人參皂苷Rg1對心肌細(xì)胞的影響及其信號傳導(dǎo)機(jī)制

劉燃，宋蕊，袁麗，凌露，楊萍，郭家智，張戈，陸地，孫林

人參皂苷Rg1對心肌細(xì)胞的影響及其信號傳導(dǎo)機(jī)制

劉燃，宋蕊，袁麗，凌露，楊萍，郭家智，張戈，陸地，孫林

目的：從細(xì)胞和分子層面探討人參皂苷Rg1（G-Rg1）對心肌細(xì)胞的影響及其信號傳導(dǎo)機(jī)制。

方法：體外培養(yǎng)大鼠H9c2心肌細(xì)胞，按實(shí)驗(yàn)要求隨機(jī)分13組，每組5個(gè)平行孔，分別為空白對照組，單純?nèi)毖毖? h、6 h、12 h、24 h、48 h組，G-Rg1 5 μmol/L、10 μmol/L、50 μmol/L組，缺氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）的特異性抑制劑（YC-1）組，YC-1+G-Rg1組，蛋白激酶B（Akt）蛋白的磷酸化特異性抑制劑（Wortmannin）組，Wortmannin+G-Rg1組。檢測G-Rg1、缺血缺氧以及YC-1對心肌細(xì)胞活力及心肌細(xì)胞損傷的影響。同時(shí)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測心肌細(xì)胞內(nèi)HIF-1α、葡萄糖載體蛋白-1（GLUT-1）和血紅素氧合酶-1（HO-1）的信使核糖核酸mRNA表達(dá)水平變化。用蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測HIF-1α、GLUT-1和HO-1、活化轉(zhuǎn)錄因子-6（ATF-6）、抑制CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白（CHOP）和Akt等細(xì)胞信號通路蛋白表達(dá)水平變化。

結(jié)果：缺血缺氧時(shí)間與心肌細(xì)胞活力呈負(fù)相關(guān)（r=-0.8580，P＜0.05），與乳酸脫氫酶溢出率呈正相關(guān)（r=0.9201，P＜0.05）。G-Rg1 10 μmol/L組較單純?nèi)毖毖?4 h組細(xì)胞活力明顯回升（87.8%、62.6%，P＜0.05），細(xì)胞培養(yǎng)上清乳酸脫氫酶（LDH）含量明顯減少（25.0%、74.8%，P＜0.05），且上調(diào)了HIF-1α、GLUT-1、HO-1的mRNA表達(dá)水平（P＜0.05）。蛋白質(zhì)免疫印跡法分析顯示：YC-1+G-Rg1組較G-Rg1組，心肌細(xì)胞活力下降（68.0%，87.8%，P＜0.05），細(xì)胞培養(yǎng)上清LDH含量增加（56.4%，25.0%，P＜0.05），同時(shí)YC-1拮抗了G-Rg1對HIF-1α、GLUT-1、HO-1、ATF-6和CHOP的蛋白表達(dá)水平的調(diào)控（P＜0.05）；Wortmannin可拮抗G-Rg1對HIF-1α和CHOP的蛋白表達(dá)水平的調(diào)控（P＜0.05），及對Akt兩個(gè)磷酸化位點(diǎn)的激活作用（P＜0.05）。

結(jié)論：心肌細(xì)胞損傷程度與缺血缺氧時(shí)間有關(guān)；G-Rg1對心肌細(xì)胞具有保護(hù)作用，其機(jī)制激活HIF-1α及其下游因子的表達(dá)并抑制了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激效應(yīng)，可能與G-Rg1激活A(yù)kt有關(guān)。

人參皂苷Rg1；磷脂酰肌醇3激酶；缺氧誘導(dǎo)因子-1α；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激；凋亡

Methods: H9c2 cells were cultured and treated in different conditions by following groups:①Blank control group, ②Hypoxia alone group, the cells were treated for (2, 6, 12, 24, 48) hr respectively, ③G-Rg1 group, the cells were treated by G-Rg1 at (5, 10, 50) μmol/L respectively,④YC-1 group, which is the specifc inhibitor of hypoxia inducible factor-1α (HIF-1α), ⑤YC-1 + G-Rg1 group, ⑥Wortmannin group, which is the specifc inhibitor for protein kinase B (Akt) phosphorylation and ⑦Wortmannin + G-Rg1 group. Each experiment was conducted with 5 replicates. The effects of G-Rg1, hypoxia and YC-1 on cell activity and injury were studied; intracellular mRNA expressions of HIF-1α, glucose

transporter-1 (GLUT-1) and heme oxygenase-1 (HO-1) were examined by RT-PCR; protein expressions of HIF-1α, GLUT-1, HO-1, activating transcription factor-6 (ATF-6), CCAAT/enhancer binding protein homologous protein (CHOP) and Akt with its signal pathway factors were measured by Western blot analysis.

Results: The time of hypoxia was negatively related to cell activity (r=-0.8580, P＜0.05) and positively related to LDH overfow rate (r=0.9201, P＜0.05). G-Rg1 (10μmol/L) group showed increased cell activity than Hypoxia alone (24 hr) group (87.8% vs 62.6 %, P＜0.05), while decreased LDH overfow (25.0% vs 74.8%, P＜0.05), and up-regulated mRNA expressions of HIF-1α, GLUT-1 and HO-1, P＜0.05. YC-1+ G-Rg1 group had decreased cell activity than G-Rg1 group (68.0% vs 87.8%, P＜0.05), while increased LDH overfow (56.4% vs 25.0%, P＜0.05). Meanwhile, YC-1 clashed the effect of G-Rg1 on protein expressions of HIF-1α, GLUT-1, HO-1, ATF-6 and CHOP, P＜0.05; wortmannin clashed the effect of G-Rg1 on protein expressions of HIF-1α, CHOP, P＜0.05 and suppressed the two phosphorylation sites for Akt activation, P＜0.05.

Conclusion: G-Rg1 may protect rat’s H9c2 cells in vitro by activating expressions of HIF-1α with its downstream factors and inhibiting endoplasmic reticulum stress, which might be related to the effect of G-Rg1 on Akt activation.

(Chinese Circulation Journal, 2015,30:1096.)

人參皂苷Rg1（G-Rg1）是人參、三七等人參屬藥材的主要活性成分之一，有促進(jìn)海馬神經(jīng)生長[1]以及對心血管系統(tǒng)的保護(hù)作用[2，3]。磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）和蛋白激酶B（Akt），參與了多種細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)，在細(xì)胞存活和抗凋亡中起重要作用。心肌細(xì)胞缺血缺氧時(shí)，其功能、代謝和結(jié)構(gòu)均可能發(fā)生變化，同時(shí)可表達(dá)缺氧誘導(dǎo)因子-1（HIF-1），受缺氧信號調(diào)控的HIF-1α是活性亞基，HIF-1的下游基因涉及能量代謝、血管新生、鐵與血紅素的代謝以及一氧化氮的合成等。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（ERS）與許多心血管疾病有關(guān)，其中抑制CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白（CHOP）是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的主要通路[4]。研究證明作為依賴缺血缺氧表達(dá)的HIF-1和ERS相關(guān)因子有潛在的聯(lián)系[5]。那兩者之間是否會存在交叉通路的調(diào)控現(xiàn)象，互相影響各自的下游基因表達(dá)；G-Rg1對心肌細(xì)胞的保護(hù)作用是否與抑制ERS介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡有關(guān)，本研究做進(jìn)一步探討。

1 材料與方法

主要儀器及試劑：蛋白電泳系統(tǒng)、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）儀、水平電泳系統(tǒng)和凝膠成像儀（BIO-RAD,美國）；普通培養(yǎng)箱及三氣培養(yǎng)箱（Theromo electron Corporation, 美國）；G-Rg1（純度≥98%，由昆明制藥廠提供）；Wortmannin及YC-1（Sigma-Aldrich Co. LLC, 美國）；HIF-1α（Novus Biologicals, 美國）；GLUT-1（Millipore,Germany）；血紅素氧合酶-1（HO-1）、活化轉(zhuǎn)錄因子-6（ATF-6）和甘油醛-3-磷酸脫氫酶（內(nèi)參，GAPDH）（Santa Cruz Biotechnology, 美國）；Akt、phosphor-Akt （Ser473）、phosphor-Akt （Thr308）和CHOP（Cell Signaling technology, 美國）；所有PCR引物（Invitrogen Corporation，中國）。

分組：使用10%小牛血清 DMEM/F12 高糖培養(yǎng)液（于2014年購自Santa Cruz Biotechnology, 美國）培養(yǎng)大鼠H9c2心肌細(xì)胞（于2014年由廣東醫(yī)學(xué)科學(xué)研究中心林秋雄教授饋贈），以 1×106個(gè)/ml濃度接種于底面積25 cm2培養(yǎng)瓶中，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2飽和濕度）中培養(yǎng)，每隔兩天傳代。因前期預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)進(jìn)行細(xì)胞饑餓同步化處理后，使心肌細(xì)胞提前出現(xiàn)應(yīng)激狀態(tài)導(dǎo)致后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果不穩(wěn)定，故當(dāng)細(xì)胞密度均勻生長至 80%～90%時(shí)，隨機(jī)分13組，每組5個(gè)平行孔。空白對照組：將高糖培養(yǎng)液置換為無血清 DMEM低糖培養(yǎng)基繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，不作任何處理；單純?nèi)毖毖? h、6 h、12 h、24 h、48 h組：將高糖培養(yǎng)液置換為無血清 DMEM低糖培養(yǎng)基后進(jìn)行缺氧，使用1%O2的三氣培養(yǎng)箱，處理H9c2心肌細(xì)胞 2 h、6 h、12 h、24 h和48 h；G-Rg1 5 μmol/L、10 μmol/L、50 μmol/L組：將高糖培養(yǎng)液置換為無血清 DMEM低糖培養(yǎng)基后再分別加入5、10和50 μmol/L G-Rg1處理細(xì)胞0.5 h，而后再置入三氣培養(yǎng)箱處理12 h、24 h和48 h；HIF-1α的特異性抑制劑（YC-1）組：將高糖培養(yǎng)液置換為無血清 DMEM低糖培養(yǎng)基后使用10 μmol/L YC-1處理細(xì)胞 15 min，置入三氣培養(yǎng)箱處理24 h；YC-1+G-Rg1組：將高糖培養(yǎng)液置換為無血清 DMEM低糖培養(yǎng)基后使用10 μmol/L

YC-1處理細(xì)胞 15 min，而后用10 μmol/L G-Rg1處理細(xì)胞0.5 h，最后置入三氣培養(yǎng)箱處理24 h；蛋白激酶B（Akt）蛋白的磷酸化特異性抑制劑（Wortmannin）組：將高糖培養(yǎng)液置換為無血清 DMEM低糖培養(yǎng)基后使用1 μmol/L Wortmannin 處理細(xì)胞 15 min，置入三氣培養(yǎng)箱處理24 h。Wortmannin+G-Rg1組：將高糖培養(yǎng)液置換為無血清 DMEM低糖培養(yǎng)基后使用1 μmol/L Wortmannin 處理細(xì)胞 15 min，而后用10 μmol/L G-Rg1處理細(xì)胞0.5 h，最后置入三氣培養(yǎng)箱處理6 h、24 h。

細(xì)胞活性測定[3]：培養(yǎng)細(xì)胞單層鋪滿 96孔平底板，選取細(xì)胞密度均一、狀態(tài)良好的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，每組設(shè)十個(gè)孔。按說明書依次加入相應(yīng)試劑后，酶標(biāo)儀 OD 550 nm 處測量各孔的吸光值并記錄數(shù)據(jù)。同樣實(shí)驗(yàn)條件，重復(fù)五次。復(fù)孔數(shù)據(jù)求相應(yīng)均值后依據(jù)公式：（缺血缺氧板OD值—空白對照組OD值）/（對照板OD值—空白對照組OD值）求出相應(yīng)的細(xì)胞相對活性。

細(xì)胞乳酸脫氫酶（LDH）溢出率測定[6]：按上述的細(xì)胞分組處理細(xì)胞，不同培養(yǎng)時(shí)間后用移液器吸盡培養(yǎng)瓶內(nèi)的細(xì)胞培養(yǎng)上清至高壓滅菌的離心管中。向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入1 ml 0.5% TritonX-100，置于普通培養(yǎng)箱，20 min 后用移液器吸盡培養(yǎng)瓶內(nèi)細(xì)胞裂解液至另一批高壓滅菌的離心管中。按說明書依次加入相應(yīng)試劑后，酶標(biāo)儀 OD 340 nm 處測量各孔的吸光值并記錄數(shù)據(jù)。同樣實(shí)驗(yàn)條件，重復(fù)五次。復(fù)孔數(shù)據(jù)求相應(yīng)均值后依據(jù)公式：LDH（U/L）=（測定OD值 — 對照OD值）/（標(biāo)準(zhǔn)OD值 — 空白OD值）×標(biāo)準(zhǔn)品濃度（0.2 mmol/L）×1000求出細(xì)胞培養(yǎng)上清和細(xì)胞裂解液各自的LDH含量，再依據(jù)公式：LDH%=細(xì)胞培養(yǎng)上清LDH/（細(xì)胞培養(yǎng)上清LDH+細(xì)胞裂解液LDH）× 100%求出相應(yīng)各組的細(xì)胞LDH溢出率百分比。

RT-PCR檢測：細(xì)胞總RNA提取后進(jìn)行純度和濃度測定，按說明書行cDNA逆轉(zhuǎn)錄。所有引物已用PubMed BLAST進(jìn)行引物來源、引物反應(yīng)條件、引物長度和引物鏈配對等檢測。各基因引物系列見表1。并按照相應(yīng)反應(yīng)條件進(jìn)行PCR擴(kuò)增，完成后將PCR產(chǎn)物鑒定并定量分析，電泳完成后將瓊脂糖膠置于 Bio-Rad ChemiDoc XRS凝膠圖像分析系統(tǒng)中拍照采集圖像，Quantity one 4.4.0 計(jì)算各條帶的熒光強(qiáng)度值及其與GAPDH的比值進(jìn)行定量分析。同樣實(shí)驗(yàn)條件，重復(fù)五次。

蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測：蛋白質(zhì)提取后定量，進(jìn)行SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝膠電泳，而后使用半干轉(zhuǎn)移系統(tǒng)轉(zhuǎn)膜，完成后按照抗體說明書按一定比例依次加入一抗、二抗進(jìn)行孵育，孵育最佳時(shí)間后進(jìn)行化學(xué)發(fā)光、顯影、定影、拍照并晾干。用掃描儀掃描圖片后進(jìn)行灰度分析。同樣實(shí)驗(yàn)條件，重復(fù)五次。

表1 各基因引物序列

2 結(jié)果

缺血缺氧時(shí)間與細(xì)胞損傷的關(guān)系（表2）：缺血缺氧時(shí)間與心肌細(xì)胞活力呈負(fù)相關(guān)（r=-0.8580，P＜0.05），與細(xì)胞培養(yǎng)上清LDH含量呈正相關(guān)（r=0.9201，P＜0.05），驗(yàn)證了體外缺血缺氧模型的建立。RT-PCR分析顯示HIF-1α、葡萄糖載體蛋白-1（GLUT-1）和HO-1在心肌細(xì)胞缺血缺氧2 h出現(xiàn)mRNA表達(dá)高峰。

表2 缺血缺氧時(shí)間與細(xì)胞損傷的關(guān)系

表2 缺血缺氧時(shí)間與細(xì)胞損傷的關(guān)系

注：LDH：細(xì)胞乳酸脫氫酶；RT-PCR：逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)。與空白對照組比*P＜ 0.05。余注見表1

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不同劑量G-Rg1對心肌細(xì)胞的作用（圖1）：分別用5 μmol/L、10 μmol/L和50 μmol/L的濃度梯度G-Rg1預(yù)處理心肌細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)的G-Rg110 μmol/L組較

單純?nèi)毖毖?4 h組細(xì)胞活力明顯回升（87.8%、62.6%，P＜0.05），細(xì)胞培養(yǎng)上清LDH含量明顯減少（25.0%、74.8%，P＜0.05），且上調(diào)了HIF-1α、GLUT-1、HO-1的信使核糖核酸mRNA表達(dá)水平（P＜0.05）。

圖1 濃度梯度的G-Rg1 對心肌細(xì)胞內(nèi)三個(gè)因子信使核糖核酸表達(dá)的RT-PCR 圖

G-Rg1可抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡（圖2）：蛋白質(zhì)免疫印跡法分析顯示：YC-1+G-Rg1組較G-Rg1組，心肌細(xì)胞活力下降（68.0%，87.8%，P＜0.05），細(xì)胞培養(yǎng)上清LDH含量增加（56.4%，25.0%，P＜0.05）。同時(shí)YC-1拮抗了G-Rg1對HIF-1α、GLUT-1、HO-1、ATF-6和CHOP的蛋白表達(dá)水平的調(diào)控（P＜0.05）。

圖2 YC-1拮抗G-Rg1對心肌細(xì)胞內(nèi)HIF-1α、GLUT-1、HO-1、ATF-6和CHOP的蛋白水平的調(diào)控作用的蛋白質(zhì)免疫印跡法圖

G-Rg1通過激活A(yù)kt信號通路抑制了CHOP介導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡（圖3、4）：蛋白質(zhì)免疫印跡法分析顯示用Wortmannin預(yù)處理后，可拮抗G-Rg1對HIF-1α和CHOP的蛋白表達(dá)水平的調(diào)控（P＜0.05）。同時(shí)可拮抗G-Rg1在對Akt兩個(gè)磷酸化位點(diǎn)的激活作用（P＜0.05）。

圖3 Wortmannin拮抗G-Rg1對HIF-1α和CHOP的蛋白表達(dá)水平調(diào)控的蛋白質(zhì)免疫印跡法圖

圖4 Wortmannin拮抗G-Rg1對Akt的蛋白磷酸化調(diào)控的蛋白質(zhì)免疫印跡法圖

3 討論

HIF-1α是缺血前預(yù)處理和遠(yuǎn)端缺血預(yù)處理起到心肌保護(hù)作用的關(guān)鍵調(diào)控基因[7，8]，經(jīng)脯氨酸羥

化酶（PHD）羥化修飾后降解，缺氧、藥物等刺激抑制PHD活性，使HIF-1α蛋白迅速增加，HIF-1α與HIF-1β聚合形成異二聚體，發(fā)揮轉(zhuǎn)錄因子的作用，調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)。缺氧時(shí)，HIF-1α可激活心肌營養(yǎng)蛋白-1以抑制心肌凋亡[9]，同時(shí)抑制心肌過度收縮，以保持降低能量代謝[10]。當(dāng)氧化磷酸化過程受抑制時(shí)，HIF-1通過誘導(dǎo)GLUT-1和糖酵解酶類以增加糖酵解，滿足心肌對能量代謝的需要。HO-1可催化降解血紅素產(chǎn)生鐵離子、膽紅素和一氧化碳，能抑制動脈斑塊和粥樣硬化的形成及發(fā)展并保護(hù)心肌。本研究發(fā)現(xiàn)HIF-1α、GLUT-1和HO-1 三個(gè)內(nèi)源性保護(hù)因子的mRNA表達(dá)高峰出現(xiàn)在缺血缺氧2 h時(shí)，通過G-Rg1預(yù)處理后，可使三個(gè)因子mRNA表達(dá)水平和蛋白水平的高峰明顯延長，起到更長時(shí)間的保護(hù)作用。

適度的ERS是種細(xì)胞保護(hù)機(jī)制，可使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)固有分子伴侶增加、蛋白質(zhì)翻譯受抑制、未折疊蛋白的降解增加或自噬作用增強(qiáng)。研究發(fā)現(xiàn)G-Rg1可抑制神經(jīng)毒性致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡[11]。CHOP基因缺陷小鼠可避免缺血再灌注引起的心肌細(xì)胞炎癥及凋亡[12]。適當(dāng)?shù)腅RS可增加ATF-6表達(dá)，以增強(qiáng)心肌在缺血再灌注中的生存能力[13,14]，同時(shí)還可以抑制由CHOP介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡[15]。一些ERS分子伴侶如HO-1等可同時(shí)由ATF-6和HIF-1誘導(dǎo)表達(dá)。心肌梗死后，使用HIF-1的下游因子促紅細(xì)胞生成素的注射治療，可抑制CHOP介導(dǎo)的凋亡，保護(hù)缺血心肌以改善心功能[16]。本研究發(fā)現(xiàn)G-Rg1激活HIF-1α后上調(diào)了ATF-6表達(dá)，同時(shí)下調(diào)了CHOP的表達(dá)，抑制HIF-1α表達(dá)后明顯削弱了G-Rg1對CHOP表達(dá)的抑制效應(yīng)，提示HIF-1可能位于ATF-6、CHOP的調(diào)控上游。但CHOP的下調(diào)與ATF-6的上調(diào)是否有關(guān)，本研究尚未探討。

PI3-K/Akt信號通路在缺血缺氧誘導(dǎo)的損傷反應(yīng)中發(fā)揮了保護(hù)作用，而PI3K/Akt信號通路可調(diào)控HIF-1α其下游因子， G-Rg1可抑制脂多糖誘導(dǎo)炎性蛋白酶及促炎性細(xì)胞因子的表達(dá)[17]，也可以通過PI3K/Akt信號通路上調(diào)HIF-1α及其下游基因，提示PI3K/Akt位于HIF-1α和CHOP的調(diào)控上游。本研究證實(shí)G-Rg1先激活PI3-K/Akt信號通路Akt的兩個(gè)磷酸化位點(diǎn)后，再上調(diào)了HIF-1α及其下游保護(hù)因子的表達(dá)，起到保護(hù)心肌細(xì)胞的作用，并通過上調(diào)HIF-1α的表達(dá)以抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的凋亡因子CHOP的表達(dá)，減少了心肌細(xì)胞的傷亡。初步證實(shí)了作為依賴缺血缺氧表達(dá)的HIF-1和ERS相關(guān)因子之間存在交叉通路的調(diào)控現(xiàn)象，G-Rg1對心肌細(xì)胞的保護(hù)作用與抑制ERS介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡有關(guān)。這些發(fā)現(xiàn)解釋了G-Rg1發(fā)揮其保護(hù)效應(yīng)涉及到的部分信號通路之間的調(diào)控關(guān)系。隨著越來越多G-Rg1機(jī)制學(xué)研究的完善，可使其成為臨床上用于保護(hù)心肌細(xì)胞的關(guān)鍵藥物。

[1] 陳彥, 吳鴻浩, 何斌, 等. 人參皂苷Rg1對大鼠海馬神經(jīng)元缺糖氧/復(fù)糖氧后鈣內(nèi)流的影響. 中國急救醫(yī)學(xué), 2012, 010: 1002-1949.

[2] 張慶勇, 陳燕萍, 劉芬, 等. 人參皂苷Rg1對大鼠急性心肌缺血抗氧化損傷指標(biāo)及超微結(jié)構(gòu)的影響. 中國循環(huán)雜志, 2015, 30: 164-167.

[3] Zhang ZL, Fan Y, Liu ML. Ginsenoside Rg1 inhibits autophagy in H9c2 cardiomyocytes exposed to hypoxia/reoxygenation. Mol Cell Biochem, 2012, 365: 243-250.

[4] Xu J, Zhou Q, Xu W, et al．Endoplasmic reticulum stress and diabetic cardiomyopathy．Exp Diabetes Res, 2012, 2012: 1-12.

[5] 劉燃, 孫林, 張戈. 人參皂苷Rg1對缺血再灌注損傷的保護(hù)機(jī)制研究進(jìn)展. 中國循環(huán)雜志, 2014, 29: 77-79.

[6] Cuadrado I, Fernández-Velasco M, Boscá L, et al. Labdane diterpenes protect against anoxia/reperfusion injury in cardiomyocytes: involvement of AKT activation. Cell Death Dis. 2011, 11: e229.

[7] Sarkar K, Cai Z, Gupta R, et al. Hypoxia-inducible factor 1 transcriptional activity in endothelial cells is required for acute phase cardioprotection induced by ischemic preconditioning. Proc Natl Acad Sci USA, 2012, 109: 10504-10509.

[8] Cai Z, Luo W, Zhan H, et al. Hypoxia-inducible factor 1 is required for remote ischemic preconditioning of the heart. Proc Natl Acad Sci USA, 2013, 110: 17462-17467.

[9] Robador PA, San Jose G, Rodriguez C, et al. HIF-1-mediated upregulation of cardiotrophin-1 is involved in the survival response of cardiomyocytes to hypoxia. Cardiovasc Res, 2011, 92: 247-255.

[10] Ronkainen VP, Skoumal R, Tavi P. Hypoxia and HIF-1 suppress SERCA2a expression in embryonic cardiac myocytes through two interdependent hypoxia response elements. J Mol Cell Cardiol, 2011, 50: 1008-1016.

[11] Luo FC, Zhou J, Lv T, et al. Induction of endoplasmic reticulum stress and the modulation of thioredoxin-1 in formaldehyde-induced neurotoxicity. Neurotoxicology, 2012, 33: 290-298.

[12] Miyazaki Y, Kaikita K, Endo M, et al. C/EBP homologous protein deficiency attenuates myocardial reperfusion injury by inhibiting myocardial apoptosis and inflammation. Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2011, 31: 1124-1132.

[13] Belmont PJ, Chen WJ, Thuerauf DJ, et al. Regulation of microRNA Expression in the Heart by the ATF6 Branch of the ER Stress Response. J Mol Cell Cardiol, 2012, 52: 1176-1182.

[14] Doroudgar S, Thuerauf DJ, Marcinko MC, et al. Ischemia activates the ATF6 branch of the endoplasmic reticulum stress response. J Biol Chem, 2009, 284: 29735-29745.

[15] Isodono K, Takahashi T, Imoto H, et al. PARM-1 is an endoplasmic reticulum molecule involved in endoplasmic reticulum stress-induced apoptosis in rat cardiac myocytes. PLoS One, 2010, 5: e9746.

[16] 馬驥, 鄭嗚之, 俞月萍. 促紅細(xì)胞生成素抑制心梗大鼠心肌核轉(zhuǎn)錄因子CHOP表達(dá)的研究. 中國藥學(xué)雜志, 2011, 46: 25-27

[17] Zong Y, Ai QL, Zhong LM, et al. Ginsenoside Rg1 attenuates lipopolysaccharide-induced inflammatory responses via the phospholipase C-γ1 signaling pathway in murine BV-2 microglial cells. Curr Med Chem, 2012, 19: 770-779.

Effect of Ginsenoside-rg1 on Rat's Cardiomyocytes With its Mechanism of Signal Pathway in vitro

LIU Ran, SONG Rui, YUAN Li, LING Lu, YANG Ping, GUO Jia-zhi, ZHANG Ge, LU Di, SUN Lin.
Department of Cardiology Third Ward, The second Affliated Hospital of Kunming Medical University, Kunming (650101), Yunnan, China
Co-corresponding Authors: SUN Lin, Email: sunlinkm@sina.com and LU Di, Email: ludi20040609@126.com

Objective: To investigate the effect of ginsenoside-rg1 (G-Rg1) on rat’s cardiomyocytes H9c2 with its mechanism of signal pathway in vitro.

Ginsenoside-rg1; Phosphoinositide-3 kinase; Hypoxia inducible factor-1α; Endoplasmic reticulum stress; Apoptosis

2015-03-31）

（編輯：王寶茹）

國家自然科學(xué)基金（81260061）；云南省科技廳-昆明醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合專項(xiàng)基金（2012FB046、2014FB047）；云南省科技廳-昆明醫(yī)科大學(xué)應(yīng)用基礎(chǔ)研究聯(lián)合專項(xiàng)重點(diǎn)項(xiàng)目（2013FB101）

650101 云南省昆明市，昆明醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院 心內(nèi)科三病區(qū)（劉燃、宋蕊、袁麗、凌露、張戈、孫林）；昆明醫(yī)科大學(xué)生物醫(yī)學(xué)工程中心（楊萍、郭家智、陸地）

劉燃 住院醫(yī)師 碩士 主要從事冠心病及缺血再灌注損傷研究 Email：179143498@qq.com 通訊作者：孫林 Email：sunlinkm@sina.com陸地 Email：ludi20040609@126.com

R54

A

1000-3614（2015）11-1096-05

10.3969/j.issn.1000-3614.2015.11.015