加味芍藥甘草湯治療大鼠慢性萎縮性胃炎的實(shí)驗(yàn)研究

李靜江

(北方學(xué)院附屬第三醫(yī)院內(nèi)鏡室，河北張家口 075000)

作為臨床常見的慢性胃黏膜疾病，慢性萎縮性胃炎(CAG)具有病情復(fù)雜、病程長、反復(fù)發(fā)作的特點(diǎn)［1］。其主要病理改變，如:胃黏膜變薄、腺體萎縮等具有癌變傾向［2］。迄今為止，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對 CAG的治療效果尚不能令人滿意。芍藥甘草湯是中醫(yī)經(jīng)典方劑，我院采用加味芍藥甘草湯方治療CAG取得了一定的效果，本研究在中醫(yī)傳統(tǒng)理論的指導(dǎo)下，為進(jìn)一步闡明其藥效作用及其機(jī)制，觀察了加味芍藥甘草湯對慢性萎縮性胃炎模型大鼠的影響，現(xiàn)報道如下。

1 材料

1.1 藥物 白芍(批號:20130701)、甘草(批號:20130728)、香附(批號:20130912)，購自張垣中藥飲片有限公司，均由河北北方學(xué)院中醫(yī)學(xué)院趙恒成教授鑒定為正品;三九胃泰沖劑(批號:1307024N)，廣州三九集團(tuán)生產(chǎn);N-甲基-N＇-硝基-N-亞硝基胍(MNNG)(批號:M1305)，日本東京株式會社;超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH-Px)、丙二醛(MDA)試劑盒由南京建成生物工程研究所提供，其余試劑均為國產(chǎn)分析純，實(shí)驗(yàn)用水為去離子水。

1.2 動物 健康清潔級SD大鼠，體質(zhì)量180～200 g，雌雄兼用，由河北北方學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供，合格證號SCXK(京)2008-0006。

1.3 儀器 UV-2100紫外可見分光光度計，尤尼柯(上海)儀器有限公司;FSH-2組織勻漿機(jī)，金壇市天竟實(shí)驗(yàn)儀器廠。

2 方法

2.1 三九胃泰陽性供試液的制備 取三九胃泰沖劑適量，溶于適量蒸餾水中，制備為每毫升含三九胃泰360 mg的陽性供試液。

2.2 加味芍藥甘草湯供試液的制備 按照處方比例(15∶31∶15)分別稱取芍藥、甘草、香附適量，混合后，粉碎為粗粉，加水適量，于50℃超聲輔助提取，每次30 min，提取2次，經(jīng)濃縮后，制備為濃度分別為每毫升含藥材 274.5、549、1 098 mg的供試液。

2.3 MNNG 飲用液的配制［3］稱取MNNG適量，溶于去離子水，配制成濃度為12.5 g·L-1的貯備液，將容量瓶用錫紙包裹后，置于4℃冰箱避光保存，備用。整個配制過程均需避光操作。

2.4 慢性萎縮性胃炎模型的制備 造模方法參照文獻(xiàn)［4］。將MNNG貯備液于當(dāng)日稀釋成濃度為180 mg·L-1的溶液，代替飲用水飼喂造模大鼠，共8周。均普通飼料飼養(yǎng)。

2.5 實(shí)驗(yàn)分組及給藥方法 將大鼠隨機(jī)分為 6組，每組20只，分別是正常對照組、慢性萎縮性胃炎模型組、三九胃泰組、加味芍藥甘草湯高劑量組、中劑量組、低劑量組。于造模第9周開始，停止飲用MNNG溶液，各組大鼠開始灌胃給藥，每日1次，每次10 mL·kg-1體質(zhì)量。加味芍藥甘草湯各組每天按加味芍藥甘草湯給高劑量組10.98 g· kg-1體質(zhì)量、中劑量組5.49 g· kg-1體質(zhì)量、低劑量組2.745 g· kg-1給藥，三九胃泰組按每天 3.6 g·kg-1體質(zhì)量給藥，正常對照組和模型組大鼠均灌服生理鹽水，每日1次，每次10 mL·kg-1體質(zhì)量，連續(xù)90 d。

2.6 觀察指標(biāo)及檢測方法

2.6.1 一般狀態(tài)觀察 給藥91 d，觀察并比較各組大鼠被毛、活動情況、食量及形體。

2.6.2 胃黏膜損傷情況觀察 給藥91 d，每組取1只大鼠，參照文獻(xiàn)［5-7］，摘除鼠胃，制備病理切片，觀察胃黏膜萎縮情況。

2.6.3 胃黏膜血流量、SOD、GSH-PX 和 MDA 的測定 給藥91 d，每組取9只大鼠，參照文獻(xiàn)［8-9］，用中性紅清除法測胃黏膜血流量。其余大鼠禁食16 h，烏拉坦麻醉，常規(guī)解剖鼠胃，洗凈胃內(nèi)容物，蒸餾水沖洗2次，濾紙吸干水分。小心刮取1/3全胃黏膜，稱重，加入適量蒸餾水勻漿，制成胃黏膜勻漿。GSH-Px、SOD和MDA的測定按南京建成生物研究所提供的試劑盒說明書步驟進(jìn)行［10-11］。

2.7 統(tǒng)計學(xué)方法 使用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行試驗(yàn)資料分析。觀測數(shù)據(jù)主要為計量資料，以(±s)表示，均通過正態(tài)性檢驗(yàn)。多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較則為HSD-q檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn) α =0.05。

3 結(jié)果

3.1 一般狀態(tài)觀察 模型組大鼠被毛蓬松，形體瘦小，活動減少，行動遲緩，食量少。三九胃泰組及加味芍藥甘草湯低劑量組大鼠被毛比較潔凈，略微散亂、體重稍低。加味芍藥甘草湯高、中劑量組大鼠活動靈活，食量較大，體質(zhì)量中等。

3.2 病理觀察結(jié)果 正常對照組，大鼠胃黏膜上皮細(xì)胞排列整齊，胃黏膜完整，腺體排列規(guī)則;模型組，胃黏膜萎縮，胃竇黏膜腺體排列序亂，腺細(xì)胞和腺體減少，且體積縮小，黏膜肌層增厚;三九胃泰組、加味芍藥甘草湯高、中劑量組，均可見胃黏膜厚度適中，腺體排列緊密、規(guī)則，腺體萎縮顯著好轉(zhuǎn)。病理學(xué)圖片見圖1。

3.3 各組大鼠胃黏膜血流量的測定結(jié)果 各組大鼠胃黏膜血流量的測定結(jié)果見表1。多組間整體分析(單因素方差分析)有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義。兩兩比較并結(jié)合數(shù)據(jù)來看:與正常對照組比較，模型組大鼠胃黏膜血流量顯著減少(P＜0.01)。與模型組大鼠比較，三九胃泰組、加味芍藥甘草湯低、中、高劑量組大鼠胃黏膜血流量均顯著增加(P＜0.05，P ＜0.01)，其中，加味芍藥甘草湯中、高劑量組大鼠胃黏膜血流量與正常對照組大鼠差異無顯著性(P＞0.05)。與三九胃泰組比較，加味芍藥甘草湯中、高劑量組大鼠胃黏膜血流量均顯著增加(P＜0.05)。

表1 大鼠胃黏膜血流量比較(±s，n=9)

表1 大鼠胃黏膜血流量比較(±s，n=9)

注:與正常對照組比較△△P＜0.01;與模型照組比較▲P＜0.05，▲▲P ＜0.01;與三九胃泰組比較#P ＜0.05。

組別 劑量/mg·kg-1·d-1胃黏膜血流量/mL·kg-1·h -1正常對照組 —25.69 ±5.24模型組 — 10.36±1.43△△三九胃泰組 3 600 17.40 ±4.67▲加味芍藥甘草湯低劑量組 2 745 14.57 ±2.40▲加味芍藥甘草湯中劑量組 5 490 23.31 ±5.10▲▲#加味芍藥甘草湯高劑量組 10 980 25.12 ±4.61▲▲#

3.4 各組大鼠胃黏膜組織 GSH-PX、SOD活性及MDA含量測定結(jié)果 各組大鼠胃黏膜組織 GSHPx、SOD活性及MDA含量測定結(jié)果見表2。多組間單因素方差分析為差異顯著。再經(jīng)兩兩組間比較知:與正常對照組比較，模型組大鼠胃黏膜組織SOD、GSH-Px活性降低，MDA含量水平升高，差異有顯著性(P＜0.05，P＜0.01)。與模型對照組比較，加味芍藥甘草湯低、中、高劑量組大鼠胃黏膜中SOD、GSH-Px活性顯著升高(P ＜0.05，P ＜0.01)，MDA含量顯著降低(P＜0.05，P＜0.01)。與三九胃泰組比較，加味芍藥甘草湯中、高劑量組大鼠潰瘍組織中SOD、GSH-Px活性顯著升高(P＜0.05)，MDA含量顯著降低(P＜0.05)。

表2 各組大鼠胃黏膜組織 GSH-Px、SOD、MDA含量(±s，n=10)

表2 各組大鼠胃黏膜組織 GSH-Px、SOD、MDA含量(±s，n=10)

注:與正常對照組比較△P ＜0.05，△△P ＜0.01;與模型照組比較▲P ＜0.05，▲▲P ＜0.01;與三九胃泰組比較#P ＜0.05。

組別 劑量/mg·kg-1·d-1 GSP-Px/mg·g prot-1 SOD/U·mL-1 MDA/mmol·L -1正常對照組 —56.39 ±6.22 369.44 ±10.26 4.36 ±0.86模型組 — 32.15 ±4.27△ 253.18±8.13△△ 8.63 ±1.53△△三九胃泰組 3600 45.24±5.71▲ 336.65±1.34▲ 5.72±0.97▲加味芍藥甘草湯低劑量組 2745 46.33±5.26▲ 332.90±9.35▲ 2.54±0.25▲加味芍藥甘草湯中劑量組 5490 55.20±6.20▲▲ 372.51±10.62▲▲ 3.7±0.38▲▲加味芍藥甘草湯高劑量組 10980 55.78 ±7.25▲▲# 382.35 ±9.23▲▲# 3.88 ±0.25▲▲#

4 討論

慢性萎縮性胃炎屬于中醫(yī)“胃脘痛”、“胃痞”等范疇。本病大多病程較長，病機(jī)往往虛實(shí)夾雜。本實(shí)驗(yàn)用加味芍藥甘草湯進(jìn)行干預(yù)和治療，取得良好的效果。

從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，加味芍藥甘草湯可通過逆轉(zhuǎn)胃黏膜萎縮，達(dá)到修復(fù)胃黏膜的目的。加味芍藥甘草湯由白芍、甘草、香附組成?！秲?nèi)經(jīng)》曰:“肝苦急、急食甘以緩之?！鄙炙幩峥辔⒑瑸a肝火、和脾血;甘草甘平，緩急補(bǔ)中;香附是血中氣藥，行氣止痛，三藥相合則能扶土抑木，故用治陰血不足、肝脾失調(diào)之胃痛具有較好療效。CAG的形成過程與脂質(zhì)過氧化作用關(guān)系密切［12-13］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，加味芍藥甘草湯能顯著降低胃黏膜內(nèi)MDA含量，提高SOD、GSH-Px活力，從而減弱脂質(zhì)過氧化，起到保護(hù)胃黏膜及修復(fù)損傷胃黏膜的作用。CAG的發(fā)生與GMBF的減少有密切關(guān)系［5］，胃黏膜良好的血液循環(huán)，能夠保證胃黏膜獲得必要的營養(yǎng)和去除有害代謝產(chǎn)物，從而以利于胃黏膜保持其完整性。本實(shí)驗(yàn)表明，加味芍藥甘草湯可顯著增加CAG大鼠GMBF，使其恢復(fù)到接近正常水平。

本實(shí)驗(yàn)研究了加味芍藥甘草湯對慢性萎縮性胃炎模型大鼠的治療作用，證實(shí)其治療慢性萎縮性胃炎的機(jī)制與其抗脂質(zhì)過氧化作用及改善胃黏膜血流量作用有關(guān)，為加味芍藥甘草湯在臨床上的應(yīng)用提供了理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

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