二色波羅蜜對(duì)血瘀模型大鼠血液流變學(xué)的影響

□盧海嘯，馮春鋒，黃美玲，王艷華，何小芳

（1. 玉林師范學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，廣西 玉林，537000；2. 玉林市婦幼保健院，廣西 玉林，537000）

二色波羅蜜對(duì)血瘀模型大鼠血液流變學(xué)的影響

□盧海嘯1，馮春鋒2，黃美玲1，王艷華1，何小芳1

（1. 玉林師范學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，廣西 玉林，537000；2. 玉林市婦幼保健院，廣西 玉林，537000）

目的：觀察二色波羅蜜提取物對(duì)血瘀模型大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)的影響.方法：采用持續(xù)力竭性游泳血瘀模型，檢測(cè)全血黏度、血漿黏度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、血小板數(shù)、TT、PT、APTT、FIB，觀察二色波羅蜜提取物對(duì)血瘀模型大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)的影響.結(jié)果：與模型組相比，二色波羅蜜提取物能顯著改善血液流變學(xué)指標(biāo).二色波羅蜜提取物能降低全血黏度、血漿黏度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、血小板數(shù)、TT、FIB ，提高PT、APTT.結(jié)論：二色波羅蜜提取物具有改善血液流變學(xué)指標(biāo)的作用，其活血化瘀的有效部位為乙酸乙酯提取物.

二色波羅蜜；血液流變學(xué)；有效部位

二色波羅蜜Artocarpus styracifolius Pierre為?？疲∕oraceae）波羅蜜屬（Artocarpus）植物，具有祛風(fēng)除濕、舒筋活血的功效[1]，臨床上主要用于風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腰肌勞損、風(fēng)濕痹痛、偏癱、跌打損傷等[2，3].初步研究發(fā)現(xiàn)，其化學(xué)成分主要為黃酮類化合物[4-7].現(xiàn)代研究顯示，二色波羅蜜具有抗抑郁[8]，抗瘧原蟲、錐蟲、細(xì)胞毒[5]，抑制中性粒細(xì)胞爆發(fā)[6]等活性.為了明確二色波羅蜜的傳統(tǒng)功效——活血化瘀的作用機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了二色波羅蜜提取物對(duì)血瘀模型大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)的影響.

1 材料與儀器

1.1 動(dòng)物 SD大鼠130只，體質(zhì)量為（220±10）g，雄性，清潔級(jí)，購(gòu)于廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心.許可證號(hào)：SCXK桂2003-000.

1.2 藥物和試劑 二色波羅蜜采于廣西岑溪市吉太鄉(xiāng).原植物經(jīng)廣西林業(yè)勘查設(shè)計(jì)院鐘業(yè)聰高級(jí)工程師鑒定，為?？疲∕oraceae）波羅蜜屬（Artocarpus）植物二色波羅蜜Artocarpus styracifolius Pierre.采后粉碎，陰干備用；75 %消毒酒精、95 %乙醇（分析純）購(gòu)于天津百世化工有限公司；0.9 %氯化鈉注射液（A130724H、貴州科倫藥業(yè)有限公司）；復(fù)方丹參片（130603、鄭州瑞龍制藥股份有限公司）.

1.3 儀器 MVIS-2035全自動(dòng)血流變分析儀（重慶天海醫(yī)療設(shè)備有限公司），7180全自動(dòng)生化分析儀（日本日立株式會(huì)社），XE-5000血液分析儀（日本sysmex公司），RE-2000A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠），SHZ-D（III）循環(huán)水式真空泵（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司），電子分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）等.

2 方法

2.1 提取物的制備 稱取二色波羅蜜的干燥藥材粉末適量，用95 %乙醇熱回流提取2 h，過(guò)濾，得到二色波羅蜜提取液，重復(fù)3次，合并提取液，減壓濃縮，得到浸膏狀的二色波羅蜜粗提取物，取二色波羅蜜粗提取物加入適量蒸餾水，用超聲波助溶，成混懸液，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分別減壓濃縮得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水提取物，備用.使用時(shí)用生理鹽水配制成混懸液.

2.2 二色波羅蜜活性部位的篩選

2.2.1 動(dòng)物分組與給藥 采用單純隨機(jī)法進(jìn)行分組（空白對(duì)照組、模型組、丹參片組、石油醚提取物組、乙酸乙酯提取物組、正丁醇提取物組、水提取物組），每組10只.除空白對(duì)照組外，其余各組均進(jìn)行造模.采用灌胃給藥，1次/d，給藥劑量：丹參片組100 mg·kg-1，其余各給藥組200 mg·kg-1，空白對(duì)照組、模型組給予等容生理鹽水.

2.2.2 血瘀模型的制作 根據(jù)“勞則氣耗”的中醫(yī)學(xué)理論，選擇游泳力竭法[9]制備大鼠氣虛血瘀狀態(tài).先適應(yīng)性游泳訓(xùn)練3天，然后每天力竭性游泳1次，持續(xù)21天.

2.2.3 血液流變學(xué)指標(biāo)的測(cè)定[10]于實(shí)驗(yàn)第21天，各組大鼠以10 %水合氯醛，按0.35 mg·kg-1體重腹腔注射麻醉后腹主動(dòng)脈采血.檢測(cè)血液流變性、紅細(xì)胞流變性及凝血相關(guān)血液學(xué)指標(biāo).包括全血黏度、血漿黏度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、血小板數(shù)、凝血時(shí)間（TT）、凝血酶原時(shí)間（PT）、活化部分凝血活酶時(shí)間（APPT）、纖維蛋白原（FIB）含量.

2.3 二色波羅蜜乙酸乙酯提取物的量效關(guān)系 將SD大鼠隨機(jī)分為6組：空白對(duì)照組和模型組(灌胃等容生理鹽水)；陽(yáng)性對(duì)照組（按100 mg·kg-1灌胃丹參片溶液）；二色波羅蜜乙酸乙酯提取物低、中、高劑量組（分別灌胃給藥100 mg·kg-1、200 mg·kg-1、300 mg·kg-1）.實(shí)驗(yàn)方法同“2.2.2”、“2.2.3”項(xiàng). 2.4 數(shù)據(jù)處理 所有數(shù)據(jù)以表示，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS17.0 for windows統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用單因素方差分析法進(jìn)行分析，組間比較用t檢驗(yàn).P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.

3 結(jié)果與分析

3.1 二色波羅蜜活性部位的篩選

3.1.1 各組大鼠全血黏度及血漿黏度 結(jié)果如表1所示，與空白對(duì)照組比較，模型組的全血黏度和血漿黏度均增加（P＜0.01）.與模型組相比，各組全血黏度均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）.與模型組比較，各組血漿黏度差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），尤其是乙酸乙酯提取物組和水提取物組.

表1 各組大鼠全血黏度及血漿黏度比較（±s）

表1 各組大鼠全血黏度及血漿黏度比較（±s）

與空白對(duì)照組比，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比，#P＜0.05，##P＜0.01.

全血黏度（mpas）血漿黏度（mpas）高切200/S中切100/S低切3/S空白對(duì)照組等容6.28±0.18##7.04±0.20##12.50±0.28##1.49±0.06##模型組等容9.68±0.19**9.82±0.54**14.33±0.92**1.66±0.03**丹參片組1006.02±0.14##6.83±0.18##12.93±0.57#1.56±0.03*##石油醚提取物組2006.12±0.05##6.83±0.24*##12.09±0.90##1.55±0.03*##乙酸乙酯提取物組2005.66±0.24**##6.35±0.28**##11.92±0.43##1.48±0.02##正丁醇提取物組2006.13±0.17##6.95±0.21##13.12±0.75#1.54±0.01##水提取物組2005.65±0.22**##6.42±0.28##12.91±0.61##1.49±0.02##組別劑量（mg·kg-1）

3.1.2 各組大鼠紅細(xì)胞聚集指數(shù) 結(jié)果見(jiàn)表2，與空白對(duì)照組比較，模型組和乙酸乙酯組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）.與模型組相比，各組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），尤其是二色波羅蜜乙酸乙酯提取物組（P＜0.01）.

表2 各組大鼠紅細(xì)胞聚集指數(shù)比較（±s）

表2 各組大鼠紅細(xì)胞聚集指數(shù)比較（±s）

與空白對(duì)照組比，**P＜0.01；與模型組比，##P＜0.01.

組別劑量（mg·kg-1）紅細(xì)胞聚集指數(shù)空白對(duì)照組等容8.48±0.39##模型組等容12.39±0.34**丹參片組1008.05±0.31##石油醚提取物組2007.96±0.58##乙酸乙酯提取物組2007.66±0.37**##正丁醇提取物組2008.72±0.27##水提取物組2008.66±0.39##

3.1.3 各組大鼠血小板數(shù) 如表3所示，與空白對(duì)照組比較，除乙酸乙酯提取物組外，各組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）.與模型組比較，各組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01），其中乙酸乙酯提取物組最接近正常值（P＜0.01）.

表3 各組大鼠血小板數(shù)比較（±s）

表3 各組大鼠血小板數(shù)比較（±s）

與空白對(duì)照組比，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比，#P＜0.05，##P＜0.01.

組別劑量（mg·kg-1）血小板數(shù)（/L）空白對(duì)照組等容653.25±34.60##模型組等容971.67±80.87**丹參片組100833.33±24.95**##石油醚提取物組200809.33±46.82**##乙酸乙酯提取物組200690.50±53.57##正丁醇提取物組200855.67±27.02**#水提取物組200765.75±85.42*##

3.1.4 各組大鼠TT、PT、APTT及FIB 測(cè)定結(jié)果 結(jié)果見(jiàn)表4，與空白對(duì)照組比較，模型組TT、PT、APTT、FIB的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）.與模型組比較，各組的TT、PT、APTT、FIB均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）.尤其是乙酸乙酯提取物組（P＜0.01）.表中顯示模型組的TT時(shí)間延長(zhǎng)可能是由于PT、APTT降低所致.

表4 各組大鼠TT、PT、APTT、FIB測(cè)定結(jié)果比較（±s）

表4 各組大鼠TT、PT、APTT、FIB測(cè)定結(jié)果比較（±s）

與空白對(duì)照組比，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比，##P＜0.01.

組別劑量（mg·kg-1）TT (s)PT (s)APTT (s)FIB (g/L)空白對(duì)照組等容22.15±0.35##11.70±0.34##27.35±0.70##1.53±0.34##模型組等容28.27±0.38**9.50±0.17**20.60±0.35**3.49±0.53**丹參片組10024.20±0.26**##10.90±0.30##24.47±0.50**##2.32±0.44**##石油醚提取物組20026.10±0.26**##10.57±0.15##24.53±0.31**##2.41±0.04**##乙酸乙酯提取物組20024.87±0.84**##10.93±0.39##26.53±0.40##2.10±0.43*##正丁醇提取物組20024.63±0.40**##10.90±0.50*##24.43±0.59**##2.27±0.14*##水提取物組20025.05±0.29**##10.53±0.37**##24.18±0.99**##2.43±0.21**##

3.2 二色波羅蜜乙酸乙酯提取物量效關(guān)系

3.2.1 各組大鼠全血黏度及血漿黏度

如表5所示，二色波羅蜜乙酸乙酯提取物對(duì)血漿黏度的影響隨著劑量的增大而增大（P＜0.01），呈現(xiàn)出一定的量效關(guān)系.

表5 二色波羅蜜乙酸乙酯提取物大鼠全血黏度及血漿黏度比較（±s）

表5 二色波羅蜜乙酸乙酯提取物大鼠全血黏度及血漿黏度比較（±s）

與空白對(duì)照組比，**P＜0.01；與模型組比，##P＜0.01.

組別劑量（mg·kg-1）全血黏度（mpas）血漿黏度（mpas）高切200/S中切100/S低切3/S空白對(duì)照組等容6.67±0.13##7.47±0.14##14.25±0.20##1.58±0.04##模型組等容7.60±0.12**8.77±0.15**15.70±0.24**1.76±0.05**丹參片組1006.48±0.13##7.27±0.21##14.63±0.32##1.56±0.03##低劑量組1005.76±0.22**##6.67±0.16**##12.07±0.33**##1.52±0.06##中劑量組2005.36±0.12**##6.25±0.25**##10.68±0.14**##1.43±0.08**##高劑量組3005.16±0.14**##5.81±0.10**##9.95±0.24**##1.25±0.05**##

3.2.2 大鼠紅細(xì)胞聚集指數(shù)

如表6所示，二色波羅蜜乙酸乙酯提取物隨著劑量的增大，其紅細(xì)胞聚集指數(shù)的呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)（P＜0.01）.

表6 二色波羅蜜乙酸乙酯提取物大鼠紅細(xì)胞聚集指數(shù)比較（±s）

表6 二色波羅蜜乙酸乙酯提取物大鼠紅細(xì)胞聚集指數(shù)比較（±s）

與空白對(duì)照組比，**P＜0.01；與模型組比，##P＜0.01.

組別劑量（mg·kg-1）紅細(xì)胞聚集指數(shù)空白對(duì)照組等容9.28±0.10##模型組等容10.55±0.14**丹參片組1009.63±0.13**##低劑量組1008.36±0.06**##中劑量組2006.75±0.17**##高劑量組3006.24±0.19**##

3.2.3 大鼠血小板數(shù)

如表7所示，二色波羅蜜乙酸乙酯提取物隨著劑量的增大，血小板數(shù)呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)（P＜0.01）.

表7 二色波羅蜜乙酸乙酯提取物大鼠血小板數(shù)比較（±s）

表7 二色波羅蜜乙酸乙酯提取物大鼠血小板數(shù)比較（±s）

與空白對(duì)照組比，**P＜0.01；與模型組比，##P＜0.01.

組別劑量（mg·kg-1）血小板數(shù)（/L）空白對(duì)照組等容532.00±65.39##模型組等容1130.00±39.75**丹參片組100770.00±45.76**##低劑量組100804.75±42.95**##中劑量組200664.00±33.97**##高劑量組300543.00±41.06##

3.2.4 大鼠TT、PT、APTT及FIB 測(cè)定結(jié)果

如表8所示，二色波羅蜜乙酸乙酯提取物對(duì)TT、PT、APTT、FIB的影響（P＜0.01），呈現(xiàn)出一定的量效關(guān)系.

表8 二色波羅蜜乙酸乙酯提取物大鼠TT、PT、APTT、FIB測(cè)定結(jié)果比較（x±s）

4 討論

本實(shí)驗(yàn)采用血液流變學(xué)的指標(biāo)觀察二色波羅蜜不同提取物對(duì)血瘀大鼠的影響.全血粘度是一個(gè)綜合性指數(shù)，它是血漿粘度、紅細(xì)胞變形指數(shù)和聚集能力、血小板流變特性的綜合表現(xiàn).全血粘度增高，反映血液的“粘”；血漿粘度增高，反映血液的“凝”；紅細(xì)胞聚集指數(shù)增高，反映血液的“聚”.如果紅細(xì)胞剛性增高、聚集性過(guò)強(qiáng)，則此時(shí)紅細(xì)胞會(huì)聚集成串成團(tuán)，流動(dòng)困難，使血粘度增高.本實(shí)驗(yàn)以二色波羅蜜提取物應(yīng)用于血瘀模型大鼠，觀測(cè)到其使大鼠血液粘、凝、聚狀態(tài)明顯改善，提示該藥能改善血瘀模型大鼠異常的血液流變性，這在一定程度上證實(shí)該藥具有較強(qiáng)的活血化瘀作用，而改善血液流變性可能是其活血化瘀機(jī)制之一.從綜合各指標(biāo)的情況來(lái)看，二色波羅蜜的有效部位應(yīng)該是二色波羅蜜的乙酸乙酯提取物，且二色波羅蜜的乙酸乙酯提取物呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系.

本實(shí)驗(yàn)研究了二色波羅蜜對(duì)改善血瘀模型大鼠血液流變學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)的作用，證實(shí)了其活血化瘀的藥效，為進(jìn)一步研究其活血化瘀的具體作用機(jī)制及有效成分，從而最終將其開(kāi)發(fā)成預(yù)防和治療血瘀疾病的藥物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù). ■

Abtract: Objective: To observe the hemorheology effect of extracts from Artocarpus styracifolius Pierre on the blood stasis model rats. Methods: The whole blood viscosity, plasma viscosity, red cell assembling index, platelet number, TT, PT, APTT and FIB were tested by continual exhaustive swimming model rats. Results: Compared with the model group, the index of hemorheology was improved by the extracts of Artocarpus styracifolius Pierre. The whole blood viscosity, plasma viscosity, red cell assembling index, platelet number, TT and FIB were reduced by the extracts from Artocarpus styracifolius Pierre. The PT, APTT were increased by extracts from Artocarpus styracifolius Pierre. Conclusion: The extracts from Artocarpus styracifolius Pierre had effect of improving index of hemorheology and the active fraction came from the ethyl acetate extracts from Artocarpus styracifolius Pierre.

Key woeds: Artocarpus styracifolius Pierre; hemorheology; active fraction【參考文獻(xiàn)】

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【責(zé)任編輯 謝文?！?/p>

The Hemorheology Effect of Artocarpus styracifolius Pierre on the Blood Stasis Model Rats

LU Hai-xiao1，F(xiàn)ENG Chun-feng2，HUANG Mei-ling1，WANG Yan-hua1，HE Xiao-fang1
(1. Yulin Normal University, Yulin, Guangxi 537000; 2. Yulin Maternal and Children Health Hospital, Yulin, Guangxi 537000)

R285.5

A

1004-4671（2015）02-0065-05

2014-03-01

廣西教育廳科研項(xiàng)目（2013YB203）。

盧海嘯（1974～），男，漢族，廣西百色人，玉林師范學(xué)院生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院副教授，博士，研究方向：天然活性物質(zhì)。