千金子霜質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

李英霞， 侯立靜， 高 華， 劉桂霞， 蘇麗君， 慈倩倩

（1.青島大學(xué)藥學(xué)院，山東青島266021；2.山東省中醫(yī)藥研究院，山東濟南250014；3.山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院研究生教育中心，山東章丘250202）

千金子霜質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

李英霞1， 侯立靜2， 高 華1， 劉桂霞2， 蘇麗君1， 慈倩倩3

（1.青島大學(xué)藥學(xué)院，山東青島266021；2.山東省中醫(yī)藥研究院，山東濟南250014；3.山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院研究生教育中心，山東章丘250202）

目的 對千金子霜進行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。方法 以瀉下成分千金子甾醇及千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯為對照品，建立薄層色譜 （TLC）法，并對10批不同產(chǎn)地的千金子霜進行鑒別。高效液相色譜 （HPLC）法對千金子霜中這兩種瀉下成分、水分、灰分及脂肪油的含有量進行測定。結(jié)果 10批千金子霜在與千金子甾醇及千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯對應(yīng)的TLC位置上，均顯示出相同顏色的斑點，水分含有量為5.55%～7.22%，總灰分、酸不溶性灰分含有量分別為5.95%～6.82%和0.12%～0.45%，含油量為18.04%～20.00%，千金子甾醇和千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯含有量分別為0.134%～0.182%和0.212%～0.248%。結(jié)論 該方法可用于千金子霜的定性鑒別及定量分析，為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的進一步完善提供了實驗基礎(chǔ)。

千金子霜；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；千金子甾醇；千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯；TLC；HPLC

千金子又名續(xù)隨子，是我國傳統(tǒng)中藥材之一，來源于大戟科植物續(xù)隨子Euphorbia lathyris L.的干燥成熟種子，其性溫，味辛，有小毒，瀉下作用強烈，屬峻下逐水藥，具有逐水消腫，破血散結(jié)之功效，用于水腫痰飲、積滯脹滿、二便不通、血瘀經(jīng)閉等癥，外治頑癬、疣贅［1］，而且在抗腫瘤、抗白血病等方面具有較大的開發(fā)潛力［2-9］。千金子中含有大量脂肪油，包括二萜酯類、游離二萜醇及多種脂肪酸，另外還含有香豆素、甾醇類等成分［10］，近年來又發(fā)現(xiàn)了兩種新骨架化合物［11-12］。一般認(rèn)為，脂肪油為千金子導(dǎo)瀉的有效部位，也是毒性部位，其中的二萜酯類成分6，20-環(huán)氧千金二萜醇苯乙酸酯 （俗稱千金子甾醇）和千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯為千金子的主要瀉下成分之一［13-14］，故為了緩和其峻烈之性，降低其毒性，一般要求去油制霜炮制后使用?！吨袊幍洹?010年版將千金子甾醇確定為千金子藥材中的 “含量測定”指標(biāo)，并規(guī)定了其含有量限度標(biāo)準(zhǔn)不得少于0.35%。另外，將炮制品千金子霜單列，規(guī)定了其 “制法”、 “性狀”、秦皮乙素的 “TLC鑒別”、脂肪油的 “含量測定”及 “限度標(biāo)準(zhǔn)”（18.0%～20.0%），但仍缺乏對毒性成分的質(zhì)控方法及限度標(biāo)準(zhǔn)，難以保證臨床使用的安全性和有效性。因此，本課題組前期采用新研制的制霜設(shè)備，對千金子制霜新工藝進行了考察［15］，比較了制霜前后脂肪油及主要瀉下成分的含有量［16］，發(fā)現(xiàn)制霜后其含有量均明顯下降。本實驗將10批不同產(chǎn)地的千金子霜繼續(xù)進行研究，旨為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的進一步完善提供實驗基礎(chǔ)。

1 儀器、試劑與試藥

Waters2695HPLC色譜儀（美國Waters公司）；2996二級管陣列檢測器、R-201旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 （上海申勝生物技術(shù)有限公司）。

千金子霜為河南南陽、河南社旗、廣西、新疆、云南5個產(chǎn)地的千金子藥材經(jīng)制霜新工藝所得到的樣品，共10批，批號為20090622-1～20090622-10。

秦皮乙素對照品購自中國食品藥品檢定研究院，批號為110741-200506，供含有量測定用；千金子甾醇和千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯對照品均購自北京顯通時代醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司，批號分別為20081106和200812228，經(jīng)HPLC面積歸一化法測定，純度分別達(dá)98.00%和99.67%，與文獻 ［17-18］報道基本一致。硅膠G（青島海洋化工有限公司）。甲醇為色譜純；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 外觀性狀 5個產(chǎn)地的10批千金子霜均為均勻、疏松的淡黃色粉末 （河南社旗和新疆產(chǎn)樣品的顏色比其他產(chǎn)地略深），微顯油性，味辛辣。

2.2 薄層色譜鑒別

2.2.1 秦皮乙素的鑒別 千金子制霜炮制后其脂肪油含有量明顯下降，而香豆素類成分 （如秦皮乙素等）提高。因此，按照 《中國藥典》2010年版 （一部）千金子霜 “鑒別 （2）”項下方法，對不同產(chǎn)地的10批千金子霜樣品進行了薄層色譜 （TLC）鑒別。結(jié)果顯示，在與秦皮乙素對照品相應(yīng)的TLC位置上，它們均顯示出相同的亮藍(lán)色熒光斑點，見圖1。

圖1 千金子霜中秦皮乙素的TLC圖

2.2.2 兩種瀉下成分的鑒別 《中國藥典》2010年版（一部）千金子和其炮制品千金子霜的 “鑒別”項下只有香豆素類成分秦皮乙素的TLC鑒別方法，而其作為峻下逐水藥，卻沒有主要瀉下成分的定性鑒別方法。因此，本實驗建立了以瀉下成分千金子甾醇和千金子二萜醇二乙酸苯甲酸酯為對照品的千金子霜的TLC鑒別方法，并應(yīng)用于10批樣品。

2.2.2.1 供試品溶液的制備 取千金子霜樣品10批，每批2g，加甲醇15mL，超聲（300W、45kHz）5min，濾過，濾液蒸干，加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至2mL量瓶中，甲醇稀釋至刻度，即得。

2.2.2.2 對照品溶液的制備 取千金子甾醇和千金子二萜醇二乙酸苯甲酸酯對照品適量，加甲醇分別制成每1mL含2mg上述成分的對照品溶液。

2.2.2.3 TLC鑒別 按照 《中國藥典》2010年版 （一部）附錄ⅥB方法進行試驗，分別吸取上述對照品和供試品溶液5μL，點于同一硅膠薄層G板 （以羧甲基纖維素鈉為黏合劑）上，以石油醚 （60～90℃）-乙酸乙酯-環(huán)己烷-丙酮（18∶6∶12∶1）為展開劑展開，取出，晾干，噴5%硫酸乙醇溶液，揮干后于105℃下烘烤5min。結(jié)果，在與對照品相應(yīng)的TLC位置上，千金子甾醇顯淡黃色斑點，而千金子二萜醇二乙酸苯甲酸酯先顯褐色，后漸變?yōu)榛宜{(lán)色，斑點比較清晰，見圖2。

2.3 含水量、總灰分及酸不溶性灰分含量測定 《中國藥典》2010年版 （一部）千金子霜的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)缺少 “檢查”項，本實驗按照 《中國藥典》2010年版 （一部）附錄IX H水分測定法 （烘干法）及附錄IXK項下方法，分別對10批千金子霜的含水量、總灰分及酸不溶性灰分含有量進行了測定，結(jié)果見表1、表2。

圖2 千金子甾醇和千金子二萜醇二乙酸苯甲酸酯的TLC圖

表1 10批千金子中試霜平均含水量和含油量測定結(jié)果（n=3）

表2 10批千金子中試霜總灰分和酸不溶性灰分含有量測定結(jié)果（n=3）

2.4 含油量測定 《中國藥典》2010年版 （一部）千金子霜 “含量測定”項下規(guī)定，含油量限度范圍在18.0%～

20.0%之間，本實驗按照藥典方法，對10批千金子霜的含油量進行了測定，結(jié)果見表1。

2.5 瀉下成分千金子甾醇 （Ⅰ）和千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯 （Ⅱ）的測定 《中國藥典》2010年版 （一部）千金子霜 “含量測定”項下僅有含油量測定方法與標(biāo)準(zhǔn)。作為毒性中藥，須采用更準(zhǔn)確、快速的方法測定其毒性成分含有量，規(guī)定其含有量限度標(biāo)準(zhǔn)才能保證用藥的安全性、有效性及質(zhì)量穩(wěn)定性。因此，本實驗建立了HPLC法測定千金子霜中主要瀉下成分千金子甾醇 （Ⅰ）和千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯 （Ⅱ）的含有量，色譜條件、對照品和供試品溶液的制備方法及方法學(xué)考察參考文獻 ［16］，結(jié)果見表3。

表3 10批千金子中試霜中Ⅰ和Ⅱ平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)測定結(jié)果（n=3）

3 討論與小結(jié)

3.1 千金子作為峻下逐水藥，毒性較大，其瀉下成分既是該藥材的毒性物質(zhì)，也是有效物質(zhì)，不能完全去除。在臨床應(yīng)用或作為制劑原料使用時，大多采用毒性較低的炮制品千金子霜，故對其瀉下成分進行有效控制是很有必要的。目前，《中國藥典》2010年版收載的千金子霜質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)并不完善，沒有 “檢查”項和主要瀉下成分 “TLC鑒別”及“含量測定”項。目前，迄今尚未見對不同產(chǎn)地千金子霜樣品進行系統(tǒng)質(zhì)量研究的文獻報道。

3.2 本實驗對瀉下成分千金子甾醇和千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯TLC鑒別中樣品的提取方法、點樣量、展開劑種類、溶劑比例等進行了篩選，最終確定了鑒別方法。由圖2可知，10批千金子霜的TLC在與對照品相應(yīng)的位置上，均出現(xiàn)相同顏色的斑點，除廣西千金子霜斑點顏色略淡外，其它產(chǎn)地樣品無明顯差異。

3.3 由表1和表2可知，5個產(chǎn)地10批千金子霜的含水量均較低，在5.55%～7.22%之間，總灰分含有量在5.95%～6.82%之間，酸不溶性灰分含有量在0.12%～0.45%之間，略有差別。另外，含油量在18.04%～20.00%之間，符合藥典規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)。

3.4 10批千金子霜中兩種瀉下成分的含有量分別在0.134%～0.182%和0.212%～0.248%之間，表明不同產(chǎn)地、批次之間兩者含有量差異不大。

3.5 本課題組前期報道了HPLC測定兩種瀉下成分的方法以及比較制霜前后兩者含有量的變化，用于探討千金子制霜的目的及原理［16］。本實驗主要從完善千金子霜的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)角度出發(fā)，以新制霜設(shè)備生產(chǎn)的10批千金子霜為研究對象，首次建立了兩種瀉下成分的TLC鑒別方法，并采用已建立的HPLC法測定其含有量，同時對水分、總灰分和酸不溶性灰分進行了考察，這為今后進一步完善千金子霜的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了科學(xué)依據(jù)。

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R284.1

B

1001-1528（2015）12-2769-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.12.045

2014-09-09

國家 “十一五”科技支撐計劃項目 （2006BAI09B06-05）

李英霞 （1964—），女，碩士，教授，從事中藥品質(zhì)評價與質(zhì)量控制研究。Tel：（0532）82991202，E-mail：li_yx1964@ 163.com