新型生物殺菌劑新奧霉素對(duì)七種蔬菜病原菌的室內(nèi)毒力測(cè)定

崔林開　劉精精　王樹和　顧廣杰　李法新　林曉民

摘要：為明確新奧霉素對(duì)蔬菜病原菌的抑制活性，采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定了新奧霉素對(duì)7種蔬菜病原菌的毒力。結(jié)果表明，新奧霉素對(duì)7種蔬菜病原菌均具有一定的抑制作用，其中對(duì)疫霉菌表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制作用，對(duì)大豆疫霉根腐病菌（Phytophthora sojae）、茄綿疫病菌（Phytophthora parasitica）和辣椒疫病菌（Phytophthora capsici）的EC50分別為7.18、11.17、76.90 mg/L；而對(duì)茄子褐紋病菌（Phomopsis vexans）、番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea）、黃瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporum）和番茄早疫病菌（Alternaria solani）的抑制作用較弱，其EC50分別為83.85、105.20、178.29、195.28 mg/L。

關(guān)鍵詞：新奧霉素；蔬菜病原菌；疫霉菌；毒力測(cè)定

中圖分類號(hào)：S482.2+8 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2015）22-5596-03

Abstract： The toxicity of Xinaomycin to 7 vegetable pathogens was determined by the methods of mycelial growth inhibition to ascertain its inhibitory activity against vegetable pathogens. The results showed that Xinaomycin had certain extent inhibition effect on 7 vegetable pathogens which had strong inhibition effect on Phytophthora. The EC50 were 7.18， 11.17， 76.90 mg/L for Phytophthora sojae， Phytophthora parasitica and Phytophthora capsici respectively. It had weak inhibition effect on Phomopsis vexans， Botrytis cinerea， Fusarium oxysporum and Alternaria solani and its EC50 were 83.85，105.20，178.29，195.28 mg/L respectively.

Key words： Xinaomycin； vegetable pathogens； phytophthora； toxicity test

中國(guó)科學(xué)院成都生物研究所從攀西地區(qū)土壤中篩選得到一株諾爾斯鏈霉菌（Streptomyces noursei），該菌能產(chǎn)生一種新型核苷類農(nóng)用抗生素，命名為新奧霉素，是一種具有新化學(xué)結(jié)構(gòu)的尿嘧啶核苷肽類抗生素，相對(duì)分子量為445，分子式C16H23N5O10[1]。經(jīng)多輪誘變選育獲得遺傳改良菌株諾爾斯鏈霉菌XiAo-3，并通過優(yōu)化提取工藝，成功獲得4%新奧霉素水劑[2]。田間藥效試驗(yàn)表明，該藥劑對(duì)煙草花葉病毒病具有較好的防治效果，1 800 mL/hm2處理的防治效果高達(dá)75.69%[1]；對(duì)人參果病毒病也具有較好的防治效果，4%新奧霉素水劑500倍液處理的防治效果達(dá)79.33%[3]；同時(shí)對(duì)黃瓜細(xì)菌性角斑病和黃瓜霜霉病也具有一定的防效[4]。

新奧霉素是一種新的核苷類抗生素，具有低毒、安全、環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)。該藥劑目前對(duì)植物病毒表現(xiàn)出較高的抑制活性。為了進(jìn)一步開發(fā)該藥劑防治其他植物病害的應(yīng)用價(jià)值，明確該藥劑對(duì)其他植物病原菌的抑制活性，本實(shí)驗(yàn)室在前期測(cè)定新奧霉素對(duì)7種作物病原真菌毒力的基礎(chǔ)上[5]，測(cè)定了該藥劑對(duì)7種蔬菜病原菌的室內(nèi)毒力。

1 材料與方法

1.1 材料

供試菌株黃瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporum）、大豆疫霉根腐病菌（Phytophthora sojae）、茄綿疫病菌（Phytophthora parasitica）、辣椒疫病菌（Phytophthora capsici）、茄子褐紋病菌（Phomopsis vexans）、番茄早疫病菌（Alternaria solani）和番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea），均由河南科技大學(xué)林學(xué)院菌物資源及有害生物管理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供。供試藥劑為4%新奧霉素水劑由河南省濟(jì)源白云實(shí)業(yè)有限公司提供。

1.2 培養(yǎng)基的制作

所用培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基[6]和V8培養(yǎng)基[7]。PDA培養(yǎng)基：將200 g去皮的馬鈴薯切成薄片，加去離子水1 000 mL煮沸0.5 h，用紗布濾去馬鈴薯，加去離子水補(bǔ)足至1 000 mL，然后加15 g葡萄糖和15 g瓊脂粉，加熱使瓊脂完全融化，然后分裝在5個(gè)三角瓶中，121 ℃滅菌20 min。V8培養(yǎng)基：用紗布過濾V8蔬菜汁100 mL，加入0.2 g碳酸鈣和15 g瓊脂粉，加去離子水補(bǔ)足至1 000 mL，加熱使瓊脂完全融化，然后分裝在5個(gè)三角瓶中，121 ℃滅菌20 min。

1.3 含藥培養(yǎng)基的配制

將供試藥劑用去離子水配制成所需系列濃度的100倍母液，以1∶99的比例與熔化的PDA或V8培養(yǎng)基混合均勻，即為配制所需濃度梯度的含藥培養(yǎng)基。

1.4 測(cè)定方法

為準(zhǔn)確測(cè)定新型生物殺菌劑新奧霉素對(duì)7種蔬菜病原菌的毒力，采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定供試菌株的EC50[8]。將供試菌株接種在PDA或V8平板上，25 ℃培養(yǎng)5 d后，用直徑為6 mm的打孔器在菌落邊緣內(nèi)側(cè)打取菌餅，菌絲面朝下移接到含不同濃度藥劑的PDA或V8平板上，25 ℃黑暗培養(yǎng)5 d左右，十字交叉法測(cè)定菌落直徑，每處理重復(fù)3次，計(jì)算抑制率。抑制率=（對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑）/（對(duì)照菌落直徑-0.6 cm）×100%。將抑制率換算成概率值（y），藥劑濃度換算成濃度對(duì)數(shù)（x），求得線性回歸方程y=a+bx，并以回歸方程計(jì)算抑制中濃度EC50。

2 結(jié)果與分析

2.1 新奧霉素對(duì)不同病原菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用

從表1可知，隨著新奧霉素濃度的增加，對(duì)7種蔬菜病原菌菌絲生長(zhǎng)的抑制率也隨之增大，藥劑濃度與抑制率之間呈正相關(guān)。當(dāng)新奧霉素濃度為50 mg/L時(shí)，對(duì)大豆疫霉根腐病菌、茄綿疫病菌、辣椒疫病菌、茄子褐紋病菌、番茄灰霉病菌、黃瓜枯萎病菌和番茄早疫病菌的抑制率分別為91.08%、67.47%、36.75%、43.40%、17.97%、28.77%和17.80%。新奧霉素對(duì)大豆疫霉根腐病菌和茄綿疫病菌表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制作用。

2.2 新奧霉素對(duì)不同病原菌的毒力比較

通過線性回歸分析，求出毒力回歸方程，相關(guān)系數(shù)均在0.94以上，說(shuō)明菌絲生長(zhǎng)抑制幾率值和藥劑的濃度對(duì)數(shù)之間呈現(xiàn)較好的線性相關(guān)性（表2）。依據(jù)毒力回歸方程計(jì)算出EC50，新奧霉素對(duì)7種蔬菜病原菌的毒力由大到小依次為大豆疫霉根腐病菌、茄綿疫病菌、辣椒疫病菌、茄子褐紋病菌、番茄灰霉病菌、番茄早疫病菌、黃瓜枯萎病菌。同時(shí)，從表2中可以看出，新奧霉素對(duì)大豆疫霉根腐病菌、茄綿疫病菌和辣椒疫病菌3種疫霉菌具有較強(qiáng)的毒力，其EC50分別為7.18、11.17、76.90 mg/L，表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制作用，特別是對(duì)大豆疫霉根腐病菌的毒力最強(qiáng)。對(duì)茄子褐紋病菌、番茄灰霉病菌、黃瓜枯萎病菌和番茄早疫病菌的毒力較弱，其EC50分別為83.85、105.20、178.29、195.28 mg/L，表現(xiàn)出較弱的抑制作用。

3 小結(jié)與討論

室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果表明，新奧霉素對(duì)供試的7種蔬菜病原菌的菌絲生長(zhǎng)均具有一定抑制作用，其中對(duì)大豆疫霉根腐病菌、茄綿疫病菌和辣椒疫病菌3種疫霉菌表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制作用，特別是對(duì)大豆疫霉根腐病菌的毒力最強(qiáng)，其EC50為7.18 mg/L；而對(duì)茄子褐紋病菌、番茄灰霉病菌、番茄早疫病菌和黃瓜枯萎病菌4種病原真菌的抑制作用較弱，其EC50在83.85～195.28 mg/L之間。

新奧霉素是一種新的核苷類抗生素，是一種新開發(fā)的生物農(nóng)藥。目前的田間試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其對(duì)植物病毒具有較好的防治效果，對(duì)黃瓜細(xì)菌性角斑病和黃瓜霜霉病也具有一定的防效[1，3，4]。本實(shí)驗(yàn)室前期測(cè)定了新奧霉素對(duì)7種作物病原真菌的抑制效果，發(fā)現(xiàn)其對(duì)油菜菌核病菌和小麥紋枯病菌具有較好的防效[5]；本試驗(yàn)測(cè)定了新奧霉素對(duì)7種蔬菜病原菌的毒力，發(fā)現(xiàn)其對(duì)疫霉菌具有較強(qiáng)的抑制作用，特別是對(duì)大豆疫霉根腐病菌的毒力最強(qiáng)。這對(duì)進(jìn)一步開發(fā)新奧霉素防治植物病害的應(yīng)用潛力提供了理論基礎(chǔ)。同時(shí)本實(shí)驗(yàn)室初步研究了新奧霉素對(duì)黃瓜細(xì)菌性角斑病菌的毒力，發(fā)現(xiàn)幾乎沒有抑制作用，而吳焜玥等[4]的田間試驗(yàn)結(jié)果顯示新奧霉素對(duì)黃瓜細(xì)菌性角斑病具有一定的防效，分析可能是由于新奧霉素可以顯著提高黃瓜初花期和結(jié)果期株高、莖粗、葉片數(shù)、葉面積和葉綠素含量，使植株生長(zhǎng)健壯，從而提高黃瓜的抗病性，減輕植物病害的發(fā)生程度。

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（責(zé)任編輯 丁艷紅）