雛雞大腸桿菌的實驗室診斷

（黑龍江省綏化市北林區(qū)動物檢疫站 152000）

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病料來源

病料來源為綏化市某縣市中隨機選出的三個雞場中疑似大腸桿菌感染的7日齡雞群中分別各取出10只進(jìn)行臨床診斷和實驗室診斷。

1.1.2 培養(yǎng)基和試劑

主要培養(yǎng)基和試劑有麥康凱瓊脂、伊紅美藍(lán)瓊脂、革蘭染液，普通肉湯培養(yǎng)基、普通瓊脂培養(yǎng)基、三糖鐵瓊脂、藥敏片、葡萄糖、麥芽糖、甘露醇、乳糖、蔗糖、枸櫞酸鹽及各類生化反應(yīng)試劑、大腸埃希菌O型抗血清。

1.1.3 儀器

主要儀器有顯微鏡、試管、培養(yǎng)皿、吸管等。

1.2 進(jìn)行雛雞大腸桿菌實驗的方法

分別對三個雞舍的雞群總數(shù)、發(fā)病數(shù)和死亡數(shù)作出統(tǒng)計。無菌采集病死雞的心、肝、脾、肺、腎等組織，將病料觸片和血液涂片，分別進(jìn)行革蘭染色和堿性美藍(lán)染色、鏡檢。對A、B、C三個樣病例進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)和血清型鑒定。從三個樣中隨機挑取兩個總共組成6個（a、b、c、d、e、f）紫黑色帶有金屬光澤的菌落接種到斜面培養(yǎng)基上，37℃恒溫培養(yǎng)18～24 h。觀察細(xì)菌生長及菌落特征。

1.2.1 動物回歸試驗

將分離純培養(yǎng)的6個病原菌菌液頸部皮下接種30只7日齡雛雞，每只0.2mL（約2×108cfu）。并設(shè)10只為對照組，每只頸部皮下注射0.2mL滅菌肉湯。隔離飼養(yǎng)，觀察1星期。

1.2.2 藥敏試驗

將斜面培養(yǎng)基中增菌純培養(yǎng)的菌株培養(yǎng)液均勻涂布于普通瓊脂培養(yǎng)基表面，37℃干燥8min。然后用滅菌鑷子取10種抗生素藥物紙片，將其分別對稱地貼在培養(yǎng)基表面，每個平皿貼4種，37℃恒溫培養(yǎng)18～20 h后觀察結(jié)果。使用的10種藥物為呋喃妥因、復(fù)方新諾明、慶大霉素、鏈霉素、青霉素、丙氟哌酸、頭孢他啶、利福平、磺胺嘧啶、新生霉素。還做了平板凝集試驗和生化試驗。

2 結(jié)果與分析

2.1 鏡檢、血清型鑒定和生化試驗結(jié)果

病料涂片染色與病料接種培養(yǎng)后染色鏡檢，均檢測到革蘭陰性短桿菌。選擇攻毒試驗中對雞呈現(xiàn)高致病力的菌株a、b、c、d、e與禽大腸桿菌O型單因子血清分別進(jìn)行平板凝集試驗，三個樣A、B、C的血清型鑒定鑒定結(jié)果都包含O1、O2、O78。A、B、C三個群體總共30只病例中，有16只分離株是可以定型的，其中以O(shè)1、O2、O78為主，這三種血清型在種類上占總量的53.3%（16／30）因此，可以認(rèn)為O78、O1、O2可能是綏化地區(qū)的優(yōu)勢血清型。對分離的病原菌進(jìn)行生化試驗，均能分解葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇及蔗糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，初步判斷為大腸桿菌。

2.2 動物回歸試驗結(jié)果及分析

采用相同菌株攻毒，雞只死亡數(shù)量具體見表1。

表1 同菌株攻毒后雞只死亡數(shù)

通過用6組菌株分別給6組雞攻毒結(jié)果來看，有4組都是陽性，其病理變化原發(fā)病雞基本一致。無菌采集病死雞臟器進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢測，結(jié)果分離到與送檢病例一致的大腸埃希菌。

2.3 藥敏試驗

選取藥物進(jìn)行藥物敏感性試驗，結(jié)果見表2。

表2 藥敏試驗結(jié)果

3 討論

A、B、C三家雞場都是同一時期引進(jìn)的雞苗，出自同一雞苗生產(chǎn)公司，對三家的雞舍環(huán)境衛(wèi)生以及飼養(yǎng)管理條件進(jìn)行考察和比較來看，都存在通風(fēng)不良的情況，且在對雞舍加溫時都采用了火爐方式，放雞苗時從管理人員那里得知雞舍內(nèi)存在較重的煤氣；雞群發(fā)病期間末進(jìn)行對癥治療，僅憑借經(jīng)驗采用超高濃度的藥物飼喂雛雞。因此，三個雞場的發(fā)病情況和死亡率（分別是6.0%、5.2%與5.3%）情況基一致。

通過藥敏試驗可得出：可以采用對病原菌有高敏感性的抗生素對發(fā)病雞群進(jìn)行治療；大腸桿菌的高敏感藥物減少，多為中低敏藥物并且產(chǎn)生耐藥菌株。這可能是平時飼養(yǎng)管理時，多用濫用抗生素和病情長時間不能得到控制從而使病原菌不斷的演化，對抗生素和一些藥物產(chǎn)生耐藥性。

從16株定型菌株的鑒定結(jié)果可以看出，O1、O2、O78等菌株出現(xiàn)的機率相對較高，且為優(yōu)勢血清群，這與國內(nèi)、外稱O1、O2、O35、O78為禽常見的致病性大腸桿菌血清型的結(jié)論一致。

本次針對三個養(yǎng)殖雞舍中雛雞大腸桿菌病的發(fā)病情況和飼養(yǎng)管理情況來看，一方面最主要原因可能是種蛋受到大腸桿菌的感染，另一方面加上轉(zhuǎn)移雛雞時雞舍的環(huán)境溫度和空氣凈化度控制不得當(dāng)兩方面的原因?qū)е码r雞大批發(fā)病死亡；并且在發(fā)病期間，相關(guān)養(yǎng)殖和技術(shù)人員并不清楚病因就僅憑借經(jīng)驗，抗生素嚴(yán)重超標(biāo)以及濫用抗生素，使得雛雞繼發(fā)中毒，從而造成更嚴(yán)重的死亡；并使得大腸桿菌不斷進(jìn)化出更為耐藥的強毒株，通過藥敏試驗可以清晰的看到分離菌株已經(jīng)對幾種藥物產(chǎn)生抗性，選擇高敏感的藥物，用藥2天后雛雞發(fā)病情況得到控制，用藥1星期后，病雞基本康復(fù)；這使得我們今后在用藥方面應(yīng)該注意藥物的耐藥性問題以及對藥物的選擇性問題上具有指導(dǎo)意義。