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    藤茶活性成分二氫楊梅素對人胚腎細(xì)胞和肝細(xì)胞增殖的影響

    2015-12-08 08:13:57周防震鄭小江張曉元
    中成藥 2015年12期
    關(guān)鍵詞:藤茶防震楊梅

    周防震, 鄭小江, 張曉元

    (1.湖北民族學(xué)院生物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,湖北恩施445000;2.華南理工大學(xué)工業(yè)研究總院,廣東廣州510641)

    藤茶活性成分二氫楊梅素對人胚腎細(xì)胞和肝細(xì)胞增殖的影響

    周防震1, 鄭小江1, 張曉元2

    (1.湖北民族學(xué)院生物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,湖北恩施445000;2.華南理工大學(xué)工業(yè)研究總院,廣東廣州510641)

    目的 探討藤茶活性成分二氫楊梅素(dihydromyricetin,DMY)對人正常細(xì)胞增殖的影響。方法 體外培養(yǎng)人胚腎細(xì)胞(HEK-293)和肝細(xì)胞(L-02),MTT法觀察DMY對其細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果 DMY對HEK-293和L-02細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50)分別為475.3μg/mL和324.8μg/mL,而陽性對照藥物順鉑的IC50分別為7.4μg/mL和7.7μg/mL。結(jié)論 藤茶活性成分二氫楊梅素對人正常細(xì)胞HEK-293和人L-02細(xì)胞具有相對低毒性。

    藤茶;二氫楊梅素;細(xì)胞增殖;人胚腎細(xì)胞;人肝細(xì)胞

    二氫楊梅素(dihydromyricetin,DMY),大量存在于葡萄科蛇葡萄屬植物藤茶(Ampelopsis grossedentata)幼嫩莖葉中。報(bào)道表明二氫楊梅素具有抗氧化、抗炎、抗突變、止咳、化痰和抗菌等多種生理活性[1]。近年來二氫楊梅素的抗腫瘤作用日益受到重視,資料顯示二氫楊梅素對人鼻咽癌HK-1細(xì)胞[2]、白血病HL-60、K562細(xì)胞[3]、肺腺癌AGZY-83-a細(xì)胞[4]和人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞[5-6]具有較強(qiáng)的增殖抑制作用,然而有關(guān)二氫楊梅素對人正常細(xì)胞影響方面的研究尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)以人胚腎細(xì)胞 (HEK-293)和人肝細(xì)胞 (L-02)為研究對象,研究藤茶活性成分二氫楊梅素對其體外增殖的影響,以期為二氫楊梅素的開發(fā)和應(yīng)用開拓新的視野。

    1 材料與方法

    1.1 材料 二氫楊梅素由華南理工大學(xué)工業(yè)技術(shù)研究總院張曉元教授從藤茶莖葉中提取 (純度為98%,HPLC法測定);細(xì)胞培養(yǎng)基 (DMEM)、胎牛血清 (FBS)為美國Gibco公司產(chǎn)品;細(xì)胞培養(yǎng)板購自美國Corning公司;胰蛋白酶和青霉素-鏈霉素雙抗溶液購自上海碧云天生物技術(shù)有限公司;注射用順鉑(Cisplatin)購自齊魯制藥有限公司;噻唑藍(lán)(MTT)和二甲基亞砜(DMSO)購自美國Sigma公司。HEK-293由湖南中醫(yī)藥大學(xué)高強(qiáng)博士提供;L-02細(xì)胞由暨南大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院段華英碩士提供。

    1.2 方法

    1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)和處理 以每孔4×103的細(xì)胞密度將指數(shù)增殖期細(xì)胞HEK-293和L-02分別接種于96孔板內(nèi),培養(yǎng)液為含10%FBS的DMEM,每孔180μL,培養(yǎng)12 h后,每孔加入20μL含不同二氫楊梅素濃度的DMEM完全培養(yǎng)液,二氫楊梅素終質(zhì)量濃度為20、40、80、160和 320 μg/mL每個濃度設(shè)6個復(fù)孔。另設(shè)空白對照組和陽性藥物順鉑組。細(xì)胞置37℃二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48 h,待用。

    1.2.2 MTT法檢測細(xì)胞增殖 取出“1.2.1”項(xiàng)中培養(yǎng)48 h的細(xì)胞培養(yǎng)板,每孔加入5 mg/mLMTT 20μL,繼續(xù)培養(yǎng)4 h后棄去上清,每孔加入DMSO 200μL,置振蕩儀上充分混勻,采用酶標(biāo)儀,以570 nm為測試波長,630 nm為參考波長,測量各孔吸光度,計(jì)算細(xì)胞生長抑制率。抑制率為:(對照組A值-實(shí)驗(yàn)組A值)/對照組A值×100%。

    1.2.3 數(shù)據(jù)分析 半數(shù)抑制濃度IC50(50%Inhibitory Concentration)根據(jù)IC50計(jì)算軟件計(jì)算;試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)均用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 ()表示,統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件包中的One-way ANOVA(單因素方差分析)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

    2 結(jié)果

    2.1 二氫楊梅素和順鉑對HEK-293細(xì)胞增殖的影響 作用48 h,100~180μg/mL的二氫楊梅素對HEK-293增殖具有顯著的抑制作用;低于60μg/mL的二氫楊梅素對人HEK-293增殖的影響,與對照組相比不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (圖1);而5~40μg/mL順鉑對HEK-293均有顯著的抑制作用(圖2)。

    2.2 二氫楊梅素和順鉑對L-02細(xì)胞增殖的影響 作用48 h,40~160μg/mL二氫楊梅素對L-02細(xì)胞增殖具有顯著的抑制作用;低于40μg/mL的二氫楊梅素對L-02細(xì)胞增殖的影響,與對照組相比不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (圖3);而0.625~20μg/mL順鉑對L-02細(xì)胞均有顯著的抑制作用(圖4)。

    2.3 二氫楊梅素和順鉑對HEK-293和L-02細(xì)胞的IC50二氫楊梅素對HEK-293和L-02細(xì)胞的IC50分別為475.3和324.8μg/mL;而順鉑對HEK-293和L-02細(xì)胞的IC50分別為7.4和7.7μg/mL(表1)。

    圖1 二氫楊梅素對HEK-293增殖的影響

    圖2 順鉑對HEK-293增殖的影響

    圖3 二氫楊梅素對L-02細(xì)胞增殖的影響

    圖4 順鉑對L-02細(xì)胞增殖的影響

    3 討論

    肝和腎是人體重要的器官,對維持正常生理平衡具有十分重要的作用。許多化療藥物缺乏對正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的選擇性,不僅可能破壞免疫系統(tǒng),導(dǎo)致機(jī)體對腫瘤的自我保護(hù)屏障喪失,而且能損害人體肝、腎等重要器官,進(jìn)而影響其功能,對人體毒副作用大,嚴(yán)重地影響了藥物的臨床效果[7]。

    表1 二氫楊梅素和順鉑對HEK-293和L-02細(xì)胞的IC50

    前期研究發(fā)現(xiàn),順鉑對人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞的IC50為2.53μg/mL(數(shù)據(jù)待發(fā)表),本試驗(yàn)中化療藥物順鉑對人胚腎細(xì)胞HEK-293和人肝細(xì)胞L-02的IC50分別為7.4μg/mL和7.7μg/mL,表明化療藥物順鉑細(xì)胞選擇性較差,具有明顯的肝、腎毒性,這與文獻(xiàn)報(bào)道一致[8-9]。蘇東林等[10]利用大鼠從活體水平證明了二氫楊梅素的低毒性,Wistar大鼠口服灌胃的最大耐受量為5.0 g/kg,同時還發(fā)現(xiàn)二氫楊梅素能有效預(yù)防和治療酒精性肝損傷。張友勝等[11]利用小鼠從活體水平證明了二氫楊梅素的低毒性,小鼠灌胃最大耐受量5.0 g/kg,腹腔注射半數(shù)致死量為(1.41±0.13)g/kg。本研究離體條件下藤茶活性成分二氫楊梅素對人正常腎細(xì)胞和肝細(xì)胞增殖的影響,結(jié)果顯示二氫楊梅素對HEK-293和L-02細(xì)胞的IC50分別為475.3 μg/mL和324.8μg/mL,表明離體條件下二氫楊梅素對人正常細(xì)胞HEK-293和人L-02細(xì)胞具有相對低毒性。以前的研究[5]發(fā)現(xiàn)二氫楊梅素對人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的IC50為73.6μg/m L,遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于二氫楊梅素對人胚腎細(xì)胞HEK-293和人肝細(xì)胞L-02的IC50,表明二氫楊梅素不僅具有低毒性,其抗腫瘤作用還具有明顯的細(xì)胞選擇性。

    藤茶是一種古老的藥食兩用植物,長期作為類茶植物和中草藥在民間廣泛使用,其干燥莖葉中二氫楊梅素的含量可達(dá)30%以上[12]。近年來,藤茶已逐漸被人們所接受并成為受人們青睞的保健品。本研究從離體條件證明了二氫楊梅素對人正常肝、腎細(xì)胞的低毒性,豐富了藤茶安全性的新認(rèn)識,有助于進(jìn)一步增強(qiáng)市場和消費(fèi)者對藤茶的信心,進(jìn)而加快藤茶的開發(fā)和利用步伐。

    [1] 周防震,張曉元,郭 勇.二氫楊梅素抗腫瘤及其機(jī)制的研究進(jìn)展[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2010,28(9):1914-1916.

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    [4] 尹梅梅,潘振偉,蔡本志,等.二氫楊梅素誘導(dǎo)人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)GZY-83-a凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國藥理學(xué)通報(bào),2008,24(5):626-630.

    [5] 周防震,張曉元,孫奮勇,郭 勇.二氫楊梅素對人乳腺癌

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    R285.5

    B

    1001-1528(2015)12-2756-03

    10.3969/j.issn.1001-1528.2015.12.040

    2014-08-23

    湖北民族學(xué)院博士啟動基金項(xiàng)目 (MY2012B010)

    周防震 (1976—),男,博士,副教授,主要研究方向?yàn)槊腹こ膛c生物制藥,Tel:(0718)8438261,E-mail:tentzf.student @sina.com

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