差示分光光度法鑒別復(fù)方薄荷腦滴鼻液中的樟腦成分

伍小勇，康娟娟，張曉丹，金麗，卜瑩，古卓良（南京軍區(qū)聯(lián)勤部藥品儀器檢驗(yàn)所，江蘇南京210002）

差示分光光度法鑒別復(fù)方薄荷腦滴鼻液中的樟腦成分

伍小勇，康娟娟，張曉丹，金麗，卜瑩，古卓良
（南京軍區(qū)聯(lián)勤部藥品儀器檢驗(yàn)所，江蘇南京210002）

目的建立一種鑒別復(fù)方薄荷腦滴鼻液中樟腦成分的方法。方法分別對(duì)乙醇提取的供試品溶液和參比溶液，加入活性炭進(jìn)行優(yōu)化處理，采用差示分光光度法，在230～350 nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)測(cè)定最大吸收波長(zhǎng)，用以鑒別樟腦。結(jié)果液體石蠟會(huì)干擾樟腦的測(cè)定，采用差示分光光度法處理后可排除液體石蠟的干擾；專屬性試驗(yàn)和耐用性試驗(yàn)表明該方法結(jié)果準(zhǔn)確可信；測(cè)定7批樣品中的樟腦成分發(fā)現(xiàn)均在（289±2）nm處有最大吸收峰，吸光度為0.3～0.6。結(jié)論差示分光光度法具有操作簡(jiǎn)單方便，對(duì)儀器要求低，結(jié)果快速、準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)，值得推廣應(yīng)用。

分光光度法；復(fù)方合劑；投藥，鼻內(nèi)；薄荷腦/分析；樟腦/分析

復(fù)方薄荷腦滴鼻液是一種常用的制劑，由薄荷腦和樟腦研磨液化后溶于液狀石蠟制成。該制劑具有潤(rùn)滑黏膜、消炎、止痛等作用，主要用于治療干燥性和萎縮性鼻炎及傷風(fēng)、鼻塞等。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)采用紫外分光光度法對(duì)樟腦進(jìn)行鑒別[1]。該標(biāo)準(zhǔn)中采用乙醇提取，而乙醇提取液中有微量液體石蠟（液體石蠟微溶于乙醇），其在230～350 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)有吸收，并且不同廠家、不同批號(hào)的液體石蠟對(duì)紫外線吸收強(qiáng)度不一，因此容易干擾樟腦的鑒別測(cè)定。多年來(lái)，已有大量文獻(xiàn)報(bào)道采用升華法[2-3]、水蒸餾法[4]、冰浴法[5]、紫外分光光度法[6]、差示分光光度法[7-8]、高效液相色譜法[9]和氣相色譜法[10-11]等方法鑒別復(fù)方薄荷腦滴鼻液中的樟腦成分，但前4種方法均無(wú)法徹底排除液體石蠟的干擾，而高效液相色譜法和氣相色譜法又不適用于廣大基層實(shí)驗(yàn)室，因而均未得到廣泛應(yīng)用。本研究采用差示分光光度法，對(duì)乙醇提取的供試品溶液和參比溶液加入活性炭進(jìn)行優(yōu)化處理，排除液體石蠟的干擾，可較好地鑒別復(fù)方薄荷腦滴鼻液中的樟腦成分，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器電子天平（MS105型，Mettler Toledo公司）；紫外分光光度計(jì)（UV2550、UV2450型，日本島津公司）；氣相色譜儀（GC-2010型，日本島津公司）。

1.1.2 試劑

1.1.2.1 對(duì)照品樟腦（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110747-201008，純度99.0％）；薄荷腦（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110728-200508）。

1.1.2.2 原輔料薄荷腦（南通薄荷廠有限公司，批號(hào)：130702）；樟腦（廣州黃埔化工有限公司，批號(hào)：20130222）；輕質(zhì)液體石蠟（南昌白云藥業(yè)有限公司，批號(hào)：20130904）；液體石蠟（廣東光華科技股份有限公司，批號(hào)：20130411）。

1.1.2.3 樣品復(fù)方薄荷腦滴鼻液樣品A、B、C（南京軍區(qū)南京總醫(yī)院，A、B、C批號(hào)：130801、130802、130806），樣品D（解放軍第81醫(yī)院，批號(hào)：130206），樣品E（解放軍第98醫(yī)院，批號(hào)：130301），樣品F（解放軍第97醫(yī)院，批號(hào)：20130308），樣品G（解放軍第94醫(yī)院，批號(hào)：130207）。

1.2 方法

1.2.1 供試品溶液的制備（1）樟腦對(duì)照品溶液：稱取樟腦對(duì)照品0.025 01 g，置于10 mL容量瓶中，加乙醇適量使其溶解并稀釋至刻度，震蕩混勻。（2）薄荷腦對(duì)照品溶液：稱取薄荷腦0.025 04 g，置于10 mL容量瓶中，加乙醇適量使其溶解并稀釋至刻度，震蕩混勻。（3）輕質(zhì)液體石蠟和液體石蠟供試品溶液：各取輕質(zhì)液體石蠟和液體石蠟0.1 g，分別加入乙醇20 mL，震蕩混勻。分別以3 000 r/min離心10 min，分離的上清液作為供試品溶液。

1.2.2 樟腦鑒別方法的建立取樣品A 5 mL，加乙醇10 mL振搖提取，分取上層乙醇液，加活性炭0.1 g，搖勻，濾過(guò)，續(xù)濾液作為供試品溶液。取下層液體石蠟溶液，用乙醇20 mL洗滌，棄去洗滌液，再加入乙醇10 mL，振搖提取，取上層乙醇液，加活性炭0.1 g，搖勻，濾過(guò)，續(xù)濾液作為參比溶液，紫外分光光度法測(cè)定，分別在230～350 nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)測(cè)定最大吸收。

1.2.3 紫外吸收光譜的確定以乙醇為空白，紫外分光光度法測(cè)定，在波長(zhǎng)230～350 nm處分別測(cè)定2種對(duì)照品溶液（樟腦、薄荷腦）以及2份液體石蠟供試品溶液。觀察各自吸收峰及相互間干擾情況。

1.2.4 復(fù)方薄荷腦滴鼻液中樟腦鑒別方法的可行性試驗(yàn)按處方，分別用輕質(zhì)液體石蠟和液體石蠟制備100mL復(fù)方薄荷腦滴鼻液模擬樣品S1、S2。各取3 mL，加乙醇6 mL，搖勻，以3 000 r/min離心10 min，取上清液作為供試品溶液。另取同廠家、同批號(hào)的輕質(zhì)液體石蠟和液體石蠟各3 mL，分別加乙醇5 mL，搖勻，以3 000 r/min離心10 min，取上清液作為參比溶液，紫外分光光度法測(cè)定230～350 nm波長(zhǎng)內(nèi)吸光度（A）值。

1.2.5 專屬性試驗(yàn)陰性供試品溶液制備：取薄荷腦原料藥1 g，置于干燥乳缽中，研磨，加液體石蠟至100 mL，研勻即得。按1.3.2項(xiàng)下方法同法試驗(yàn)。分別用輕質(zhì)液體石蠟和液體石蠟制得陰性供試品溶液S輕質(zhì)陰、S液陰。

1.2.6 耐用性試驗(yàn)

1.2.6.1 不同樣品量對(duì)鑒別結(jié)果的影響中國(guó)藥典2010版二部[12]中樟腦鑒別項(xiàng)下，供試品溶液樟腦濃度為2.5 mg/mL，參照此標(biāo)準(zhǔn)，作為樣品量的取量范圍，取樣品A 1～7 mL，按1.3.2項(xiàng)下方法處理，測(cè)定吸光度。

1.2.6.2 加入活性炭不同量對(duì)鑒別結(jié)果的影響分別在鑒別樣品A中加入不同量（0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30 g）的活性炭，觀察其對(duì)鑒定結(jié)果的影響。

1.2.6.3 提取參比液前加入洗滌液乙醇不同量對(duì)鑒別結(jié)果的影響采用樣品A考察，分別加入不同量洗滌液乙醇[0、10、20（分2次加入）、20 mL（1次加入）]，觀察其對(duì)鑒別結(jié)果的影響。

1.2.6.4 不同型號(hào)紫外分光光度計(jì)的檢測(cè)結(jié)果將7批樣品A～G按1.2.1項(xiàng)下方法處理，分別在2種型號(hào)（UV-2550、UV-2450）的紫外分光光度計(jì)上檢測(cè)。

1.2.7 樣品測(cè)定按1.2.2項(xiàng)下方法，同時(shí)測(cè)定3批本次制定標(biāo)準(zhǔn)用樣品A、B、C和本所2013年4批抽樣樣品D、E、F、G。

1.2.8 氣相色譜法驗(yàn)證將樟腦、薄荷腦對(duì)照品溶液，液體石蠟供試品溶液、陰性供試品溶液S輕質(zhì)陰及5個(gè)不同廠家的供試品溶液，參照文獻(xiàn)[9-10]中的氣相色譜法測(cè)定，并進(jìn)行驗(yàn)證。測(cè)定條件：柱溫120℃，進(jìn)樣口和檢測(cè)口溫度均為190℃，火焰離子化檢測(cè)器（FID）。毛細(xì)管柱：RTX-WAX型（聚乙二醇20mol/L，柱長(zhǎng)30m，內(nèi)徑0.32mm，薄膜厚0.25 μm），進(jìn)樣量1 μL。

2 結(jié)果

2.1 各純組分的紫外吸收光譜測(cè)定在290 nm處樟腦有最大吸收，薄荷腦無(wú)吸收峰，液體石蠟有明顯吸收，且2批液體石蠟的圖譜有較大差異。液體石蠟對(duì)樟腦紫外吸收峰有較大的干擾，而薄荷腦幾乎沒(méi)有干擾。

2.2 復(fù)方薄荷腦滴鼻液中樟腦鑒別方法的可行性試驗(yàn)試驗(yàn)結(jié)果表明，兩模擬樣品在290 nm處均有最大吸收。用同廠家、同批號(hào)的液體石蠟對(duì)樟腦紫外吸收峰無(wú)干擾。由于實(shí)際檢測(cè)工作中，無(wú)法得到與原制劑同廠家、同批號(hào)的液體石蠟，因而樟腦紫外吸收峰常產(chǎn)生漂移，無(wú)法鑒別。參考文獻(xiàn)[2-8，13]中的方法，通過(guò)多次改進(jìn)實(shí)驗(yàn)操作，均無(wú)法得到滿意的結(jié)果；最終采用二次提取法，提取原制劑中的液體石蠟，并加入活性炭作適當(dāng)?shù)膬?yōu)化處理，作為參比溶液，則可實(shí)現(xiàn)用紫外分光光度法對(duì)樟腦的鑒別。

2.3 專屬性試驗(yàn)兩陰性供試品溶液的吸光度較小，且在（289±2）nm處均無(wú)最大吸收峰，結(jié)果表明該方法不會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性，見(jiàn)圖1。

圖1 陰性供試品溶液紫外圖譜

2.4 耐用性試驗(yàn)

2.4.1 不同樣品量對(duì)鑒別結(jié)果的影響按方法1.2.6.1項(xiàng)操作，結(jié)果見(jiàn)表1。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：當(dāng)取樣量為1 mL時(shí)，由于取樣量過(guò)少，供試液提取并用乙醇20 mL洗滌后，剩余的液體石蠟量已很少，因而參比溶液中提取的液體石蠟未達(dá)飽和，與供試品溶液中提取的液體石蠟不平衡，測(cè)得的紫外圖譜有時(shí)存在部分漂移；取樣量為5～7 mL時(shí)，乙醇2次提取法得到的樟腦最大吸收波長(zhǎng)在（289±2）nm處，可基本消除液體石蠟對(duì)樟腦紫外吸收峰的干擾，并且樟腦的A值為0.3～0.6。

表1 不同樣品量下樟腦紫外分光光度法測(cè)定結(jié)果

2.4.2 加入不同量活性炭對(duì)鑒別結(jié)果的影響按1.2.6.2項(xiàng)操作采用樣品A考察加入活性炭量對(duì)鑒別結(jié)果的影響，見(jiàn)表2。結(jié)果表明，微量的活性炭即可去除液體石蠟的干擾。為方便活性炭稱量和樣品過(guò)濾，活性炭加入量為0.1 g較佳。

表2 不同活性炭加入量下樟腦紫外測(cè)定結(jié)果

2.4.3 提取參比液前加入洗滌液乙醇不同量對(duì)鑒別結(jié)果的影響按1.2.6.3項(xiàng)操作采用樣品A考察加入洗滌液乙醇量對(duì)鑒別結(jié)果的影響，見(jiàn)表3。

表3 不同洗滌液乙醇量下樟腦紫外測(cè)定結(jié)果

2.4.4 不同型號(hào)紫外分光光度計(jì)的檢測(cè)結(jié)果各樣品在2種型號(hào)紫外分光光度計(jì)均檢測(cè)出在（289±2）nm處有最大吸收峰，見(jiàn)圖2。

圖2 不同型號(hào)紫外分光光度計(jì)測(cè)定樣品的紫外圖譜

2.5 樣品測(cè)定7批樣品均能通過(guò)本法較好的鑒別出樟腦成分，并且樟腦的A值為0.3～0.6，見(jiàn)圖2。

2.6 氣相色譜法驗(yàn)證5個(gè)廠家的樣品均檢出樟腦，液體石蠟和陰性樣品無(wú)干擾，結(jié)果表明本差示分光光度法檢測(cè)結(jié)果較為準(zhǔn)確、可靠。見(jiàn)圖3。

圖3 對(duì)照品、陰性樣品及樣品的氣相色譜圖譜

3 討論

3.1 參比溶液中存在部分的樟腦，但是供試品中的濃度C供要比參比溶液C參高幾倍。根據(jù)Beer定律，設(shè)定任意兩波長(zhǎng)λ1和λ2，當(dāng)用乙醇提取同廠家、同批號(hào)液體石蠟所得的空白溶液作參比溶液時(shí)，兩波長(zhǎng)處的吸光度比值為A1/A2=E1CL/E2CL=E1/E2；當(dāng)用乙醇二次提取溶液作為參比溶液時(shí)，λ1處A1=E1（C供-C參）L；λ2處A2=E2（C供-C參）L，因而兩波長(zhǎng)處吸光度比值也為A1/A2=E1（C供-C參）L/E2（C供-C參）L=E1/E2，所以雖然參比溶液中含有檢測(cè)成分樟腦，但是峰形不會(huì)變化，最大吸收峰也未變化。

3.2 陳新善等[13]報(bào)道，采用化學(xué)方法鑒別復(fù)方薄荷腦滴鼻液中的樟腦是可行的。但是由于液體石蠟（特別是輕質(zhì)液體石蠟，而制備本制劑時(shí)南京戰(zhàn)區(qū)大部分醫(yī)院采用輕質(zhì)液體石蠟）溶液起初顯渾濁狀，會(huì)干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果的判斷，且最終實(shí)驗(yàn)結(jié)果需等待較長(zhǎng)時(shí)間（靜置4 h也未見(jiàn)明顯的絮狀沉淀析出），因而未采用其作為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

3.3 研究還發(fā)現(xiàn)，樣品D、F不論采取離心、靜置、加鹽還是冰浴等各種方法處理，均無(wú)法得到理想的結(jié)果，樣品D無(wú)最大吸收峰或最大吸收波長(zhǎng)在270 nm左右，樣品F最大吸收波長(zhǎng)在282～284 nm處，有5～7 nm的偏移。究其原因，是用乙醇提取時(shí)，由于液體石蠟與乙醇不互溶，振搖提取后，乙醇溶液中懸浮微小石蠟液滴，離心或長(zhǎng)時(shí)間放置也難以完全分層，因而干擾樣品的測(cè)定。當(dāng)加入少量的活性炭后，可吸附溶液中的液體石蠟，因而可去除液體石蠟的干擾。

本研究結(jié)果顯示，取用樣品量設(shè)定為5 mL，洗滌液加入量為20 mL，活性炭加入量為0.1 g時(shí)，可測(cè)得樟腦最大吸收波長(zhǎng)在（289±2）nm處，樟腦的A值為0.3～0.6，測(cè)定的誤差較小，并且符合藥典[12]中紫外分光光度法對(duì)樟腦A值的要求（0.3～0.7）。

綜上所述，差示分光光度法鑒別復(fù)方薄荷腦滴鼻液中的樟腦成分，方法操作簡(jiǎn)單、方便，適用于儀器配置較低的基層實(shí)驗(yàn)室采用；且測(cè)定結(jié)果快速準(zhǔn)確，值得推廣應(yīng)用。

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Identification of camphor in compound menthol nasal drops by differential spectrophotometry

Wu Xiaoyong，Kang Juanjuan，Zhang Xiaodan，Jin Li，Bu Ying，Gu ZhuoLiang
（Nanjing Institute for Quality Control of Medical Material and Equipment，Jiangsu，Nanjing 210002，China）

Objective To establish an method for identification of camphor in compound menthol nasal drops.Methods Adding activated carbon to optimize the ethanol extract of the test solution and reference solution from alcohol，differential spectrophotometry was adopted to determine the maximum absorption wavelength in the wavelength range of 230-350 nm for identification of camphor.Results Liquid paraffin may intervene into the determination of camphor.The application of differential spectrophotometry can avoid of the interference.The results of specificity test and durability test demonstrate the new method is accurate and reliable.Camphor were detected in seven batches of samples by the new method，all of which had maximum absorption peak at wavelength（289±2）nm and the absorbance ranged 0.3-0.6.Conclusion The differential spectrophotometry is simple and avaliable to operate，low in instruments requirements，rapid and accurate results，which is worthy to expand and apply further.

Spectrophotometry；Drug combinations；Administration，intranasal；Menthol/analysis；Camphor/ analysis

10.3969/j.issn.1009-5519.2015.02.001

A

1009-5519（2015）02-0161-03

2014-07-31）

軍隊(duì)醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)提高科研專項(xiàng)課題（13ZJZ07）。

伍小勇（1975-），男，江西新余人，碩士研究生，主管藥師，主要從事藥物分析相關(guān)研究；E-mail：wuxy5@163.com。

古卓良（E-mail：gujulia@163.com）。