2015年全國(guó)省級(jí)獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)結(jié)果分析

董昕欣，劉 偉，邴國(guó)霞，張劭俁，李文京，

王傳彬1，張 倩1，吳佳俊1，李雁冰2，郭建宏3

（1.中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，北京 朝陽(yáng) 100125；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所，

黑龍江 哈爾濱 150001；3.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，甘肅 蘭州 730046）

2015年全國(guó)省級(jí)獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)結(jié)果分析

董昕欣1，劉 偉1，邴國(guó)霞1，張劭俁1，李文京1，

王傳彬1，張 倩1，吳佳俊1，李雁冰2，郭建宏3

（1.中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，北京 朝陽(yáng) 100125；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所，

黑龍江 哈爾濱 150001；3.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，甘肅 蘭州 730046）

獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室作為動(dòng)物疫病防控的重要技術(shù)支撐機(jī)構(gòu)，不管是獸醫(yī)科學(xué)研究、獸醫(yī)藥品研制、還是動(dòng)物疫病檢測(cè)診斷，都離不開(kāi)實(shí)驗(yàn)室的工作。而實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力和水平則是實(shí)驗(yàn)室的核心，是動(dòng)物疫病防控提供技術(shù)支撐的固基之本，源之所在。實(shí)驗(yàn)室間能力比對(duì)作為一項(xiàng)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室工作能力的方法一直在全世界范圍內(nèi)廣泛應(yīng)用，我國(guó)的衛(wèi)生系統(tǒng)、質(zhì)檢系統(tǒng)也將此方法作為評(píng)價(jià)、管理、提高實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)水平的手段[1]。2010年以前，獸醫(yī)系統(tǒng)一直沒(méi)有系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)方法，各級(jí)獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室只能參加外系統(tǒng)、外部門的能力對(duì)比來(lái)評(píng)價(jià)本實(shí)驗(yàn)室的工作能力。2010年農(nóng)業(yè)部印發(fā)《獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室考核工作實(shí)施方案》[2]，明確要求每年組織一次實(shí)驗(yàn)室比對(duì)試驗(yàn)，為評(píng)價(jià)各級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)水平、提升各級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室工作能力提供了新的手段。

按農(nóng)業(yè)部要求，中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心組織實(shí)施了2015年省級(jí)獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室能力比對(duì)，全國(guó)32個(gè)省級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室全部參加，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)完成了比對(duì)樣品制備、分發(fā)、檢測(cè)和結(jié)果回收。比對(duì)結(jié)果客觀反映了實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)能力和技術(shù)水平，對(duì)該結(jié)果進(jìn)行分析討論有利于進(jìn)一步做好獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室管理工作。

1 比對(duì)計(jì)劃

本次比對(duì)依據(jù)農(nóng)業(yè)部辦公廳和中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心有關(guān)2015年獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)的文件[3-4]要求，共設(shè)置4個(gè)比對(duì)項(xiàng)目，分別是H7N9亞型禽流感病毒（H7N9-AIV）檢測(cè)、口蹄疫抗體（FMD Ab）檢測(cè)、豬偽狂犬病gE抗體（PR gE-Ab）檢測(cè)、J亞型禽白血病抗體（J-AL Ab）檢測(cè)。全國(guó)共有32個(gè)省級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室（含新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)）參加此次比對(duì)。

2 比對(duì)方法

2.1 試驗(yàn)方法與標(biāo)準(zhǔn) 針對(duì)4個(gè)檢測(cè)能力比對(duì)項(xiàng)目，采用國(guó)家獸醫(yī)參考實(shí)驗(yàn)室或?qū)I(yè)實(shí)驗(yàn)室推薦的方法和試劑，其中部分試劑由參加比對(duì)的省級(jí)實(shí)驗(yàn)室自行準(zhǔn)備，見(jiàn)表1。

表1 比對(duì)試驗(yàn)的方法、標(biāo)準(zhǔn)和主要試劑

2.2 比對(duì)樣品制備

2.2.1 制備方式 各個(gè)國(guó)家獸醫(yī)參考實(shí)驗(yàn)室和專業(yè)實(shí)驗(yàn)室分別完成相應(yīng)樣品的制備、標(biāo)定、分裝和編號(hào)，并將樣品和標(biāo)定值送交中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心統(tǒng)一保存，作為盲樣下發(fā)使用。

2.2.2 H7N9-AIV樣品 尿囊液提取物樣品6份，參考值分別為強(qiáng)陽(yáng)性、弱陽(yáng)性、強(qiáng)陽(yáng)性、陰性、陰性、陰性。

2.2.3 FMD Ab樣品 免疫牛血清樣品6份，參考值分別為720、720、180、180、＜8、＜8。

2.2.4 PR gE-Ab樣品 豬血清樣品6份，參考值分別為強(qiáng)陽(yáng)性、強(qiáng)陽(yáng)性、弱陽(yáng)性、弱陽(yáng)性、陰性、陰性。

2.2.5 J-AL Ab樣品 雞血清樣品6份，參考值分

別為弱陽(yáng)性、弱陽(yáng)性、強(qiáng)陽(yáng)性、強(qiáng)陽(yáng)性、陰性、陰性。

2.3 比對(duì)樣品傳遞 比對(duì)樣品為具有生物學(xué)活性的血清、尿囊液，為保持其良好的生物學(xué)活性，樣品存放在-20℃以下冰柜中。分發(fā)時(shí)將樣品和試劑放入裝有冰袋的保溫箱中保存，由參加比對(duì)的省級(jí)實(shí)驗(yàn)室派專人在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)統(tǒng)一領(lǐng)取，并在12 h之內(nèi)送達(dá)參加比對(duì)的實(shí)驗(yàn)室。

2.4 評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)

2.4.1 H7N9-AIV檢測(cè)評(píng)判標(biāo)準(zhǔn) 強(qiáng)陽(yáng)性和弱陽(yáng)性樣品的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為“陽(yáng)性”；陰性樣品的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為“陰性”。

2.4.2 FMD Ab檢測(cè)評(píng)判標(biāo)準(zhǔn) 與參考值的偏差不超過(guò)一個(gè)滴度，判為結(jié)果準(zhǔn)確。

2.4.3 PR gE-Ab檢測(cè)評(píng)判標(biāo)準(zhǔn) 強(qiáng)陽(yáng)性和弱陽(yáng)性樣品的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為“陽(yáng)性”；陰性樣品的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為“陰性”。

2.4.4 J-AL Ab檢測(cè)評(píng)判標(biāo)準(zhǔn) 強(qiáng)陽(yáng)性和弱陽(yáng)性樣品的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為“陽(yáng)性”；陰性樣品的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為“陰性”。

3 比對(duì)結(jié)果

3.1 總體結(jié)果 根據(jù)比對(duì)結(jié)果評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)，32個(gè)參加省級(jí)實(shí)驗(yàn)室的所有項(xiàng)目的檢測(cè)結(jié)果全部準(zhǔn)確，具體見(jiàn)表2。

表2 32個(gè)實(shí)驗(yàn)室比對(duì)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

3.2 H7N9-AIV檢測(cè)比對(duì)結(jié)果 32個(gè)實(shí)驗(yàn)室對(duì)H7N9-AIV弱強(qiáng)陽(yáng)性和陰性樣品的檢測(cè)結(jié)果全部正確，見(jiàn)表3。

表3 各實(shí)驗(yàn)室H7N9-AIV檢測(cè)結(jié)果頻次與參考值對(duì)照

3.3 FMD Ab檢測(cè)比對(duì)結(jié)果 32個(gè)實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果全部正確。對(duì)于參考值相同的雙份重復(fù)樣品的檢測(cè)，大部分實(shí)驗(yàn)室（30/32）檢測(cè)結(jié)果自身重復(fù)性較好，說(shuō)明絕大部分實(shí)驗(yàn)室的隨機(jī)誤差較小；而第1號(hào)、第17號(hào)兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室對(duì)于參考值相同的兩份樣品檢測(cè)值不一致，反映出這兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室在質(zhì)控體系方面存在問(wèn)題。具體結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 各實(shí)驗(yàn)室FMD Ab檢測(cè)值離散

3.4 PR gE-Ab檢測(cè)比對(duì)結(jié)果 32個(gè)實(shí)驗(yàn)室對(duì)PR gE-Ab弱強(qiáng)陽(yáng)性和陰性樣品的檢測(cè)結(jié)果全部正確。見(jiàn)表4。

表4 各實(shí)驗(yàn)室PR gE-Ab檢測(cè)結(jié)果頻次與參考值對(duì)照

3.5 J-AL Ab檢測(cè)比對(duì)結(jié)果 32個(gè)實(shí)驗(yàn)室對(duì)JAL Ab弱強(qiáng)陽(yáng)性和陰性樣品的檢測(cè)結(jié)果全部正確，見(jiàn)表5。

表5 各實(shí)驗(yàn)室J-ALAb檢測(cè)結(jié)果頻次與參考值對(duì)照

4 討論

從比對(duì)結(jié)果來(lái)看，參加能力比對(duì)的32個(gè)省級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室4個(gè)比對(duì)項(xiàng)目的樣品檢測(cè)結(jié)果全部準(zhǔn)確，準(zhǔn)確率均為100%。這說(shuō)明持續(xù)5年開(kāi)展的檢測(cè)能力比對(duì)工作起到了發(fā)現(xiàn)問(wèn)題、促進(jìn)質(zhì)量體系改進(jìn)的作用。

4.1 本次實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)中設(shè)置了平行樣品，用以評(píng)估實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)體系的穩(wěn)定性。結(jié)果顯示，大部分實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果平行性好，但在口蹄疫抗體檢測(cè)比對(duì)結(jié)果中，有兩個(gè)省級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室對(duì)參考值相同的兩份樣品檢測(cè)結(jié)果不一致，甚至出現(xiàn)較大差異。這說(shuō)明，檢測(cè)過(guò)程存在較多的隨機(jī)性誤差，檢測(cè)系統(tǒng)的穩(wěn)定性較差。

4.2 本次設(shè)置的H7N9亞型禽流感病毒檢測(cè)項(xiàng)目，要求采用熒光RT-PCR方法，但仍有1個(gè)省份未能用熒光RT-PCR方法完成檢測(cè)，原因是實(shí)驗(yàn)室未配置熒光PCR儀。就目前省級(jí)實(shí)驗(yàn)室的工

作內(nèi)容來(lái)看，熒光PCR儀應(yīng)該是完成監(jiān)測(cè)任務(wù)的基本儀器，熒光PCR技術(shù)也是省級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備的基本能力，這說(shuō)明該省份的實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)儀器設(shè)備配備不足。

4.3 本次比對(duì)項(xiàng)目的設(shè)計(jì)緊密結(jié)合了我國(guó)動(dòng)物疫病防控的要求。《國(guó)家中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃（2012-2020年）》[5]中明確要求：到2020年，全國(guó)種禽場(chǎng)達(dá)到禽白血病的凈化標(biāo)準(zhǔn)；種畜場(chǎng)達(dá)到偽狂犬病的凈化標(biāo)準(zhǔn)。目前各地開(kāi)展凈化工作的病種也主要是禽白血病和偽狂犬病，通過(guò)開(kāi)展檢測(cè)能力比對(duì)驗(yàn)證了各省禽白血病和偽狂犬病的檢測(cè)能力，為凈化工作的順利實(shí)施奠定了良好的基礎(chǔ)。今后比對(duì)項(xiàng)目的選擇應(yīng)繼續(xù)以《國(guó)家中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃（2012-2020年）》為依據(jù)，擴(kuò)大獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)項(xiàng)目范圍，逐步覆蓋所有優(yōu)先防治的動(dòng)物疫病病種。

4.4 部分省份在近幾年比對(duì)工作均出現(xiàn)偏差，表明這些省份的實(shí)驗(yàn)室在檢測(cè)技術(shù)能力方面存在問(wèn)題，有針對(duì)性的培訓(xùn)能起到良好的矯正作用。以西藏為例，該省級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室在2011-2014年的能力比對(duì)中均出現(xiàn)了錯(cuò)誤，因此在2014年、2015年連續(xù)兩個(gè)年度安排檢測(cè)技術(shù)專家前往西藏進(jìn)行檢測(cè)項(xiàng)目的針對(duì)性培訓(xùn)，該實(shí)驗(yàn)室在2014年的能力比對(duì)只有一個(gè)樣品檢測(cè)有偏差[6]，2015年4個(gè)比對(duì)項(xiàng)目全部準(zhǔn)確。這說(shuō)明對(duì)于連續(xù)出現(xiàn)偏差的實(shí)驗(yàn)室，需要引起足夠的重視，應(yīng)針對(duì)實(shí)驗(yàn)室操作或管理采取有效措施，增加實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的穩(wěn)定性。

[1]劉來(lái)福，張鶴曉，張利峰，等.家禽禽流感病毒AGID抗體定性檢測(cè)及H5、H9亞型HI抗體定量檢測(cè)能力驗(yàn)證結(jié)果分析[J].現(xiàn)代測(cè)量與實(shí)驗(yàn)室管理，2004（2）：29-32.

[2]農(nóng)業(yè)部.農(nóng)業(yè)部關(guān)于印發(fā)《獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室考核管理辦法》的通知[Z].農(nóng)醫(yī)發(fā)[2009]15號(hào).北京：農(nóng)業(yè)部，2009-08-11.

[3]農(nóng)業(yè)部辦公廳.農(nóng)業(yè)部辦公廳關(guān)于開(kāi)展2015年獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)工作的通知[Z].農(nóng)辦醫(yī)[2015]7號(hào).北京：農(nóng)業(yè)部辦公廳，2015-03-02.

[4]中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心.關(guān)于印發(fā)《2015年省級(jí)獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)實(shí)施方案》的通知[Z].疫控（安）[2015]24號(hào).北京:中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，2014-03-06.

[5]國(guó)務(wù)院辦公廳.國(guó)務(wù)院辦公廳關(guān)于印發(fā)國(guó)家中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃（2012-2020年）的通知[Z].國(guó)辦發(fā)[2012]31號(hào).北京：國(guó)務(wù)院辦公廳，2012-05-20.

[6]董昕欣，劉偉，邴國(guó)霞，等.2014年全國(guó)省級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)結(jié)果分析[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志，2014，50（10）：101-102.

2015-09-28

農(nóng)業(yè)部動(dòng)物疫情監(jiān)測(cè)與防治經(jīng)費(fèi)