼠口服Via后可迅速分布至各主要器官，1h后藥物在脂肪中濃度最高，皮膚、肌肉次之，骨骼最低。7 h后各組織藥物濃度均明顯下降，24h后除脂肪組織仍存在（1.13±1.01）μg/g的藥物外，其他組織藥物濃度均已檢測(cè)不到。見(jiàn)圖3。

圖3 Via在SD大鼠體內(nèi)各組織的分布

3 討論

Via是全反式維A酸與對(duì)氨基苯甲酸乙酯化合形成的酰胺類(lèi)化合物，是目前我國(guó)唯一自行研制并具有知識(shí)產(chǎn)權(quán)的維A酸類(lèi)藥物［1］?，F(xiàn)已明確Via對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞或鱗狀上皮的分化與增殖有明顯的抑制作用［5］，臨床實(shí)踐亦證實(shí)該藥對(duì)中、重度痤瘡及多種角化異常性皮膚病療效肯定，與異維A酸相比療效無(wú)顯著差異，副作用輕微［6］。

本資料顯示，大鼠單次灌胃Via125 mg/kg后體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)呈二室開(kāi)放模型，吸收較迅速，達(dá)峰時(shí)間（0.83±0.13）h；血漿清除亦較快，消除半衰期（2.22±0.52）h，清除率（16.20±0.13）L/（kg·h）。組織分布研究發(fā)現(xiàn)，Via在大鼠體內(nèi)分布迅速且廣泛，15min即可在肝、腎、脾、肺、心、腦、脂肪、皮膚、骨骼肌、睪丸、子宮和卵巢等組織檢測(cè)到，各組織器官中Via的達(dá)峰時(shí)間與血漿中的基本相同。給藥15min時(shí)，Via在肝組織中分布濃度最高，心臟次之，這可能與這些組織器官的血流量較大有關(guān)；給藥1h后，Via在脂肪、皮膚的持續(xù)高濃度則可能與藥物的脂溶性高有關(guān)。

藥物的分布情況對(duì)其療效和毒副作用具有重要的意義，只有治療靶組織達(dá)到一定的藥物濃度才能保證療效。在本實(shí)驗(yàn)中，大鼠口服Via 1h后，皮膚的藥物濃度明顯高于除脂肪外的其他組織，Via的這一分布特點(diǎn)可能有助于提高療效。然而，療效部位以外的器官組織可能成為藥物毒副作用的靶器官。已有證據(jù)表明，維A酸類(lèi)藥物長(zhǎng)期應(yīng)用可在不同的組織器官中產(chǎn)生多種副作用，如引起頭痛、眼結(jié)膜炎、骨骼發(fā)育不良、肌肉痛、胰腺炎、血脂升高、肝功能損害以及胎兒畸形等［7，8］。有研究顯示Via亦會(huì)引起黏膜干燥、致畸、血脂改變、肝臟損害等［2，9］，因此作者推測(cè)Via的副作用可能與其在組織中的分布有關(guān)。盡管如此，Via產(chǎn)生的毒副作用常較其同類(lèi)藥物輕微［6］，這可能與其在皮膚、脂肪濃聚以及在血漿和其它組織中濃度相對(duì)較低的特點(diǎn)有關(guān)。Via在脂肪組織中藥物濃度高，下降緩慢，滯留時(shí)間長(zhǎng)，而同樣具有高親脂性的藥物阿維A酯在肥胖大鼠體內(nèi)半衰期明顯延長(zhǎng)［10］，提示長(zhǎng)期應(yīng)用Via可能會(huì)造成藥物在脂肪組織中過(guò)度蓄積，使得人體藥物清除速度減慢。

本實(shí)驗(yàn)組前期研究發(fā)現(xiàn)Via在強(qiáng)光下短時(shí)間內(nèi)可變構(gòu)成分子量相同而結(jié)構(gòu)不同的另一種較穩(wěn)定的物質(zhì)，本實(shí)驗(yàn)采用液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法在大鼠血漿及皮膚組織中發(fā)現(xiàn)了這種物質(zhì)，由于全反式維A酸與其異構(gòu)體13-順-維A酸在光照或體內(nèi)能夠互變［11］，故推測(cè)Via在體內(nèi)可能亦存在著類(lèi)似改變。

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Objective To study the plasma concentration and tissue distribution of oral viaminate in rats. Methods The plasma and tissue concentrations of viaminate were detected by high performance liquid chromatography at various times after oral administration in rats. The pharmacokinetic parameters were calculated with Das2.0 program. Results The time-concentration curve of viaminate corresponded to the model of two-compartment model after oral administration. The main pharmacokinetics parameters were：t1/2（β）=（2.22 0.52）h；Tmax =（0.83±0.13）h；Cmax=（3.90±1.05）mg/L. It was showed that viaminate was absorbed rapidly and was distributed in many tissues or organs in 15minutes.The concentration of viaminate was highest in fat at 1 h，followed by skin and muscle，lowest in skeleton. The concentrations in all of the tissues were decreased obviously. Conclusions Viaminate can be quickly absorbed and distributed in various tissues or organs in vivo, fellowed by being eliminated very quickly. The concentration of viaminate in skin and fat is higher than that in other tissues.

Viaminate Plasma concentration Tissue distribution HPLC

200003 上海第二軍醫(yī)大學(xué)長(zhǎng)征醫(yī)院感染科

*通訊作者