急性應(yīng)激對大鼠胸腺指數(shù)和血清CORT、胸腺肽濃度的影響

崔春紅，孫兆霞，李偉，姜鶴

1.山東萬杰醫(yī)學(xué)院組胚教研室，山東淄博 255213；2.山東萬杰醫(yī)學(xué)院解剖教研室，山東淄博 252133

應(yīng)激在我們的日常生活中非常普遍，幾乎每一個人都會遇到某些應(yīng)激源的作用。過強或持續(xù)時間比較長的應(yīng)激對機體是有害的，影響機體的生理狀態(tài)和免疫系統(tǒng)[1],應(yīng)激對機體健康的影響越來越受到重視。機體在應(yīng)激狀態(tài)下，多出現(xiàn)以交感神經(jīng)-腎上腺髓質(zhì)軸和下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸反應(yīng)為主的變化，使血清腎上腺糖皮質(zhì)激素含量增加，這常常被視為應(yīng)激的標志[2-3]。

胸腺是機體重要的中樞免疫器官，是T 淋巴細胞發(fā)育、成熟的場所，對機體外周淋巴器官的發(fā)育和免疫應(yīng)答的發(fā)生起著重要的調(diào)節(jié)作用[4]。應(yīng)激反應(yīng)可導(dǎo)致胸腺的退化萎縮[5]，并伴有免疫功能受損。目前，對應(yīng)激反應(yīng)中血清胸腺肽濃度變化的研究較少。該研究試圖通過急性應(yīng)激探討應(yīng)激對大鼠胸腺指數(shù)和血清CORT 以及胸腺肽濃度的影響，為進一步探討應(yīng)激影響機體免疫功能的機制與途徑奠定基礎(chǔ)。測定胸腺指數(shù)旨在了解應(yīng)激對大鼠胸腺體積、重量的影響；檢測應(yīng)激后血清胸腺肽濃度，旨在了解應(yīng)激對胸腺肽的影響，為進一步探討胸腺肽在應(yīng)激影響胸腺結(jié)構(gòu)過程中的作用及其機制提供理論依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

實驗于2014年7—8月間以12 只Wistar 雄性大鼠（山東大學(xué)動物實驗中心提供）為研究對象，大鼠體重180±10 g，6 只一籠合養(yǎng)（籠子尺寸為約為500 mm×400 mm×300mm）。在實驗室中在環(huán)境適應(yīng)5 d，晝/夜周期為12 h/12 h(光照時間為08:00~20:00)，室內(nèi)溫度為（23±2）℃，濕度為50%左右。適應(yīng)期內(nèi)所有動物自由攝食和飲水。適應(yīng)期后對大鼠進行分組，采用隨機數(shù)表法選取6只作為正常對照組，不作任何實驗處理；另6 只作為應(yīng)激組。

1.2 方法

室溫下將大鼠置入帶有通氣孔但可以限制其各個方向活動的束縛器中，應(yīng)激刺激持續(xù)6 h。應(yīng)激結(jié)束后2%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，后剖開腹腔，自腹主動脈抽取血液5 mL，室溫靜置30 min 后3500 r·min-1離心15 min 取上層血清，-20 ℃保存；剖開胸腔取出胸腺，清除表面附著的脂肪等其他組織，用濾紙吸干凈其表面的血液，后用電子天平稱量其重量。

1.3 觀察指標

①胸腺指數(shù)胸腺指數(shù)=胸腺重量/體重，胸腺重以mg 為單位，體重以g 為單位。

②血清CORT 和胸腺肽的濃度酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測血清CORT 和胸腺肽的含量。

1.4 統(tǒng)計方法

采用SPSS19.0 統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理，計量資料以據(jù)以均數(shù)±標準差（±s）表示，采用t 檢驗，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠胸腺指數(shù)

應(yīng)激后大鼠胸腺指數(shù)與對照組比較要低，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 急性應(yīng)激對大鼠胸腺指數(shù)的影響[（±s）,mg/g]

表1 急性應(yīng)激對大鼠胸腺指數(shù)的影響[（±s）,mg/g]

對照組應(yīng)激組t P組別2.06±0.24 1.99±0.15 5.13 0.47胸腺指數(shù)

2.2 大鼠血清CORT 和胸腺肽的濃度

應(yīng)激后大鼠血清CORT 的濃度明顯增高，與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；胸腺肽的濃度與對照組比較顯著性減低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 急性應(yīng)激對大鼠血清CORT 和胸腺肽濃度的影響[（±s）,pg/mL]

表2 急性應(yīng)激對大鼠血清CORT 和胸腺肽濃度的影響[（±s）,pg/mL]

注：與對照組比較#P＜0.05。

對照組應(yīng)激組t 值P 值組別67.82±4.76（89.05±4.30）#-8.97 0.00 1.46±0.08（0.66±0.06）#23.49 0.00 CORT 胸腺肽（×103）

3 討論

胸腺是機體主要的免疫器官，為T 淋巴細胞的成熟和選擇提供微環(huán)境，在免疫功能的執(zhí)行與維持中發(fā)揮重要的作用。胸腺隨著年齡的增長而退化萎縮，受性激素的影響[6-7]，因此本實驗中研究對象選擇的是青春期雄性Wistar 大鼠。

各種應(yīng)激刺激均可導(dǎo)致胸腺退化，這種退化是在機體應(yīng)激時，通過下丘腦-垂體-腎上腺軸的作用而發(fā)生的[8]。這與該實驗的結(jié)果類似，大鼠急性應(yīng)激6 h 后血清CORT 的濃度 （89.05±4.30）pg/mL 明顯增高,與對照組（67.82±4.76）pg/mL 比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

胸腺退化萎縮意味著在細胞免疫功能中起主導(dǎo)作用的T 淋巴細胞的數(shù)目減少，從而導(dǎo)致細胞免疫功能下降甚至抑制。胸腺指數(shù)是反映機體胸腺免疫功能的重要指標之一，其數(shù)值高低的變化可以反映機體免疫功能的狀態(tài)[9-10]。該實驗中，我們觀察到大鼠急性應(yīng)激6 h 后，胸腺指數(shù)出現(xiàn)降低（1.99±0.15）mg/g，但與對照組（2.06±0.24）mg/g 比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，這可能是急性應(yīng)激對胸腺體積、重量的影響需要一個反應(yīng)過程，可以通過延長觀察時間點來予以驗證；或者是短暫應(yīng)激對胸腺體積、重量的影響較小，需要一定的時間積累；也可能是應(yīng)激強度相對較小，對胸腺的影響有限，可以加大應(yīng)激的強度來進行驗證。

研究表明，胸腺激素在胸腺細胞的發(fā)育和成熟過程中發(fā)揮重要的作用[11-12]，胸腺肽可以增加T 細胞的產(chǎn)生、刺激T 細胞分化與成熟、減少T 細胞凋亡以及產(chǎn)生T 細胞介導(dǎo)抗體等[13]。該實驗中，急性應(yīng)激6 h 后大鼠血清胸腺肽的濃度（0.66±0.06）×103 pg/mL 明顯下降，與對照組（1.46±0.08）×103 pg/mL 比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義?？赡茉趹?yīng)激誘導(dǎo)胸腺退化萎縮的過程中起到一定的作用。但血清胸腺肽濃度降低的機制以及其與胸腺細胞凋亡間是否有關(guān)系尚不明確，需進一步研究。

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