水分對地紅霉素腸溶片中主藥含量的影響

趙 揚，李 瑋，闞家義，桂雙英

(1.安徽中醫(yī)藥大學藥學院，安徽 合肥 230012;2.安徽食品藥品檢驗研究院，安徽合肥 230051)

地紅霉素屬第二代類紅霉素大環(huán)內(nèi)酯類藥物，該藥物克服了紅霉素在低pH下的不穩(wěn)定性［1］，其腸溶片于1995年FDA批準在美國銷售。2005年在國內(nèi)上市，現(xiàn)已納入國家基本藥物［2］。有文獻報道［3］單劑量口服國產(chǎn)地紅霉素(試驗片)和進口地紅霉素(參比劑)，得到國產(chǎn)與進口地紅霉素具有生物等效性。國內(nèi)地紅霉素腸溶片現(xiàn)有9個生產(chǎn)廠家。中國藥典未收載地紅霉素及其制劑，美國藥典36版中收載了地紅霉素原料和地紅霉素腸溶片，EP8.0收載了地紅霉素原料。因此國內(nèi)各企業(yè)執(zhí)行不同的國家食品藥品監(jiān)督管理局頒標準。目前主要采用高效液相色譜法測定地紅霉素的含量［4-8］。本文綜合7個不同廠家的企業(yè)標準，通過不同批號的樣品實驗，最終確定了適宜的地紅霉素腸溶片主藥含量的測定方法。

在水分的檢測項目下，其中 YBH23982005、YBH40212005、YBH07012009、YBH12442006 標準并沒有規(guī)定水分的含量測定，為此考察水分測定的必要性。參考 USP［9］水分測定項下 5.0%，本實驗對3個廠家的地紅霉素腸溶片進行了檢查。

1 儀器與試藥

TitroLine KF卡爾費休氏滴定儀(D55122 Mainz);高效液相色譜儀:戴安 ULTIMATE 3000 HPG-3400SD;分析天平:德國sartorius ME235S。

地紅霉素對照品(中國藥品生物制品檢定所);地紅霉素腸溶片;甲醇和乙腈為色譜純，磷酸氫二鉀和磷酸二氫鉀為分析純。

2 方法和結(jié)果

2.1 水分測定 在23℃，相對濕度35%環(huán)境下，此環(huán)境對實驗結(jié)果影響不大［10］。取不同批號地紅霉素腸溶片細粉適量，按照水分測定法(中國藥典2010年版二部附錄VIII M第一法A)測定，結(jié)果見表1。

表1 地紅霉素腸溶片水分含量

2.2 地紅霉素含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱為 Eclipse XDB-C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);乙腈—磷酸鹽緩沖液(取1.41 g磷酸氫二鉀與6.91 g磷酸二氫鉀，加水1 000 mL 溶解后，過濾，即得)—甲醇(44∶37∶19)為流動相;檢測波長205 nm，柱溫40℃。

2.2.2 樣品的前處理 取不同廠家不同批號的地紅霉素腸溶片，首先測定地紅霉素的含量，然后拆去包裝，處理條件是樣品平均裸露在溫度70℃，相對濕度75%的變溫箱中，放置5 d后，取出。

2.2.3 方法學的考察 (1)專屬性:實驗結(jié)果表明，空白溶劑與輔料在5 min前出峰，不影響樣品測定。

(2)穩(wěn)定性:本實驗采用了丙酮、四氫呋喃、甲醇、乙腈、二甲基甲酰胺等有機溶劑，考慮其溶解性與穩(wěn)定性因素，選擇乙腈∶甲醇(7∶3)為溶劑，稱取地紅霉素對照品適量，稀釋到2.0 g·L-1，分別于0、1、2、4、6、8 h 進樣 20 μL 測定，結(jié)果表明 8 h 內(nèi)，16R-地紅霉素的峰面積 RSD為5.06%，而16R與16S的總峰面積RSD為1.26%。

(3)標準曲線及線性:精密取地紅霉素對照品適量，用乙腈∶甲醇(7∶3)溶劑溶解稀釋制成0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 g·L-1的溶液，按高效液相色譜法測定，分別得到線性回歸方程為Y=14.754X+0.0674(r2=0.999 9)。

(4)回收:精密稱取地紅霉素 15、20、25 mg，按處方比例加入空白輔料，分別用乙腈∶甲醇(7∶3)溶劑溶解稀釋制成1.5、2.0 和2.5 g·L-1。按高效液相色譜法測得16R與16S-地紅霉素峰面積按外標法計算測得量和回收率。結(jié)果表明，三個劑量的回收率分別為 99.5%、99.9%、100.1%。

2.2.4 測定 采用不除包衣進行地紅霉素腸溶片中地紅霉素的含量測定［11］。取本品20片，精密稱定，研細，精密稱取適量(約相當于地紅霉素50 mg)，置于25 mL容量瓶中，加乙腈∶甲醇(7∶3)混合液超聲使其溶解，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，立即取濾液20μL注入液相色譜儀中，記錄色譜圖(圖1～3);另取地紅霉素適量，同法配制成2.0 g·L-1的溶液。按外標法將16R地紅霉素與16S地紅霉素的峰面積合并計算。含量結(jié)果見表2。

表2 樣品在高溫高濕處理前后地紅霉素含量

2.3 數(shù)據(jù)分析結(jié)果 統(tǒng)計方法:使用SPSS17.0建立數(shù)據(jù)庫并進行統(tǒng)計分析，定性資料采用相對數(shù)進行描述;定量資料使用均數(shù)±標準差進行描述，組間比較采用成組設(shè)計t檢驗，采用Pearson相關(guān)對水分與地紅霉素腸溶片含量下降值進行相關(guān)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

統(tǒng)計結(jié)果:同水分的樣品，經(jīng)過相同的處理，含量下降值存在明顯的差異，對樣品處理前后的數(shù)據(jù)進行配對t檢驗，可知處理后地紅霉素腸溶片含量(均數(shù)±標準差)低于處理前(均數(shù)±標準差)，且差異有統(tǒng)計學意義(t=10.288，P ＜0.001)。再對樣品的水分與含量下降值進行相關(guān)分析，水分與含量下降值間無相關(guān)性(r=-0.278，P=0.265)。

3 討論

建立HPLC法測定地紅霉素的主藥含量，快速準確。通過相關(guān)分析結(jié)果顯示，地紅霉素腸溶片中水分的高低并不影響其主藥穩(wěn)定性，其穩(wěn)定性可能與生產(chǎn)工藝有很大關(guān)系［12-13］，建議國內(nèi)各企業(yè)在生產(chǎn)的過程中，根據(jù)腸溶片的性質(zhì)，嚴格控制其他工藝的處方比例;針對國內(nèi)各企業(yè)執(zhí)行不同的國家食品藥品監(jiān)督管理局頒標準中水分的檢測項目下，建議地紅霉素腸溶片檢測項目下水分≤5%。

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