云南藥用植物鼓槌石斛化學(xué)成分研究

陳亞萍，王婭娟, 2, 李玉鵬*, 張 君， 翁瑞旋, 楊曉琳

(1. 昆明醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院暨云南省天然藥物藥理重點實驗室,云南 昆明 650500;2. 昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院 藥劑科,云南 昆明 650031)

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云南藥用植物鼓槌石斛化學(xué)成分研究

陳亞萍1，王婭娟1, 2, 李玉鵬1*, 張 君1， 翁瑞旋1, 楊曉琳1

(1. 昆明醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院暨云南省天然藥物藥理重點實驗室,云南 昆明 650500;2. 昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院 藥劑科,云南 昆明 650031)

目的：對云南鼓槌石斛化學(xué)成分進行研究,發(fā)現(xiàn)活性化合物。方法：采用95%乙醇提取活性化合物，經(jīng)硅膠柱層析和Sephadex LH-20柱層析進行分離純化后，以波譜分析(核磁共振氫譜、碳譜和質(zhì)譜)鑒定其結(jié)構(gòu)。結(jié)果：從石油醚萃取部分分離得到7個化合物，結(jié)構(gòu)確定為: stigmasterol (1), β-sitosterol (2), 3,4-dihydroxy-benzoic acid (3), stigmast-4-en-3-one (4), ergosterol (5), moscatin(6) , daucosterol (7)。結(jié)論：化合物4為首次從本植物中分離得到。

鼓槌石斛；藥用植物；化學(xué)成分

石斛是蘭科(Orchidaceae)石斛屬(Dendrobium Sw.)多種植物的新鮮或干燥莖的統(tǒng)稱。我國76種石斛屬植物中有30多種作藥用[1]。在《神農(nóng)本草經(jīng)》中, 石斛被列為上品, 具有滋陰清熱、生津益胃、潤肺止咳、明目強身等功效[2]。國內(nèi)學(xué)者曾從鼓槌石斛中得到聯(lián)芐、菲類、芴酮等類型的化學(xué)成分[3]。為合理開發(fā)和應(yīng)用該植物的藥用價值,對鼓槌石斛化學(xué)成分進行研究,以找尋其活性先導(dǎo)化合物。

1 儀器與材料

Bruker DRX-500核磁共振儀,TMS為內(nèi)標,化學(xué)位移(δ)值的單位用ppm, Varian Mat-711質(zhì)譜儀,青島海洋化工廠生產(chǎn)硅膠, Sephadex LH-20: 20～80μm (Pharmacia Fine Chemical Co., Ltd.), 高效薄層層析硅膠G板(煙臺化工研究院), 10%硫酸乙醇溶液為顯色劑，溶劑為工業(yè)純, 重蒸, 其它試劑為化學(xué)純或分析純。實驗樣品采自云南思茅, 經(jīng)昆明醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院暨云南省天然藥物藥理重點實驗室劉毅教授鑒定為鼓槌石斛。

2 化合物提取分離

鼓槌石斛全草4.11kg，用95%乙醇浸泡5次，每次2天，浸泡液過濾、減壓蒸干，用500mL蒸餾水溶解，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，制得石油醚萃取物 27.2g、乙酸乙酯萃取物192.4g。鼓槌石斛石油醚萃取物, 用硅膠柱層析分離，依次用石油醚-乙酸乙酯(20∶1,10∶1,5∶1,1∶1，0∶1)洗脫，以250mL為單位接收洗脫液，根據(jù)TLC檢測合并，得到3個部分, 其中第二部分經(jīng)硅膠柱層析分離，Sephadex LH-20柱層析進行分離純化得到化合物1～4；第三部分經(jīng)硅膠柱層析分離，Sephadex LH-20柱層析進行分離純化得到化合物5～7。

3 化合物結(jié)構(gòu)鑒定

3.1 化合物1：stigmasterol

白色針狀晶體，MF:C29H48O, MW: 412;1HNMR (CDCl3, 500 MHz): δ 5.21 (1H, dd, J= 8.5, 17.2, H-22), 5.06 (1H, dd, J= 8.5, 17.2, H-23), 0.86 (3H, d, J= 1.5, H-29), 0.82 (3H, d, J= 4.3, H-27), 0.81 (3H, s, H-26), 0.82(3H, s, 18-CH3)。該化合物極性較小，易溶于氯仿，15%H2SO4乙醇顯色為紫紅色，與豆甾醇標準品進行TLC對照，在多種溶劑系統(tǒng)中Rf值均相同。且1HNMR,13CNMR數(shù)據(jù)與豆甾醇[4]基本一致，確定其為豆甾醇。

3.2 化合物 2： β-sitosterol

白色針晶體,MF:C29H50O,MW:414;1H-NMR (CDCl3,500 MHz): δ 5.32 (1H, d, J= 5.0, H-6), 3.50 (1H, m, H-3), 0.98 (3H, s, H-19), 0.92 (3H, d, H-21), 0.85 (3H, d, H-29), 0.82 (3H, t, H-27), 0.80 (3H, d, H-26), 0.70 (3H, s, H-18)。該化合物極性較小，易溶于氯仿,10%H2SO4乙醇顯色為紫紅色，與標準品進行TLC對照，在多種溶劑系統(tǒng)中Rf值均相同。且1HNMR,13CNMR數(shù)據(jù)與β-谷甾醇[5]基本一致，確定其為β-谷甾醇。

3.3 化合物3：3,4-dihydroxy-benzoic acid

白色針狀晶體,MF:C7H6O4,MW:154;1HNMR (CDCl3,500 MHz):δ 7.50(1H, d, J= 2.0, H-2), 7.45 (1H, dd, J= 8.0, 2.0, H-6), 6.90 (1H, d, J= 8.5, H-5);13C NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 170.5 (-COOH ), 150.2 (C-4), 146.0 (C-3), 124.0 (C-6), 122.0 (C-l), 117.5 (C-2 ), 115.2 (C-5)。氫譜數(shù)據(jù)和碳譜數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致，確定該化合物的結(jié)構(gòu)為3,4-dihydroxy-benzoic acid[6].

3.4 化合物4 ：stigmast-4-en-3-one

白色粉末, MF: C29H48O,MW:412;1HNMR (CDCl3,500 MHz):δ 5.50 (1H, s, H-4),2.32 (2H, m, H-2), 1.15 (3H, s, H-19), 0.89 (3H, d, J= 6.2, H-21), 0.81 (3H, t, J= 6.5, H-29), 0.80(3H, d, J= 6.5, H-26), 0.78 (3H, d, J= 6.5, H-27), 0.67 (3H, s, H-18)。該化合物極性較小，易溶于氯仿,與標準品進行TLC對照，在多種溶劑系統(tǒng)中Rf值均相同。且1HNMR,13CNMR數(shù)據(jù)與stigmast-4-en-3-one[7]基本一致，確定其為stigmast-4-en-3-one.

3.5 化合物5 ：ergosterol

淺黃色晶體, EI-MS (rel. int.) m/z: 396([M]+, 100), 378([M-H20]+, 7), 363 (79), 337 (43), 253 (38), 157 (37), 143 (46), 109 (29), 95 (32), 81 (56), 69 (84),55 (87)。該化合物極性較小，易溶于氯仿。10%H2SO4乙醇顯色為紫紅色，與標準品進行TLC對照，在多種溶劑系統(tǒng)中Rf值均相同。且1HNMR,13CNMR數(shù)據(jù)與ergosterol[8]基本一致，確定其為ergosterol.

3.6 化合物6 ：moscatin

白色晶體, MF:C15H12O3,MW:240;EIMS m/z (%):240(M+,100),225(49),197(45),139(18);1HNMR[(CD3)2CO,500MHz]: 9.50 (1H,s,5-OH),9.05(1H,s,2-OH),7.61(1H,d,J= 8.8,H-9),7.50(1H,d,J= 8.8,H-10),7.43(1H,dd,J=7.6, 7.6H-7), 7.40 (1H,dd,J= 7.6,2.0,H-6),7.13 (1H,dd,J=7.6,2.0,H-8),7.05(1H,d,J=2.4,H-1),7.00(1H,d,J= 2.4,H-3),4.15(3H,s,4-OMe)。氫譜數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致，確定該化合物的結(jié)構(gòu)為moscatin[9]。

3.7 化合物7 ：daucosterol

白色顆粒。MF: C35H60O6, MW:576; EIMS m/z(%): 414(苷元，6)，396 (100), 381 (7), 329 (2), 303 (5), 231 (3), 187 (3), 161 (15), 145 (21), 133 (12), 119 (10), 107 (17), 95 (22)；1HNMR (C5D5N, 500 MHz): δ 5.35 (1H, m, H-6), 5.09 (1H, J= 7.7, H-1), 4.58 (1H, d, J= 9.8), 4.43 (1H, m), 4.33 (2H, m), 4.10 (1H, m), 4.03 (2H, m)。該化合物難溶于氯仿、丙酮、甲醇，易溶于吡啶, 10%的硫酸乙醇顯色為紫紅色，與胡蘿卜苷標準品進行TLC對照,在多種溶劑系統(tǒng)中Rf值均相同。且1HNMR、13CNMR與胡蘿卜苷基本一致，所以確定其為胡蘿卜苷[10].

[1] 李滿飛,徐國鈞,徐珞珊,等.商品石斛的調(diào)查及鑒定(Ⅱ) [J].中草藥, 1991, 22(4):173-180.

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(責(zé)任編輯：魏 曉)

Research of Chemical Constituents from Dendrobium Chrysotoxum

Chen Yaping1, Wang Yajuan1,2, Li Yupeng1*, Zhang Jun1, Weng Ruixuan1, Yang Xiaolin1

(1. School of Pharmaceutical Science &Yunnan Key Laboratory of Pharmacology for Natural Products,Kunming Medical University,Kunming 650500, China; 2. Pharmacy Department,the First Affiliated Hospital of Kunming Medical University, Kunming 650031, China)

Objective:To study the chemical constituents from Dendrobium chrysotoxum and find its bioactive compounds. Methods:The compounds were extracted by 95% alcohol and isolated by column chromatography on silica gel and Sephadex LH-20. Their structures were identified by spectroscopic analysis (1H NMR, 13CNMR and EIMS). Results:Seven compouds were obtained and identified as stigmasterol (1), β-sitosterol (2), 3,4-dihydroxy-benzoic acid (3), stigmast-4-en-3-one (4), ergosterol (5), moscatin(6) , daucosterol (7). Conclusion:Compounds 3 ,4 was originally isolated from this medicinal plant.

Dendrobium chrysotoxum; Medicinal Plant; Chemical Constituents

2014-10-28

國家自然科學(xué)基金項目(21202066); 云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究基金項目(2012FB156)

陳亞萍(1981-)，女，昆明醫(yī)科大學(xué)實驗師，研究方向為天然藥物化學(xué)及藥物代謝動力學(xué)。

李玉鵬 (1978-), 男, 昆明醫(yī)科大學(xué)副教授,研究方向為天然藥物化學(xué)和藥理學(xué)。E-mail：liyupeng26@126.com

R284

A

1673-2197(2015)05-0014-02

10.11954/ytctyy.201505007