鴨疫里默氏桿菌與大腸桿菌混合感染的診治

吳登才，李 珂，林正權(quán)，常志順*

(1.云南省畜牧獸醫(yī)科學(xué)院，云南 昆明 650224;2.大關(guān)縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所，云南 大關(guān) 657400;3.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，江蘇 南京 210095;4.宜良縣動物疫病預(yù)防控制中心，云南 宜良 652100)

鴨疫里默氏桿菌病又稱鴨傳染性漿膜炎，是危害鴨和其他家禽的一種接觸性傳染病。主要危害1～6周齡的鴨，特別是2～3周齡的鴨最易發(fā)生，臨床表現(xiàn)為眼、鼻流漿液性分泌物，下痢、共濟失調(diào)、昏迷等，剖檢變化以心包炎、肝周炎、氣囊炎為特征。大腸桿菌病是一種由致病性大腸桿菌引起的禽類重要的傳染病。兩種病在臨床上呈單獨或混合感染，且在流行病學(xué)、臨床癥狀、剖檢變化等方面都存在諸多相似之處，不易區(qū)別。2014年11月，宜良縣某鴨場飼養(yǎng)的5 400只櫻桃谷父母代種鴨在20日齡左右發(fā)生一起以典型心包炎、肝周炎、氣囊炎為特征的傳染病。經(jīng)臨床檢查、實驗室診斷及動物回歸試驗，確診為鴨疫里默氏桿菌與大腸桿菌混合感染。通過玻片凝集試驗和試管凝集試驗，進一步確定了鴨疫里默氏桿菌分離株血清型為2型，大腸桿菌分離株血清型為O78型。根據(jù)藥敏試驗結(jié)果，選用阿米卡星和阿莫西林進行治療，并采取綜合性防制措施，有效控制了病情?，F(xiàn)將具體診治情況報告如下。

1 發(fā)病情況

2014年11月26日，宜良縣某鴨場飼養(yǎng)的5 400只18日齡櫻桃谷父母代種鴨陸續(xù)發(fā)病，曾用氟苯尼考、強力霉素進行治療，無明顯效果，發(fā)病及死亡鴨只不斷增加，至11月30日，5 d內(nèi)約1/3鴨只發(fā)病，死亡463只，死亡率為8.57%。

2 臨床癥狀

病鴨采食減少或不進食，飲水增加，精神沉郁，離群獨處、呆立、行動遲緩，兩翅下垂，閉眼縮頸，不愿活動，共濟失調(diào)，咳嗽、打噴嚏，眼、鼻分泌物多，呼吸困難;有的病鴨鼻竇腫大，眼眶周圍羽毛粘連，排黃白色或黃綠色水樣糞便、惡臭，泄殖腔周圍被糞便污染;死亡鴨只羽毛松散，鴨掌干癟。部分病鴨突然頭向上仰，兩肢伸直，猝死。

3 剖檢變化

隨機剖檢病死鴨12只，發(fā)病鴨2只，剖檢病變基本一致，可見肝臟、心臟表面覆蓋一層灰白色或灰黃色纖維素性膜狀物，易剝離;膽囊脹滿，肝腫大，呈黃色或櫻桃紅色;心包膜增厚附有大量滲出物，心包內(nèi)充滿白色絮狀物，心外膜粗糙，胸壁粘連;氣囊壁混濁、增厚，表面附有黃白色干酪樣滲出物;腹腔腸管有纖維素性粘連;腦實質(zhì)及腦膜血管充血;部分病鴨腸鼓氣，腸道內(nèi)出血、充血，腸壁變薄。

4 實驗室檢查

4.1 病毒分離

無菌采集病死鴨腦、肝組織研磨，反復(fù)凍融3次，8 000 r/min離心，取上清液過濾，將濾液0.2 mL/枚接種于12日齡非免疫鴨胚5枚，37℃孵育120 h，剔除24 h內(nèi)死胚，將活胚置4℃冷卻2 h后，收集尿囊液進行血凝試驗，剖檢胚體。結(jié)果表明鴨胚無死亡，胚體發(fā)育正常，尿囊液無血凝性，未分離到病毒。

4.2 細菌分離培養(yǎng)

無菌采集7只病死鴨腦組織分別接種于血瓊脂平板，置37℃溫箱培養(yǎng)36 h，7份樣品在血瓊脂平板上分別生長出形態(tài)一致、純粹的菌落。其中4份樣品生長出的細菌菌落較大，呈圓型、隆起、灰白色，暫命名為A菌;另外3份樣品生長出的細菌菌落較小，其表面光滑、濕潤、呈露珠狀，暫命名為B菌。分別挑取單個菌落轉(zhuǎn)接麥康凱瓊脂平板，37℃培養(yǎng)36 h，A菌長出玫瑰紅、圓形、邊緣整齊、中等大小的菌落，而B菌不生長。分別從兩種菌中挑取單菌落接種于鴨血清肉湯，37℃恒溫搖床，150 r/min培養(yǎng)24 h，獲得純培養(yǎng)物。將純培養(yǎng)物涂片，經(jīng)革蘭氏染色鏡檢，可見A菌為革蘭氏陰性粗短桿菌，B菌為革蘭氏陰性小桿菌。

4.3 生化實驗

將A菌和B菌純培養(yǎng)物分別接種于微量生化反應(yīng)管內(nèi)，37℃培養(yǎng)24 h后，觀察結(jié)果。結(jié)果顯示A菌可發(fā)酵麥芽糖、乳糖、葡萄糖、甘露醇、蔗糖和鼠李糖等多種糖類，并產(chǎn)酸產(chǎn)氣，枸櫞酸鹽試驗、尿素酶試驗均為陰性，不產(chǎn)生硫化氫，符合大腸桿菌生化特性。B菌不發(fā)酵葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、山梨醇、果糖、乳糖，枸櫞酸鹽試驗、尿素酶試驗均為陰性，符合鴨疫里默氏桿菌生化特性。

4.4 血清學(xué)試驗

將上述7株細菌純培養(yǎng)物分別接種于鴨血清瓊脂斜面培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)24 h后，用5 mL滅菌生理鹽水制成菌懸液，121℃高壓2 h，取兔抗大腸桿菌、鴨疫里默氏桿菌各血清型陽性血清各25μL于干凈載玻片上，與等量待檢抗原混勻，并同時設(shè)立大腸桿菌和鴨疫里默氏桿菌陰、陽性對照組，置于空培養(yǎng)皿中，于37℃保溫15～20 min，觀察顆粒沉淀情況，初步篩選出可能的血清型，然后通過試管凝集試驗確定其O血清型，定型標準為鴨大腸桿菌O抗原凝集價不低于1∶640，鴨疫里默氏菌菌體抗原凝集價不低于1∶32，結(jié)果顯示4株大腸桿菌的血清型均為O78型，3株鴨疫里默氏桿菌的血清型均為2型。

4.5 藥敏試驗

按常規(guī)紙片法，用16種常用抗生素藥物分別對兩種菌進行了藥敏試驗。結(jié)果顯示，分離的大腸桿菌對慶大霉素、阿米卡星中度敏感，對鏈霉素、卡那霉素、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、強力霉素、紅霉素、酒石酸吉他霉素、羅紅霉素、青霉素、氨芐西林、阿莫西林、粘桿菌素、林可霉素、氯霉素不敏感;鴨疫里默氏桿菌對青霉素、氨芐西林、阿莫西林、羅紅霉素、氯霉素高度敏感，對環(huán)丙沙星、恩諾沙星中度敏感，對酒石酸吉他霉素、紅霉素、慶大霉素、阿米卡星、鏈霉素、卡那霉素、強力霉素、粘桿菌素、林可霉素不敏感。

5 動物回歸試驗

選購14日齡健康非免疫櫻桃谷肉鴨15只，設(shè)試驗組10只，對照組5只，飼養(yǎng)至14 d時進行試驗。對試驗組5只鴨肌肉注射大腸桿菌純培養(yǎng)物，1 mL/只(約為3×108CFU)，另5只鴨肌肉注射里默氏桿菌純培養(yǎng)物，1 mL/只(約為3×109CFU)，對照5只鴨肌肉注射1 mL生理鹽水作對照。試驗組鴨注射后12 h，部分鴨只開始出現(xiàn)臨床癥狀，24 h后出現(xiàn)死亡，72 h內(nèi)全部死亡，其臨床癥狀及病理變化與自然發(fā)病相一致。對照組鴨正常，未見死亡。分別采集死亡鴨腦組織進行細菌分離，回收到所接種的細菌。

6 診斷結(jié)果

通過流行病學(xué)調(diào)查、臨床診斷、實驗室檢查、動物回歸試驗，確診該起疾病為2型鴨疫里默氏桿菌與O78型大腸桿菌混合感染所致。

7 綜合防制

根據(jù)藥敏試驗結(jié)果，選用阿米卡星和阿莫西林進行治療，并輔助使用黃連解毒液，阿米卡星按1 g加8 kg水飲水，阿莫西林按1 g加5 kg水飲水，黃連解毒液按說明書劑量飲水，全群供多種維生素，連續(xù)使用4 d。

注意保暖防寒，將病鴨進行隔離治療，病死鴨作深埋處理。發(fā)病期飼養(yǎng)用具及鴨場清潔后用0.3%的季胺鹽類消毒劑進行消毒，每天1次，病愈后每周1次。鴨舍周圍徹底清掃后用4%的燒堿消毒1次。

通過采取以上防制措施，2 d后鴨群停止死亡，食欲、精神明顯好轉(zhuǎn)，3 d后病情得到控制，鴨群恢復(fù)健康。

8 小結(jié)

大腸桿菌廣泛存在飼料、飲水、糞便及正常動物腸道中，在飼養(yǎng)環(huán)境改變時，易誘發(fā)大腸桿菌病。本病例就是由于鴨感染鴨疫里默氏桿菌病后，抵抗力下降，加之飼養(yǎng)管理不善，氣溫下降而未注意保暖防寒，飼養(yǎng)環(huán)境條件較差而并發(fā)感染大腸桿菌病。所以，養(yǎng)鴨戶應(yīng)加強飼養(yǎng)管理，定期消毒，給鴨只提供舒適的生長環(huán)境，防止本病發(fā)生。

本病例通過臨床癥狀觀察、剖檢變化、細菌分離培養(yǎng)、生化試驗、動物回歸試驗等，確診為鴨疫里默氏桿菌與大腸桿菌混合感染，并進一步確定了大腸桿菌血清型為O78型，鴨疫里默氏桿菌的血清型為2型。從藥敏試驗結(jié)果表明，發(fā)病初期選用氟苯尼考、強力霉素進行治療未取得明顯效果，與本次引起鴨只發(fā)病的大腸桿菌對藥物產(chǎn)生耐藥性密切相關(guān)。大腸桿菌分離株耐藥性極高，僅對慶大霉素、阿米卡星呈中度敏感，與鴨疫里默氏桿菌分離株的抗菌譜明顯不同，如青霉素、氨芐西林、阿莫西林對鴨疫里默氏桿菌敏感，而對大腸桿菌耐藥?；旌细腥静粌H加重了病情，增高了死亡率，而且擴大了耐藥范圍。從本次病例看，挑選不到對兩種細菌均敏感的藥物，給臨床選藥治療帶來了很大的困難。

鑒于藥物防治的局限性，可采取免疫接種預(yù)防該病。雛鴨在出生2～3周內(nèi)必須搞好疾病預(yù)防，在疫苗接種上應(yīng)采用鴨疫里默氏桿菌-大腸桿菌二聯(lián)苗進行預(yù)防接種，也可用分離菌制作滅活菌苗進行免疫接種。

本病易引起耐藥性，所以鴨發(fā)病后，要迅速診斷確定病因，通過藥敏試驗，選用較敏感藥物進行治療，并注意藥物交替使用，避免濫投藥、濫用藥，做到診斷迅速，用藥合理，從而提高治療效果，降低治療成本。由于中藥具有不易產(chǎn)生耐藥性和毒副作用小的優(yōu)點，而家禽消化道短，排泄快，所以采用中藥水煎劑、浸出劑輔助治療可以獲得較好的效果。同時，加強種蛋管理，建立健康的種鴨群，實行全進全出的養(yǎng)殖模式，是有效預(yù)防該病發(fā)生的重要手段。