• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    頂空-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定血中一氧化碳

    2015-12-08 09:23:58婷王瑞花于忠山
    關(guān)鍵詞:空瓶檢材頂空

    張 婷王瑞花于忠山

    (1 中國(guó)刑警學(xué)院 遼寧 沈陽 110035;2 公安部物證鑒定中心 北京 100038)

    頂空-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定血中一氧化碳

    張婷1王瑞花2于忠山2

    (1中國(guó)刑警學(xué)院遼寧沈陽110035;2公安部物證鑒定中心北京100038)

    詳細(xì)考察了頂空-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(HS-GC-MS)分析方法測(cè)定血中一氧化碳的多種影響因素,包括頂空體積、加熱溫度、加熱時(shí)間、加酸方式、制備飽和血樣的方法等內(nèi)容。同時(shí)對(duì)相同案件檢材的HS-GC-MS分析方法與常規(guī)分光光度法進(jìn)行比較,得出HS-GC-MS檢測(cè)一氧化碳的注意事項(xiàng),以及其對(duì)腐敗檢材測(cè)定更具優(yōu)勢(shì)的結(jié)論。

    一氧化碳頂空-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法醫(yī)毒物分析

    一氧化碳(CO)與血紅蛋白高度的親和力使血液失去攜氧功能,極易造成組織缺氧而引起人的急性中毒或死亡,這類案件時(shí)有發(fā)生。因此,快速、準(zhǔn)確檢測(cè)血中碳氧血紅蛋白含量是判定一氧化碳中毒程度的關(guān)鍵。血中一氧化碳檢測(cè)常用的方法有分光光度法和紫外導(dǎo)數(shù)分光光度法,方法具有操作簡(jiǎn)便的特點(diǎn),但分光光度法在計(jì)算過程中需應(yīng)用不同的經(jīng)驗(yàn)公式來計(jì)算含量,因此,分光光度法對(duì)于血液的新鮮程度依賴程度較高。HS-GC-MS是色譜分析法,已報(bào)道的文獻(xiàn)中證明了該法具有靈敏度高、線性范圍寬、適合腐敗血液、多種生物臟器組織檢材等優(yōu)點(diǎn)。[1-4]但HS-GC-MS法若想在實(shí)踐工作中作為標(biāo)準(zhǔn)方法來使用,還需要對(duì)影響HS-GC-MS定量分析的影響因素進(jìn)一步考察,還需要對(duì)同樣檢材的常規(guī)分光光度法測(cè)定與HS-GC-MS測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較。因此,本文就上述內(nèi)容進(jìn)行研究,以期對(duì)血中一氧化碳的HS-GC-MS分析方法的標(biāo)準(zhǔn)化操作提供借鑒。

    1 材料和方法

    1.1溶液配制

    乳酸溶液:取乳酸12.5mL于帶蓋錐形瓶中,加去離子水37.5mL,混勻,即得25%乳酸溶液;血液稀釋劑:稱取0.25g連二亞硫酸鈉和0.093g三羥甲基氨基甲烷(THAM),加入100mL去離子水中,混勻。

    1.2儀器條件

    1.3實(shí)驗(yàn)方法

    1.3.1飽和血樣制備

    取血樣,用去離子水1∶1稀釋后,取適量體積于頂空瓶中,加1-辛醇2~3滴,通入一氧化碳?xì)怏w30min,每隔2~3min,晃動(dòng)頂空瓶使一氧化碳制備均勻。30min后取頂空瓶在氮?dú)饬飨峦?~3min,以便去除血液中未結(jié)合血紅蛋白的CO氣體,密閉保存。

    1.3.2檢材樣品制備

    取檢血0.4mL(n=2或3),加入12mL頂空瓶中,鋁蓋密封,再用1mL注射器抽取25%乳酸液0.5mL注入頂空瓶中,將密封的頂空瓶放入80℃加熱塊加熱10min后,準(zhǔn)確抽取0.3mL頂空氣體,迅速進(jìn)行GC/MS分析。

    1.3.3對(duì)照樣品制備

    取檢血0.4mL(n=2或3),加入12mL頂空瓶中,按照“1.3.1飽和血樣制備”方法,通入一氧化碳?xì)怏w至檢血飽和,用鋁蓋密封后,余下步驟按照1.3.2等操作過程,準(zhǔn)確抽取0.3mL頂空氣體,迅速進(jìn)行GC/MS分析。

    2 結(jié)果與討論

    2.1定量線性范圍

    取HbCO飽和血與空白血按比例混合,配制成0%(空白血)、25%、50%、75%、100%濃度的HbCO血各1mL,余下步驟按照1.3.2操作,頂空制樣GC/MS分析。以濃度為橫坐標(biāo)x,以吸收峰面積為縱坐標(biāo)y,得y=1.0×107x+512270(r=0.9924,n=3)。

    2.2實(shí)驗(yàn)條件考察

    2.2.1飽和血樣的制備

    通氣時(shí)間:取5份不同來源的空白血液分成5組,每1組空白血再分成4個(gè)水平,每個(gè)水平通CO氣體時(shí)間不同,分別為5min、10min、15min、30min和40min,通氣體操作同1.3.1。將通好CO的血檢材,平行操作分裝到12mL頂空瓶中,余下操作同1.3.2。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,隨著通氣時(shí)間延長(zhǎng),CO峰面積測(cè)值呈上升趨勢(shì),5~15min通氣時(shí)間明顯不足,30~40min通氣時(shí)間測(cè)量結(jié)果變化不大,證明達(dá)到飽和血樣制備的要求。這與文獻(xiàn)[2]中報(bào)道的通CO氣體10~20min即可達(dá)到飽和的結(jié)果不相符,主要原因分析可能是本文采用石英毛細(xì)管通CO,CO氣泡控制較小,造成反應(yīng)時(shí)間較長(zhǎng)。

    飽和程度的判定:一氧化碳飽和血樣的制備是頂空-氣質(zhì)定量測(cè)定的關(guān)鍵性步驟,通常將檢材血通CO一段時(shí)間,以其作為參比,測(cè)定值當(dāng)作飽和值,如果通氣過程達(dá)不到飽和程度,會(huì)造成測(cè)定結(jié)果偏高,準(zhǔn)確性遭到質(zhì)疑,用檢材飽和血來制作參比,可以消除血色素和腐敗的影響,但是以HS-GC-MS法測(cè)定來判定碳氧血紅蛋白飽和程度,操作方法耗時(shí),對(duì)血液的需求量也較大,因此本文借用了紫外分光光度法,快速評(píng)價(jià)飽和血的測(cè)定方法。

    這種方法將通CO的血液每隔5min取出1~2滴,用血液稀釋劑以1∶200的倍數(shù)稀釋,在500~600nm范圍內(nèi)掃描,測(cè)定538nm和555nm處的吸收光值,按照文獻(xiàn)[5]中的經(jīng)驗(yàn)公式,新鮮血液的(A538/A555)100=1.23左右即認(rèn)定飽和,或者是在500~600nm范圍內(nèi)掃描的峰型圖形不發(fā)生改變且(A538/A555)100比值保持不變,也可以認(rèn)定血液達(dá)到飽和程度。

    2.2.2頂空熱塊加熱時(shí)間

    加熱時(shí)間:頂空瓶采取熱塊加熱的方式,首先將熱塊溫度設(shè)定為80℃,接下來取4組頂空瓶,每組3瓶,依次在每個(gè)頂空瓶中加入0.4mLHbCO飽和血,密封頂空瓶,加熱前用注射器注入25%乳酸0.5mL混勻,置熱塊加熱時(shí)間分別為5min,10min,15min和30min,進(jìn)樣比較。結(jié)果表明在該溫度下加熱時(shí)間10min足夠,時(shí)間延長(zhǎng)色譜峰吸收峰面積略有下降,但不顯著。

    加熱溫度:本實(shí)驗(yàn)室已發(fā)文獻(xiàn)[1、3]報(bào)道的方法中考察了熱塊溫度控制在50℃、60℃、70℃、80℃、90℃、100℃、110℃(n=3)等情況下的實(shí)驗(yàn),結(jié)果表明加熱溫度從50~110℃,對(duì)其靈敏度幾乎不影響,為便于操作,本文選定80℃。

    2.2.3加酸及加酸方式考察

    酸的種類:在GC/MS定性定量分析中,是檢測(cè)檢材全血中的總CO量,需要加入一定量的酸使結(jié)合態(tài)HbCO變成游離態(tài)CO。本文比較了相同濃度的乳酸和磷酸,分2組,每組3瓶,按照1.3.2的操作方法,比較制備的飽和一氧化碳血液的HS-GC-MS法測(cè)定CO峰面積,結(jié)果未見明顯差異。乳酸屬于有機(jī)酸,其作用相對(duì)溫和,在熱塊加熱過程中緩慢釋放CO,不建議用強(qiáng)酸反應(yīng),強(qiáng)酸會(huì)造成血液中蛋白質(zhì)變性、碳化等現(xiàn)象。

    加酸方式:取3組頂空瓶,每組3瓶,依次在每個(gè)頂空瓶中加入0.4mL一氧化碳飽和血,第一組直接密封頂空瓶,在熱塊加熱前用注射器加入25%乳酸0.5mL;第二組加入25%乳酸0.5mL后密封頂空瓶,之后熱塊加熱;第三組是加入0.5mL乳酸于小玻璃瓶中,將小玻璃瓶放入頂空瓶后密封,臨用前混合。結(jié)果表明將乳酸置于小瓶中臨用前混合的效果最好,CO損失小,但操作稍微繁瑣。加酸后再密封頂空瓶的操作,其過程中會(huì)有CO氣體損失,在與密封后加酸的操作相比,CO的損失量約為11%。

    酸的用量:頂空法分析中兩相間的體積變化對(duì)測(cè)定結(jié)果是有影響的,依據(jù)計(jì)算公式:

    式中,A是待測(cè)物的氣相色譜峰面積;CG是頂空中的待測(cè)物的濃度;C0是液體樣品中待測(cè)物的初始濃度,K是分配系數(shù);β是相量比。參數(shù)K的效率由提取溫度和β決定,是受兩相間(物質(zhì))相對(duì)的體積量決定。對(duì)于一氧化碳這樣的一個(gè)分配系數(shù)比較大的分析物,相比β對(duì)峰面積影響不大。本文考察了乳酸加入體積分別為0.5mL和1.0mL,以及檢材體積為0.4mL和0.8mL,相對(duì)于12mL頂空瓶的總體積來說,β變化不大,體積的少量改變對(duì)測(cè)定結(jié)果未見影響。

    2.2.4有關(guān)腐敗檢材的測(cè)定

    近些年,關(guān)于腐敗檢材CO中毒的檢驗(yàn)經(jīng)常有,也有關(guān)于尸體中CO的分布及代謝的研究報(bào)道。[6]文獻(xiàn)中建立的家兔CO中毒致死模型中,取中毒的新鮮血和室溫、4℃、-20℃下放置45天的腐敗血進(jìn)行間斷性的HS-GC-MS測(cè)定,盡管室溫放置的檢材均已發(fā)黑變臭,但45天后仍能檢測(cè)到CO含量最低為8.1%。[1、3]盡管這樣的數(shù)據(jù)不能解釋CO的產(chǎn)生是由于吸入還是由于死后微生物的分解所產(chǎn)生,但至少說明腐敗的血液和CO含量低于10%的檢材血液仍能用HS-GC-MS法進(jìn)行測(cè)定。此外,還要提醒的是較低含量的CO鑒定,在出具檢驗(yàn)報(bào)告時(shí)要慎重,長(zhǎng)期吸煙的人、交通警察、部分地區(qū)的女性,其體內(nèi)CO的含量也接近10%。[7]

    2.3HS-GC-MS法與分光光度法比較

    選擇5份一氧化碳中毒檢材,HS-GC-MS分析時(shí)按照1.3.2和1.3.3的操作,分光光度法分析時(shí)按照《中國(guó)刑事科學(xué)技術(shù)大全毒物與毒品檢驗(yàn)》[8]中的一氧化碳測(cè)定法操作,結(jié)果如表所示。

    表 不同方法測(cè)定中毒檢材血液中一氧化碳含量(%)

    結(jié)果表明,對(duì)于一氧化碳中毒含量在50-60%時(shí),幾種方法測(cè)定結(jié)果差別不大,通常這一濃度也是判定一氧化碳中毒死亡原因的濃度,但當(dāng)檢材保存不當(dāng)、中毒量濃度不高時(shí),幾種方法差別較大,另外分光光度法無法對(duì)凝固的、腐敗的血液,臟器檢材進(jìn)行測(cè)定。

    綜上,一氧化碳中毒血的HS-GC-MS法檢測(cè)是一種相對(duì)穩(wěn)定的測(cè)定方法,其線性范圍較寬,更適合于血液、臟器、組織等檢材操作,但HS-GC-MS法測(cè)定的是血液中的總一氧化碳的含量,不排除組織等檢材中微量的、正常水平的一氧化碳的干擾。

    [1]郝紅霞,于忠山,王炯,等.頂空氣質(zhì)聯(lián)用法測(cè)定腐敗血、肝檢材中CO[J].中國(guó)法醫(yī)學(xué)雜志,2006,21(6):340-341.

    [2]于忠山.頂空氣相色譜法測(cè)定生物組織中的一氧化碳[J].中國(guó)法醫(yī)學(xué)雜志,1992,7(3):155-158.

    [3]Hao H,Zhou H,Liu X,etal.An accurate method formicroanalysisofcarbon monoxidein putridpostmortem blood by head-space gaschromatography-mass spectro metry(HS/GC/MS)[J].Forensic Sci Int.,2013,229(1-3): 116-121.

    [4]Varlet V,De Croutte EL,Augsburger M,et al. Accuracy profile validation of a new method for carbon monoxide measurement in the humanblood using headspace-gaschromatography-massspectrometry (HS-GC-MS)[J].J Chromatogr B, 2012, 880(1): 125-131.

    [5]陳燾.毒理學(xué)教材[M].第2版,北京:人民衛(wèi)生出版社,2004:78-82.

    [6]Vassiliki A.Boumba,Theodore Vougiouklakis. Evaluation of the Methods Used for Carboxyhemoglobin Analysis in Postmortem Blood[J].International Journal of Toxicology,2005,24:275-281.

    [7]王海玲,李君,王利民.唐山市交通廢氣污染對(duì)交通警察HBCO飽和度的影響[J].中國(guó)療養(yǎng)醫(yī)學(xué),2004,13(2):79-80.

    [8]劉文.中國(guó)刑事科學(xué)技術(shù)大全(毒品和毒物檢驗(yàn))[M].北京:中國(guó)人民公安大學(xué)出版社,2003:698-700.

    (責(zé)任編輯:于萍)

    D918.93

    A

    2095-7939(2015)01-0075-03

    2014-10-27

    張婷(1975-),女,遼寧沈陽人,中國(guó)刑警學(xué)院法化學(xué)系講師,碩士,主要從事刑事毒物毒品分析研究。

    猜你喜歡
    空瓶檢材頂空
    一個(gè)空瓶
    滿瓶不響空瓶響
    分批換VS一次換
    買酒還瓶
    頂空—固相微萃取—全二維氣相色譜—飛行時(shí)間質(zhì)譜測(cè)定水中短鏈氯化石蠟
    疑難生物檢材DNA的檢驗(yàn)探究
    微量接觸類生物檢材的游離DNA問題分析
    直接擴(kuò)增法提取脫落細(xì)胞DNA
    頂空衍生固相微萃取測(cè)定大米中醛類物質(zhì)
    科技手段在優(yōu)質(zhì)檢材獲取中的應(yīng)用
    河南科技(2014年5期)2014-02-27 14:08:22
    国产精品.久久久| 亚洲av欧美aⅴ国产| 99国产精品免费福利视频| 精品一区二区三卡| 丁香六月天网| 亚洲少妇的诱惑av| 亚洲精品国产av蜜桃| 妹子高潮喷水视频| 黄色 视频免费看| 欧美日韩亚洲高清精品| 一二三四在线观看免费中文在| 老司机在亚洲福利影院| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 国产成+人综合+亚洲专区| 国产1区2区3区精品| 国产99久久九九免费精品| 国产精品一区二区免费欧美 | 高清欧美精品videossex| 黄色怎么调成土黄色| 嫁个100分男人电影在线观看| 丝袜人妻中文字幕| a在线观看视频网站| 免费高清在线观看视频在线观看| 亚洲一区二区三区欧美精品| 母亲3免费完整高清在线观看| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 免费观看av网站的网址| 香蕉丝袜av| 天堂中文最新版在线下载| 免费观看av网站的网址| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 色精品久久人妻99蜜桃| 国产伦人伦偷精品视频| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 啪啪无遮挡十八禁网站| 亚洲精品自拍成人| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 一区二区三区精品91| 两性夫妻黄色片| 一区在线观看完整版| 免费在线观看黄色视频的| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 在线观看免费午夜福利视频| 国产极品粉嫩免费观看在线| 操出白浆在线播放| 一进一出抽搐动态| 少妇人妻久久综合中文| 国产成人欧美在线观看 | 搡老岳熟女国产| 另类亚洲欧美激情| 亚洲国产日韩一区二区| 在线天堂中文资源库| 岛国毛片在线播放| 欧美激情极品国产一区二区三区| 国产欧美亚洲国产| 黄色视频,在线免费观看| 狠狠狠狠99中文字幕| 狠狠狠狠99中文字幕| 两性夫妻黄色片| 国产成人一区二区三区免费视频网站| av又黄又爽大尺度在线免费看| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 黄片播放在线免费| 啦啦啦在线免费观看视频4| 高清欧美精品videossex| 丝袜脚勾引网站| 国产亚洲一区二区精品| 欧美日韩黄片免| 亚洲少妇的诱惑av| 十八禁人妻一区二区| 欧美午夜高清在线| 国产欧美日韩精品亚洲av| 视频区欧美日本亚洲| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 青春草亚洲视频在线观看| 久久99热这里只频精品6学生| 91精品伊人久久大香线蕉| 午夜福利影视在线免费观看| 丝袜脚勾引网站| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| av在线app专区| 考比视频在线观看| 啦啦啦 在线观看视频| 天堂中文最新版在线下载| 十八禁人妻一区二区| 精品国产乱码久久久久久小说| 爱豆传媒免费全集在线观看| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 国精品久久久久久国模美| 我要看黄色一级片免费的| 久久久精品区二区三区| 国产精品影院久久| 欧美变态另类bdsm刘玥| 日韩三级视频一区二区三区| 香蕉丝袜av| 69av精品久久久久久 | 老鸭窝网址在线观看| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 精品熟女少妇八av免费久了| 老司机福利观看| 一区二区三区四区激情视频| 无限看片的www在线观看| 午夜两性在线视频| 男女午夜视频在线观看| 人妻 亚洲 视频| 女人久久www免费人成看片| 欧美激情高清一区二区三区| 视频在线观看一区二区三区| 国产熟女午夜一区二区三区| 亚洲成国产人片在线观看| 国产99久久九九免费精品| 老司机亚洲免费影院| 亚洲熟女毛片儿| 波多野结衣av一区二区av| 久久99热这里只频精品6学生| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 国产精品99久久99久久久不卡| 欧美亚洲日本最大视频资源| 亚洲 国产 在线| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 在线天堂中文资源库| 精品免费久久久久久久清纯 | 91字幕亚洲| 久久久欧美国产精品| 在线天堂中文资源库| 亚洲av欧美aⅴ国产| 极品人妻少妇av视频| 成人黄色视频免费在线看| 免费观看a级毛片全部| 美女扒开内裤让男人捅视频| 国精品久久久久久国模美| 97人妻天天添夜夜摸| 午夜免费成人在线视频| 成年动漫av网址| 久久精品人人爽人人爽视色| 69av精品久久久久久 | 欧美精品一区二区免费开放| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| √禁漫天堂资源中文www| 精品高清国产在线一区| 岛国在线观看网站| 中文字幕制服av| 精品一区二区三卡| 黄色视频不卡| 亚洲av国产av综合av卡| 两人在一起打扑克的视频| 久久热在线av| 搡老熟女国产l中国老女人| 热re99久久精品国产66热6| 免费少妇av软件| 久久久久精品人妻al黑| 欧美在线一区亚洲| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 一本色道久久久久久精品综合| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 在线十欧美十亚洲十日本专区| 婷婷色av中文字幕| 精品人妻在线不人妻| 国产精品一区二区在线观看99| 黄片大片在线免费观看| 亚洲成国产人片在线观看| 国产成人av激情在线播放| 热99国产精品久久久久久7| 婷婷成人精品国产| av欧美777| 99精国产麻豆久久婷婷| 91国产中文字幕| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 精品高清国产在线一区| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 国产精品久久久av美女十八| 一二三四社区在线视频社区8| 男女免费视频国产| 亚洲国产av新网站| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 色婷婷久久久亚洲欧美| 久久久久久久大尺度免费视频| 国产主播在线观看一区二区| 99国产综合亚洲精品| tocl精华| 中文字幕最新亚洲高清| 国产精品久久久久久精品电影小说| 久久久久久人人人人人| 国产精品久久久人人做人人爽| 欧美激情高清一区二区三区| 国产极品粉嫩免费观看在线| 亚洲国产精品一区三区| 亚洲精品国产av成人精品| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 久久久精品免费免费高清| 日本a在线网址| 午夜老司机福利片| 91老司机精品| 久久久久国产精品人妻一区二区| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 久久女婷五月综合色啪小说| 久久久国产成人免费| 午夜久久久在线观看| av不卡在线播放| 涩涩av久久男人的天堂| 一二三四社区在线视频社区8| 中国美女看黄片| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 女性被躁到高潮视频| 丁香六月天网| 久久女婷五月综合色啪小说| 美女主播在线视频| 成人影院久久| 成年人午夜在线观看视频| 国产亚洲精品第一综合不卡| 一个人免费在线观看的高清视频 | 久久国产精品人妻蜜桃| 精品久久久精品久久久| 成人国产一区最新在线观看| www.999成人在线观看| 母亲3免费完整高清在线观看| 大片电影免费在线观看免费| 多毛熟女@视频| 亚洲欧美一区二区三区久久| 热99国产精品久久久久久7| 999久久久精品免费观看国产| 欧美变态另类bdsm刘玥| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 两人在一起打扑克的视频| 99国产精品99久久久久| 亚洲 国产 在线| www.999成人在线观看| 国产精品影院久久| 一区福利在线观看| 中文字幕人妻丝袜制服| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 久久综合国产亚洲精品| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 亚洲久久久国产精品| 桃红色精品国产亚洲av| 亚洲avbb在线观看| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 日韩欧美国产一区二区入口| 捣出白浆h1v1| 波多野结衣一区麻豆| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 日韩 亚洲 欧美在线| 国产不卡av网站在线观看| 精品少妇黑人巨大在线播放| 日韩大码丰满熟妇| 久久久国产一区二区| 亚洲精品国产av成人精品| 午夜视频精品福利| www.999成人在线观看| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 国产精品欧美亚洲77777| 老司机影院成人| 美女中出高潮动态图| 男女边摸边吃奶| 搡老乐熟女国产| 亚洲成人免费电影在线观看| 1024香蕉在线观看| 国产黄频视频在线观看| 久久ye,这里只有精品| 麻豆乱淫一区二区| 亚洲成人国产一区在线观看| 亚洲av国产av综合av卡| 久久国产精品人妻蜜桃| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 男女床上黄色一级片免费看| 18在线观看网站| 久久久久久久久免费视频了| 啦啦啦啦在线视频资源| 高清视频免费观看一区二区| 久久久久国内视频| 久久久精品94久久精品| 国产视频一区二区在线看| 亚洲,欧美精品.| 国产熟女午夜一区二区三区| 淫妇啪啪啪对白视频 | 亚洲专区中文字幕在线| 黄片小视频在线播放| 91国产中文字幕| 脱女人内裤的视频| 久久人人97超碰香蕉20202| 国产在线免费精品| 三级毛片av免费| 午夜91福利影院| 一个人免费看片子| 天天操日日干夜夜撸| av网站在线播放免费| 久久人人爽人人片av| 亚洲成人国产一区在线观看| 亚洲人成电影观看| 青春草亚洲视频在线观看| 日韩中文字幕欧美一区二区| 国产伦理片在线播放av一区| 欧美日韩一级在线毛片| 亚洲欧美一区二区三区久久| 亚洲成人免费av在线播放| 女性生殖器流出的白浆| 亚洲熟女精品中文字幕| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 中文字幕制服av| 视频区欧美日本亚洲| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 欧美97在线视频| 久久久久久久久久久久大奶| 国产精品 欧美亚洲| 激情视频va一区二区三区| 国产一区二区激情短视频 | 超碰97精品在线观看| 国产一卡二卡三卡精品| 欧美成狂野欧美在线观看| 中文字幕av电影在线播放| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产免费福利视频在线观看| 亚洲综合色网址| 久久人人爽人人片av| 欧美激情极品国产一区二区三区| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 国产日韩欧美亚洲二区| 国产亚洲精品久久久久5区| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 亚洲激情五月婷婷啪啪| 亚洲综合色网址| 亚洲成人免费电影在线观看| 国产欧美亚洲国产| 日韩制服骚丝袜av| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 久久久精品免费免费高清| 99精品久久久久人妻精品| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 国产淫语在线视频| 日韩欧美免费精品| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 大片免费播放器 马上看| 自线自在国产av| 亚洲av日韩在线播放| 国产高清国产精品国产三级| 免费在线观看影片大全网站| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 午夜91福利影院| 自线自在国产av| 国产欧美日韩精品亚洲av| 亚洲国产av影院在线观看| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久 | 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 中国国产av一级| 丝瓜视频免费看黄片| 成在线人永久免费视频| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 精品福利观看| 在线天堂中文资源库| 一本色道久久久久久精品综合| 美女国产高潮福利片在线看| 久热这里只有精品99| 欧美成狂野欧美在线观看| 午夜91福利影院| 日韩 亚洲 欧美在线| 欧美97在线视频| 欧美精品一区二区大全| 精品高清国产在线一区| h视频一区二区三区| 久久久国产成人免费| 老司机深夜福利视频在线观看 | 大片电影免费在线观看免费| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 99精品欧美一区二区三区四区| e午夜精品久久久久久久| 国产精品免费视频内射| 啦啦啦 在线观看视频| 免费不卡黄色视频| 久久国产精品影院| 捣出白浆h1v1| 一级片'在线观看视频| 国产日韩欧美视频二区| 日韩视频一区二区在线观看| 中文字幕人妻熟女乱码| 在线观看免费高清a一片| 国产成人系列免费观看| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 中文字幕av电影在线播放| 国产淫语在线视频| 国产成人av教育| 欧美性长视频在线观看| 在线精品无人区一区二区三| 亚洲免费av在线视频| a 毛片基地| 成人免费观看视频高清| 欧美另类亚洲清纯唯美| 国产高清视频在线播放一区 | 人妻人人澡人人爽人人| 国产又色又爽无遮挡免| 操出白浆在线播放| 欧美日韩精品网址| 视频区欧美日本亚洲| 欧美少妇被猛烈插入视频| 亚洲少妇的诱惑av| 久久久久久久久久久久大奶| 91精品国产国语对白视频| 亚洲国产看品久久| 视频区图区小说| 黄色视频在线播放观看不卡| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 午夜久久久在线观看| 嫩草影视91久久| 嫁个100分男人电影在线观看| 无限看片的www在线观看| 91精品三级在线观看| av网站在线播放免费| 飞空精品影院首页| 免费观看av网站的网址| 黄色a级毛片大全视频| 日韩视频在线欧美| 后天国语完整版免费观看| 国产老妇伦熟女老妇高清| 国产精品九九99| 免费av中文字幕在线| 丝瓜视频免费看黄片| 中国美女看黄片| 中文字幕精品免费在线观看视频| 午夜福利,免费看| av网站在线播放免费| 蜜桃国产av成人99| cao死你这个sao货| 午夜福利视频精品| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 一级a爱视频在线免费观看| 色94色欧美一区二区| 久久影院123| 美女中出高潮动态图| 人人妻人人澡人人看| 欧美日韩精品网址| 天堂中文最新版在线下载| 国产成人精品无人区| 丝袜美足系列| 黄片小视频在线播放| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 美女大奶头黄色视频| 亚洲色图综合在线观看| 国产区一区二久久| 人人澡人人妻人| 青春草视频在线免费观看| 操出白浆在线播放| 一区二区三区激情视频| 香蕉丝袜av| 男男h啪啪无遮挡| 国产欧美日韩一区二区三 | 欧美国产精品va在线观看不卡| 欧美日本中文国产一区发布| 国产高清videossex| 搡老岳熟女国产| 精品国产一区二区久久| 午夜两性在线视频| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 99久久综合免费| 高清视频免费观看一区二区| 999久久久精品免费观看国产| 美女大奶头黄色视频| 日韩免费高清中文字幕av| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 成年人午夜在线观看视频| 国产精品九九99| 久久综合国产亚洲精品| 一区二区日韩欧美中文字幕| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 午夜视频精品福利| 久久精品成人免费网站| 又黄又粗又硬又大视频| 美女高潮到喷水免费观看| 中国国产av一级| 午夜福利一区二区在线看| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区 | 国产成人a∨麻豆精品| 高清视频免费观看一区二区| √禁漫天堂资源中文www| 美女午夜性视频免费| 桃花免费在线播放| av线在线观看网站| 男女边摸边吃奶| av不卡在线播放| 一个人免费在线观看的高清视频 | 91字幕亚洲| 免费观看a级毛片全部| 国产视频一区二区在线看| 久久免费观看电影| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 中文字幕色久视频| 精品欧美一区二区三区在线| 亚洲国产精品一区三区| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 97在线人人人人妻| 国产在线视频一区二区| 国产成人精品无人区| www.精华液| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 69av精品久久久久久 | 美国免费a级毛片| 91成年电影在线观看| 国产av国产精品国产| 一二三四社区在线视频社区8| 两个人看的免费小视频| 国产av一区二区精品久久| 国产精品免费大片| 免费少妇av软件| 日韩中文字幕视频在线看片| 午夜福利视频在线观看免费| av片东京热男人的天堂| 男人舔女人的私密视频| 精品国产乱码久久久久久小说| 国产成人欧美| 麻豆国产av国片精品| 婷婷成人精品国产| 99香蕉大伊视频| 老汉色∧v一级毛片| 欧美成狂野欧美在线观看| 久久国产精品影院| 一级片免费观看大全| 国产精品熟女久久久久浪| 久久人妻熟女aⅴ| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 国产在视频线精品| av有码第一页| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 精品少妇黑人巨大在线播放| 亚洲精品久久午夜乱码| 在线精品无人区一区二区三| 国产精品一区二区免费欧美 | 免费av中文字幕在线| 一区二区日韩欧美中文字幕| 老司机午夜福利在线观看视频 | 亚洲精品第二区| 视频在线观看一区二区三区| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 亚洲一区二区三区欧美精品| 少妇 在线观看| 男女边摸边吃奶| 秋霞在线观看毛片| 丝袜人妻中文字幕| 麻豆乱淫一区二区| 久久久久国内视频| 国产视频一区二区在线看| 桃红色精品国产亚洲av| 韩国高清视频一区二区三区| 青草久久国产| 激情视频va一区二区三区| 青草久久国产| 老司机靠b影院| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 18禁观看日本| 三级毛片av免费| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产区一区二久久| 天天影视国产精品| 国产精品 欧美亚洲| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲欧洲日产国产| 久久久欧美国产精品| 午夜免费鲁丝| 久久久国产精品麻豆| netflix在线观看网站| 丝袜美腿诱惑在线| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 性色av乱码一区二区三区2| 老司机影院成人| 日韩人妻精品一区2区三区| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 欧美日韩成人在线一区二区| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 69精品国产乱码久久久| 自线自在国产av| 性少妇av在线| 国产精品久久久av美女十八| 老司机福利观看| 日韩欧美一区视频在线观看| av一本久久久久| 精品少妇黑人巨大在线播放| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 叶爱在线成人免费视频播放| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 欧美激情高清一区二区三区| 老司机在亚洲福利影院| a在线观看视频网站| 纯流量卡能插随身wifi吗| 亚洲国产av影院在线观看| 国产在线观看jvid| 欧美少妇被猛烈插入视频| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 久久国产亚洲av麻豆专区| 亚洲性夜色夜夜综合| www日本在线高清视频| 亚洲精品自拍成人| 蜜桃国产av成人99| 国产成人av教育| 在线观看一区二区三区激情| 美女扒开内裤让男人捅视频| 亚洲第一青青草原| 窝窝影院91人妻| 精品国产一区二区三区久久久樱花| av不卡在线播放| 日韩大码丰满熟妇| 妹子高潮喷水视频| 精品国产一区二区久久| 搡老岳熟女国产| 青春草亚洲视频在线观看| 亚洲国产日韩一区二区| 精品少妇内射三级| 中文字幕人妻丝袜制服| 国产精品免费视频内射| 免费观看a级毛片全部| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国产亚洲午夜精品一区二区久久|