rLj-RGD3對(duì)正常大鼠及角叉菜膠致尾混合血栓大鼠血液流變學(xué)的影響

呂莉，王繼紅，張艷，邵鈁鈺，蔣雋舒，王躍，肖蓉，李慶偉*

(1.遼寧師范大學(xué)海洋生物功能基因與蛋白質(zhì)組學(xué)研究所，遼寧大連116029;2.大連醫(yī)科大學(xué)藥理教研室，遼寧大連116044)

rLj-RGD3對(duì)正常大鼠及角叉菜膠致尾混合血栓大鼠血液流變學(xué)的影響

呂莉1，2，王繼紅1，張艷1，邵鈁鈺2，蔣雋舒2，王躍2，肖蓉1，李慶偉1*

(1.遼寧師范大學(xué)海洋生物功能基因與蛋白質(zhì)組學(xué)研究所，遼寧大連116029;2.大連醫(yī)科大學(xué)藥理教研室，遼寧大連116044)

目的研究rLj-RGD3對(duì)正常大鼠及角叉菜膠致尾血栓模型大鼠的血液流變學(xué)的影響。方法測(cè)定給予不同劑量rLj-RGD3后正常大鼠全血和血漿黏度，以評(píng)價(jià)rLj-RGD3對(duì)正常大鼠血液流變學(xué)的影響;以角叉菜膠誘導(dǎo)大鼠尾部血栓模型，測(cè)定給予不同劑量rLj-RGD3后血栓模型大鼠全血和血漿黏度，以評(píng)價(jià)rLj-RGD3對(duì)血栓大鼠血液流變學(xué)的影響。結(jié)果與空白組相比，rLj-RGD3對(duì)全血黏度及血漿黏度無(wú)明顯影響;與血栓模型組相比，rLj-RGD3呈劑量依賴性地降低全血比黏度漿和血漿比黏度的升高。結(jié)論rLj-RGD3可降低血栓模型大鼠血黏度，而對(duì)正常大鼠血液黏度無(wú)明顯影響。

rLj-RGD3;角叉菜膠;血液流變學(xué);全血黏度;血漿黏度

rLj-RGD3是來(lái)源于海洋洄游魚(yú)類日本七鰓鰻口腔腺的重組RGD毒素肽，既往研究表明rLj-RGD3和其他RGD毒素肽一樣具有抗血小板聚集活性［1］，提示其可能具有抗血栓作用，有望開(kāi)發(fā)成為抗血栓性疾病的藥物。血栓性疾病患者常伴有血液黏滯度升高等血液流變學(xué)指標(biāo)的改變，本研究旨在探討 rLj-RGD3對(duì)正常大鼠及血栓模型大鼠的血液流變學(xué)指標(biāo)的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

rLj-RGD3注射液(由遼寧師范大學(xué)海洋生物功能基因與蛋白質(zhì)組學(xué)研究所提供)，己酮可可堿注射液(沈陽(yáng)第一制藥廠)，角叉菜膠(Carrageenan，TypeⅠ，Sigma公司)，肝素鈉(北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司)，氨基甲酸乙酯(北京慶盛達(dá)化工技術(shù)有限公司)，枸櫞酸鈉(浙江杭州蕭山化學(xué)試劑廠)。

LBY-N6血液流變儀(北京普利生儀器公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

雄性SD大鼠，體質(zhì)量(200±20)g，清潔級(jí)，大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)SCXK(遼) 2008-0002，飼養(yǎng)溫度(20±1)℃，濕度30% ～50%。隨機(jī)分為6組(每組8只):NS空白對(duì)照組，rLj-RGD3 12.5、25.0、50.0、100.0μg/kg組，以及陽(yáng)性對(duì)照藥己酮可可堿100.0μg/kg組。

1.3 Lj-RGD3對(duì)正常大鼠血液流變學(xué)的影響

大鼠腹腔注射烏拉坦1 g/kg麻醉，腹腔注射各受試藥物后10 min，自下腔靜脈采血3 mL。其中1 mL以25 U/mL肝素抗凝后于血液流變儀測(cè)定全血黏度，余血以3 000 rpm離心10min，取血漿測(cè)定血漿黏度［2-3］。以空白對(duì)照組為基準(zhǔn)，計(jì)算各組全血及血漿黏度的抑制率。

1.4 rLj-RGD3對(duì)角叉菜膠致尾混合血栓模型大鼠血液流變學(xué)的影響

大鼠每日一次腹腔注射連續(xù)給藥5 d，于給藥第3天除空白對(duì)照組外均經(jīng)腳趾皮下注射2%角叉菜膠10 mg/kg復(fù)制尾混合血栓模型［4］。第5日(注射角叉菜膠后48 h)測(cè)定尾血栓長(zhǎng)度，并于給藥后10 min按1.3項(xiàng)下取血、測(cè)定全血黏度及血漿黏度。并以模型組為基準(zhǔn)，計(jì)算全血及血漿黏度的抑制率。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

2 結(jié)果

2.1 rLj-RGD3對(duì)正常大鼠血液流變學(xué)的影響

由表1可知，與空白對(duì)照組相比，腹腔注射不同劑量rLj-RGD3對(duì)正常大鼠高、中、低切變率時(shí)的全血比黏度及血漿黏度值均無(wú)明顯變化(P＞0.05)，可見(jiàn)rLj-RGD3對(duì)正常大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)無(wú)影響。

2.2 rLj-RGD3對(duì)角叉菜膠致大鼠尾混合血栓形成的影響

由圖1可知，大鼠足趾皮下注射角叉菜膠后48 h大鼠尾部血栓形成，均出現(xiàn)不同程度的淤血、黑尾，以模型組黑尾最長(zhǎng)，為(16.0±2.5)cm，其與空白組(無(wú)黑尾)相比差別顯著(P＜0.01)，表明尾混合血栓模型建立成功。rLj-RGD3呈劑量依賴性縮短黑尾長(zhǎng)度，可見(jiàn)rLj-RGD3可抑制角叉菜膠導(dǎo)致的大鼠尾部混合血栓的形成，具有強(qiáng)大抗血栓形成作用。

圖1 rLj-RGD3對(duì)角叉菜膠致大鼠尾混合血栓形成的影響

2.3 rLj-RGD3對(duì)角叉菜膠致尾混合血栓模型大鼠血液流變學(xué)的影響

如表2所示，與空白對(duì)照組相比，模型組大鼠全血比黏度與血漿比黏度均有升高，而與血栓模型大鼠相比，rLj-RGD3可呈劑量依賴性抑制血栓模型大鼠血黏度指標(biāo)的升高。可見(jiàn)rLj-RGD3具有顯著降低血栓狀態(tài)時(shí)血液黏滯度的作用。

表1 腹腔注射不同劑量rLj-RGD3對(duì)正常大鼠血液黏度的影響(±s，n=8)

表1 腹腔注射不同劑量rLj-RGD3對(duì)正常大鼠血液黏度的影響(±s，n=8)

與NS對(duì)照組相比:*P＜0.05，＊＊P＜0.01

組別全血低切變率(5/s)抑制率(%)全血中切變率(60/s)抑制率(%)全血高切變率(200/s)抑制率(%)血漿比黏度抑制率(%) 0－rLj-RGD3 12.5μg/kg10.39±2.2511.34.88±0.6710.14.34±0.518.81.10±0.113.5 rLj-RGD3 25.0μg/kg10.65±2.859.15.01±1.187.74.24±0.7210.91.20±0.15－5.3 rLj-RGD3 50.0μg/kg11.09±1.665.44.93±0.259.24.36±0.258.41.12±0.131.8 rLj-RGD3 100.0μg/kg 11.53±3.021.65.33±1.091.84.57±0.794.01.19±0.08－4.4己酮可可堿100 mg/kg9.27±0.50＊＊20.94.12±0.23＊＊24.13.52±0.11＊＊26.11.01±0.01*NS對(duì)照組11.72±3.09－5.43±0.44－4.76±0.28－1.14±0.1 11.4

表2 rL j-RGD3對(duì)角叉菜膠致尾混合血栓大鼠血液流變學(xué)的影響(±s，n=8)

表2 rL j-RGD3對(duì)角叉菜膠致尾混合血栓大鼠血液流變學(xué)的影響(±s，n=8)

與NS對(duì)照組相比△P＜0.01;與模型組比較:*P＜0.05，＊＊P＜0.01

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3 討論

人體血液黏滯度的升高與血栓性疾病的發(fā)生有關(guān)，減低血液黏滯度可有效降低心腦血管疾病的發(fā)生及發(fā)展。本研究結(jié)果表明，rLj-RGD3可降低血栓模型大鼠血黏度，而對(duì)正常大鼠血液黏度無(wú)明顯影響，即rLj-RGD3選擇性作用于易栓的高黏狀態(tài)，提示應(yīng)用rLj-RGD3治療血栓性疾病針對(duì)性更強(qiáng)而且安全。

rLj-RGD3降低血栓狀態(tài)時(shí)低切變率的全血黏度，說(shuō)明其可降低紅細(xì)胞聚集性;而其降低高切變率全血黏度，說(shuō)明其還能增強(qiáng)血栓狀態(tài)時(shí)紅細(xì)胞的變形能力［5］。血漿黏度的降低，說(shuō)明rLj-RGD3對(duì)血液中非細(xì)胞成分也有改善作用。

總之，rLj-RGD3作為RGD毒素蛋白因其分子中含有RGD模體而具有抗血小板活性［1］，加之能選擇性地降低血栓狀態(tài)時(shí)的血液黏度、改善血液流變學(xué)，提示其必將具有良好的治療血栓性疾病應(yīng)用前景。但其選擇性降黏作用的分子藥理學(xué)機(jī)制，尚有待進(jìn)一步研究。

［1］Wang Jihong，Han Xiaoxi，Yang H，et al.A novel RGD-toxin protein，Lj-RGD3，from the buccal gland secretion of Lampetra japonica impacts diverse biological activities［J］.Biochimie，2010，92(10):1387-1396.

［2］韓國(guó)柱，李欣燕，呂莉，等.Antithrombotic effects of Veratrum nigrum var.Vssuriense alkaloids［J］.中草藥，2003，34 (12):1107-1110.

［3］ 楊靜嫻，戴淑芳，韓國(guó)柱，等.烏蘇里藜蘆堿對(duì)家兔和大鼠血液流變學(xué)及小鼠出血時(shí)間的影響［J］.中藥藥理與臨床，1998，14(6):22-24.

［4］ 謝德芳，方成，王春維，等.蚓激酶抗角叉菜膠誘導(dǎo)大鼠血栓形成作用［J］.中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)刊，2013，15(11):1877-1880.

［5］ 楊曉靜，張泓巍，張大偉，等.膠陀螺對(duì)血瘀動(dòng)物血液流變學(xué)的影響［J］.中草藥，1996，27(6):358-359.

The hemorrheology effect of rLj-RGD3 in normal rats and carrageenan induced tailm ixed thrombosismodel rats

LLi1，2，WANG Jihong1，ZHANG Yan1，SHAO Fangyu2，JIANG Junshu2，WANG Yue2，XIAO Rong1，LIQingwei1*
(1.Department of Biological Sciences，Liaoning Normal University，Dalian，Liaoning Province，116029;2.Department of Pharmacology，Dalian Medical University，Dalian，Liaoning Province，116044，China)

ObjectiveTo study the hemorrheology effects of rLj-RGD3 in normal rats and carrageenan induced tail mixed thrombosis model rats.MethodsThe carrageenan induced rat tail mixed thrombosis model was established.Blood viscosity and plasma viscosity of normal rats and thrombosismodel rats were determined after administered rLj-RGD3 in order to evaluate its hemorrheology effect in normal rats and thrombosismodel rats.Results Compared with blank control group，rLj-RGD3 had no effect on blood viscosity and plasma viscosity in normal rats.In comparison with thrombosismodel group，rats receiving i.p rLj-RGD3 showed a significant and dose-dependent inhibition on the increasing of blood viscosity and plasma viscosity.ConclusionrLj-RGD3 decreases the blood viscosity and plasma viscosity of thrombosismodel rats，but has no effect on that of normal rats.

rLj-RGD3;carrageenan;hemorrheology;blood viscosity;plasma viscosity

R285

A

1673-2995(2015)03-0184-03

2015-01-14)

國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展863計(jì)劃資助項(xiàng)目(SS2014AA091602);國(guó)家自然科學(xué)基金(81202455);國(guó)家海洋公益項(xiàng)目(201305016-5).

呂莉(1972－)，女(漢族)，副教授，在讀博士.

李慶偉(1955－)，男(漢族)，教授，博士.