齊口裂腹魚生長(zhǎng)、肌肉品質(zhì)和脂蛋白脂酶及脂肪酸合成酶基因表達(dá)的研究

夏曉杰，鄔應(yīng)龍，馮 姣，曾麗萍，周 成

（四川農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，四川 雅安 625014）

齊口裂腹魚生長(zhǎng)、肌肉品質(zhì)和脂蛋白脂酶及脂肪酸合成酶基因表達(dá)的研究

夏曉杰，鄔應(yīng)龍*，馮 姣，曾麗萍，周 成

（四川農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，四川 雅安 625014）

目的：研究不同生長(zhǎng)階段齊口裂腹魚的生長(zhǎng)狀況、肌肉品質(zhì)和脂蛋白脂酶（lipoprotein lipase，LPL）及脂肪酸合成酶（fatty acid synthe tase，F(xiàn)AS）的基因表達(dá)。方法：分別選取齊口裂腹魚幼魚（137.8±1.7） g（S組）、亞成魚（312.4±11.8） g（M組）、成魚（500.9±31.4） g（L組），測(cè)定形體指標(biāo)、臟器指數(shù)和肌肉主要營(yíng)養(yǎng)成分含量，并采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)測(cè)定LPL及FAS的基因表達(dá)水平。結(jié)果：與S組相比，M組、L組肥滿度、肝體比、腸脂比、水分含量均有所降低（P＜0.05），粗蛋白、粗灰分含量變化不大；L組肌間脂肪（intermuscular fat，IMF）含量最低（P＜0.05）；而S組、M組與L組肝胰臟中LPL mRNA及FAS mRNA表 達(dá)水平均基本高于肌肉（P＜0.05），且L組肝胰臟中LPL mRNA及FAS mRNA表達(dá)水平均最低（P＜0.05），M組肌肉中LPL mRNA及FAS mRNA表達(dá)水平最高（P＜0.05）。結(jié)論：齊口裂腹魚的肌肉主要營(yíng)養(yǎng)成分含量在成魚階段有所降低，且IMF含量與LPL mRNA及FAS mRNA表達(dá)水平呈一定正相關(guān)。

齊口裂腹魚；生長(zhǎng)；品質(zhì)；脂蛋白脂酶；脂肪酸合成酶

齊口裂腹魚（Schizothorax prenanti Tchang）俗稱細(xì)甲魚、丙穴魚、雅魚，屬鯉形目、鯉科、裂腹魚亞科、裂腹魚屬，是長(zhǎng)江上游及其支流的一種亞冷水性底棲魚類，在天然情況下生活在水溫較低（7～10 ℃）、水流湍急、溶氧較高的山區(qū)河流中，主要以河底巖石附著固有藻類為食[1]。其肉肥質(zhì)嫩、味道鮮美，含有豐富的脂肪和氨基酸[2]，是產(chǎn)區(qū)的名貴魚類和優(yōu)質(zhì)魚種，具有重要的學(xué)術(shù)研究?jī)r(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。目前，對(duì)齊口裂腹魚脂質(zhì)代謝的研究主要集中在常規(guī)指標(biāo)分析方面[3]，對(duì)脂質(zhì)代謝相關(guān)基因調(diào)控及其機(jī)理尚缺乏深入研究。

動(dòng)物脂肪沉積的能力主要取決于組織中脂肪的合成與分解強(qiáng)度，還受制于甘油三酯和脂肪酸的轉(zhuǎn)運(yùn)速度。脂蛋白脂酶（lipoprotein lipase，LPL）是甘油三酯（triglyceride，TG）降解為甘油和游離脂肪酸（free fatty acid，F(xiàn)FA）反應(yīng)的限速酶，也是調(diào)節(jié)脂肪沉積和脂肪代謝的關(guān)鍵酶，它參與各種脂蛋白的代謝并對(duì)其進(jìn)行調(diào)控，使血漿中富含脂質(zhì)的脂蛋白降解。它還以載脂蛋白C-Ⅱ（apolipoprotein C-Ⅱ，ApoC-Ⅱ）為輔因子參與極低密度脂蛋白（very low density lipoprotein，VLDL）和高密度脂蛋白（high density lipoprotein，HDL）之間的載體蛋白和磷脂的轉(zhuǎn)換[4]。因此，脂蛋白脂酶與機(jī)體的脂質(zhì)代謝及肥胖與否密切相關(guān)。在不同魚類中，LPL的組織表達(dá)在轉(zhuǎn)錄水平上有一定的相似性，但也表現(xiàn)出一定差異，例如：真鯛[5]的LPL在脂肪組織、鰓、心臟、肝臟、肌肉等組織中均有表達(dá)，其中脂肪組織、鰓、心臟、性腺和卵巢中含量較高，肌肉和肝臟含量次之；金頭鯛[6]腸系脂肪組織LPL高出肝臟和骨骼肌幾倍；虹鱒[7]的LPL主要在肝臟中表達(dá)。脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，F(xiàn)AS）又稱脂肪酸合酶，是內(nèi)源性脂肪酸合成的關(guān)鍵酶，能夠催化乙酰輔酶A和丙二酸單酰輔酶A合成TG[8]。因此，脂肪酸合成酶蛋白的多寡、活性的高低對(duì)控制動(dòng)物體脂沉積具有重要意義。實(shí)驗(yàn)表明，F(xiàn)AS表達(dá)與動(dòng)物體脂水平呈正相關(guān)，可作為脂質(zhì)代謝候選基因[9-10]。但FAS基因mRNA和蛋白的表達(dá)水平是否與魚類體脂呈正相關(guān)，以及在魚類體脂沉積中的作用報(bào)道甚少。

本實(shí)驗(yàn)以齊口裂腹魚為對(duì)象，研究其生長(zhǎng)性能、肌肉品質(zhì)，并通過實(shí)時(shí)定量熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（real-time polymerase chain reaction，real-time PCR）檢測(cè)魚體組織中LPL和FAS基因mRNA的相對(duì)表達(dá)量，旨在結(jié)合分子水平進(jìn)一步探討齊口裂腹魚脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)機(jī)制，以促進(jìn)魚類健康生長(zhǎng)，提高魚肉品質(zhì)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

齊口裂腹魚購(gòu)買于四川雅安天全雅魚場(chǎng)，隨機(jī)選取處于3 個(gè)不同生長(zhǎng)階段（幼魚S組、亞成魚M組、成魚L組）健壯無(wú)傷的齊口裂腹魚各36 尾，每組3 個(gè)重復(fù)，體質(zhì)量分別為（137.8±1.7） g、（312.4±11.8） g、（500.9±31.4） g，體長(zhǎng)分別為（18.8±1.1） cm、（25.7±1.0） cm、（31.2±1.5） cm，暫養(yǎng)1 d，未投喂。

RNAiso Plus、PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser（Perfect Real Time）、DEPC水、SYBR Premix Ex TaqTMⅡ（Tli RnaseH Plus） 日本TaKaRa公司；其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

超凈工作臺(tái) 蘇州凈化公司；普通PCR儀、實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀、凝膠成像系統(tǒng) 美國(guó)Bio-Rad公司；水平電泳槽 北京六一儀器廠；紫外分光光度計(jì)、微量移液槍 德國(guó)Eppendorf公司；高速冷凍離心機(jī)、超低溫冰箱 美國(guó)Thermo公司。

1.3 方法

1.3.1 魚體生長(zhǎng)基礎(chǔ)指標(biāo)測(cè)定

在實(shí)驗(yàn)室測(cè)定齊口裂腹魚的體長(zhǎng)、體高、體質(zhì)量，解剖后稱取肝胰臟和腸系脂肪質(zhì)量，并根據(jù)公式（1）～（3）計(jì)算生長(zhǎng)性能指標(biāo)。

1.3.2 采樣

稱魚體質(zhì)量后解剖魚體，分別迅速取出肝胰臟、肌肉（第1根背鰭至最后1根背鰭之間，側(cè)線以上及以下白?。徊糠謽悠费杆儆谝旱欣鋬?，再轉(zhuǎn)入－80 ℃條件下保存用以提取RNA，另一部分置于－20 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.3 魚肉基本成分測(cè)定

參照GB/T 5009.6—2003《食品中脂肪的測(cè)定》采用索氏抽提法測(cè)定粗脂肪和肌間脂肪含量；參照GB 5009.5—2010《食品中蛋白質(zhì)的測(cè)定》采用凱氏定氮法測(cè)定粗蛋白質(zhì)含量；參照GB 5009.4—2010《食品中灰分的測(cè)定》采用馬弗爐灼燒法測(cè)定粗灰分含量；參照GB 5009.3—2010《食品中水分的測(cè)定》采用直接干燥法測(cè)定水分含量。

1.3.4 LPL、FAS基因表達(dá)水平分析

1.3.4.1 引物設(shè)計(jì)

根據(jù)GenBank中已有的齊口裂腹魚（Schizothorax prenanti）LPL、FAS和β-actin（JQ013000）基因的序列，利用Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)引物，用以檢測(cè)LPL、FAS基因mRNA在魚體組織中的相對(duì)表達(dá)量，引物由華大基因有限公司合成。內(nèi)參基因?yàn)辇R口裂腹魚β-actin基因，引物設(shè)計(jì)見表1。

表1 1 β-actinactin、LPLLPL及FASFAS基因引物設(shè)計(jì)Table 1 Primer sequences and annealing temperatures

1.3.4.2 總RNA提取與cDNA合成

總RNA提取與純化按試劑盒（TaKaRa）方法進(jìn)行，10 g/L瓊脂糖凝膠電泳分析其完整性，紫外分光光度計(jì)測(cè)OD260nm、OD260nm/280nm值（1.8～2.0）。

cDNA合成按PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser（TaKaRa）試劑盒方法進(jìn)行，反應(yīng)產(chǎn)物置于－20 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。用齊口裂腹魚內(nèi)參基因β-肌動(dòng)蛋白（β-actin）進(jìn)行普通PCR擴(kuò)增，檢測(cè)cDNA的存在，擴(kuò)增產(chǎn)物用15 g/L瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。

1.3.4.3 Real time-PCR檢測(cè)魚體組織LPL和FAS基因mRNA的相對(duì)表達(dá)量

按以下順序加樣至八連板（總體系10 μL）：SYBR Premix Ex TaqTMⅡ 5 μL，DEPC水3.5 μL，上下游引物各0.25 μL，cDNA 1 μL。PCR反應(yīng)條件：95 ℃ 3 min；95 ℃ 10 s，55.8 ℃（β-actin）/56.0 ℃（LPL）/56.0 ℃（FAS）30 s，39 個(gè)循環(huán)；95 ℃ 10 s；降溫至65 ℃；以2.5 ℃/s升溫至95 ℃。為檢驗(yàn)反應(yīng)的特異性，擴(kuò)增產(chǎn)物用15 g/L的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。以齊口裂腹魚β-actin為內(nèi)參基因，應(yīng)用2－ΔCt法[11]確定不同樣品mRNA的相對(duì)表達(dá)量。相對(duì)表達(dá)量=2－ΔCt，其中：ΔCt=Ct受檢基因－Ctβ-actin。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行單因素方差分析（One-Way ANOVA），多重比較采用Duncan’s法。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用表示，P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 齊口裂腹魚生長(zhǎng)基礎(chǔ)指標(biāo)分析

表2 齊口裂腹魚形體指標(biāo)及內(nèi)臟指數(shù) (x ±s, , n = 8)Table 2 Body size indexes and visceral indexes of Schizothorax prenanti Tchang (x ±s, , n = 8)

由表2可知，與S組相比，M組體長(zhǎng)/體高有所上升（P＞0.05），L組體長(zhǎng)/體高顯著升高（P＜0.05），M組與L組之間差異不顯著（P＞0.05）；M組、L組肥滿度、肝體比均呈下降趨勢(shì)（P＜0.05），M組與L組之間均差異不顯著（P＞0.05）；M組、L組腸脂比顯著降低（P＜0.05），M組與L組之間差異顯著（P＜0.05）。

2.2 齊口裂腹魚背肌和腹肌基本組分分析

表3 齊口裂腹魚背肌和腹肌基本組分含量 (x ±s, , n = 8)Table 3 Basic composition of back muscle and abdominal muscle of Schizothorax prenanti Tchang (x ±s, , n = 8) g/100 g

由表3可知，與S組相比，齊口裂腹魚背肌M組粗脂肪含量顯著升高（P＜0.05），L組粗脂肪含量呈下降趨勢(shì)（P＞0.05），M組與L組之間差異顯著（P＜0.05）；各組之間粗蛋白質(zhì)含量差異不顯著（P＞0.05）；與S組相比，M組粗灰分含量顯著降低（P＜0.05），L組粗灰分含量呈下降趨勢(shì)（P＞0.05），M組與L組之間差異顯著（P＜0.05）；M組水分含量顯著降低（P＜0.05），L組水分含量有所降低（P＞0.05），M組與L組之間差異不顯著（P＞0.05）。與S組相比，齊口裂腹魚腹肌M組粗脂肪、粗蛋白質(zhì)、粗灰分、水分含量均無(wú)顯著差異（P＞0.05），L組粗脂肪、粗蛋白質(zhì)、粗灰分含量均呈下降趨勢(shì)（P＜0.05），M組與L組之間均差異顯著（P＜0.05）；各組之間水分含量差異均不顯著（P＞0.05）。

2.3 齊口裂腹魚肌間脂肪（intermuscular fat，IMF）含量

圖1 齊口裂腹魚不同生長(zhǎng)階段的肌間脂肪含量Fig.1 Intramuscular fat contents of Schizothorax prenanti Tchang at different growth stages

如圖1所示，與S組相比，M組的IMF含量有升高趨勢(shì)，但無(wú)顯著差異（P＞0.05），L組的IMF含量顯著降低（P＜0.05）。結(jié)果表明齊口裂腹魚生長(zhǎng)過程中體內(nèi)IMF含量呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，從幼魚生長(zhǎng)到亞成魚IMF含量有一定增加，而從亞成魚生長(zhǎng)到成魚IMF含量又顯著下降。這可能與魚類不同生長(zhǎng)階段對(duì)能量需求不同有關(guān)。

2.4 齊口裂腹魚LPL和FAS基因mRNA表達(dá)水平

2.4.1 齊口裂腹魚LPL mRNA表達(dá)水平

圖 2齊口裂腹魚肝胰臟及肌肉中LPL mRNA表達(dá)水平Fig.2 LPL gene expression levels in liver and muscle of Schizothorax prenanti Tchang

如圖2所示，齊口裂腹魚肝胰臟中的LPL mRNA相對(duì)表達(dá)量高于肌肉。與S組相比，M組肌肉和肝胰臟中LPL mRNA表達(dá)水平均顯著升高（P＜0.05）。與S組相比，L組肌肉中LPL mRNA表達(dá)水平顯著降低（P＜0.05），肝胰臟中LPL mRNA表達(dá)水平有下降趨勢(shì)，但差異并不顯著（P＞0.05）。L組肌肉和肝胰臟中LPL mRNA表達(dá)水平與M組相比均差異顯著（P＜0.05）。結(jié)果表明齊口裂腹魚生長(zhǎng)過程中肌肉LPL mRNA表達(dá)水平低于肝胰臟，且兩者均呈現(xiàn)先升高后顯著降低的趨勢(shì)，從幼魚到亞成魚，肌肉和肝胰臟LPL mRNA表達(dá)均升高，尤其是肝胰臟，而到成魚階段肌肉和肝胰臟LPL mRNA表達(dá)水平均顯著降低。

2.4.2 齊口裂腹魚FAS mRNA表達(dá)水平

圖3 齊口裂腹魚肝胰臟及肌肉中FAS mRNA表達(dá)水平Fig.3 FAS gene expression levels in liver and muscle of Schizothorax prenanti Tchang

如圖3所示，齊口裂腹魚肝胰臟中FAS mRNA相對(duì)表達(dá)水平高于肌肉。與S組相比，M組肌肉中FAS mRNA表達(dá)水平顯著升高（P＜0.05），肝胰臟中FAS mRNA表達(dá)水平升高，但差異并不顯著（P＞0.05）。與S組相比，L組肌肉中FAS mRNA表達(dá)水平顯著升高（P＜0.05），而肝胰臟中FAS mRNA表達(dá)水平顯著降低（P＜0.05）。L組肌肉和肝胰臟中FAS mRNA表達(dá)水平與M組相比均差異顯著（P＜0.05）。結(jié)果表明齊口裂腹魚生長(zhǎng)過程中肝胰臟FAS mRNA表達(dá)水平基本高于肌肉，且兩者均呈現(xiàn)增加后降低趨勢(shì)，從幼魚到亞成魚，肌肉和肝胰臟FAS mRNA表達(dá)水平均有一定增加，尤其是肌肉，而到成魚階段肌肉和肝胰臟FAS mRNA表達(dá)水平均顯著降低。

3 討 論

魚類主要富含營(yíng)養(yǎng)成分的部位是肌肉，魚類肌肉含有豐富的蛋白質(zhì)、脂肪酸及微量礦物質(zhì)[12]，它們的種類和含量是魚肉營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的體現(xiàn)，對(duì)魚肉品質(zhì)的建立與評(píng)價(jià)具有重要意義。魚類肌肉營(yíng)養(yǎng)成分的含量與其生長(zhǎng)期、生存環(huán)境、餌料成分都有著密切的關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)中，齊口裂腹魚肌肉中水分含量最高，蛋白質(zhì)、粗脂肪含量次之，粗灰分含量最少；肥滿度、肝體比、腸脂比、水分含量為L(zhǎng)組最低；粗脂肪含量同樣為L(zhǎng)組最低，與肥滿度、腸脂比等指標(biāo)測(cè)定結(jié)果相符；粗灰分和粗蛋白質(zhì)含量有微小變化，但無(wú)規(guī)律性，與周興華等[2]研究結(jié)果一致。在相同生存環(huán)境下，可能由于魚類在不同生長(zhǎng)階段魚體自身對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)需求不同[13]，在幼魚及部分亞成魚階段魚類新陳代謝旺盛、生長(zhǎng)快、處于氮正平衡狀態(tài)、蛋白轉(zhuǎn)換率高，而亞成魚階段脂肪及部分蛋白質(zhì)則開始貯存在體內(nèi)，供機(jī)體利用；在達(dá)到成魚階段主要能量用于性腺的發(fā)育，以致魚體脂肪含量有所下降。陳靜等[14]對(duì)體質(zhì)量50、150、300、600 g的匙吻鱘進(jìn)行了肌肉成分分析，證明隨著體質(zhì)量增加，魚體水分含量依次有所降低，粗蛋白質(zhì)和粗脂肪含量依次升高；施培松[15]對(duì)鳙魚進(jìn)行研究得出，鳙魚肌肉蛋白質(zhì)含量為亞成魚＞幼魚＞稚魚，而粗脂肪含量則為幼魚＞稚魚＞亞成魚。這可能與魚類對(duì)食物的消化能力、營(yíng)養(yǎng)成分積累能力及相關(guān)蛋白代謝基因、脂質(zhì)代謝基因的表達(dá)不同有關(guān)。Fortin等[16]認(rèn)為，肌肉脂肪含量在2%～3%時(shí)適合食用，本實(shí)驗(yàn)S組與M組含量在此范圍內(nèi)。

魚類對(duì)脂肪的利用過程主要包括：脂肪的合成、脂肪的分解與轉(zhuǎn)運(yùn)。脂肪的合成是在一系列的脂肪合成酶的作用下進(jìn)行的；在脂肪的分解與轉(zhuǎn)運(yùn)過程中，魚體中的脂肪通過脂蛋白從腸道轉(zhuǎn)運(yùn)到體內(nèi)各處，在一系列酶及輔助因子的參與下，分解并釋放出脂肪酸。在上述過程中，脂肪酸合成酶是脂肪合成的關(guān)鍵酶，當(dāng)FAS酶活力高時(shí)，丙二醛CoA源源不斷地被催化成脂肪酸，魚體內(nèi)多余的脂肪酸能夠通過酯化作用形成脂肪，增加脂肪在體內(nèi)的沉積[17]；脂蛋白酯酶是脂肪分解與轉(zhuǎn)運(yùn)的關(guān)鍵酶，它通常以同源二聚體的形式發(fā)揮甘油三酯水解酶和在受體介導(dǎo)的脂蛋白攝入時(shí)作為配體或橋接因子的雙重功能[18]。魚類LPL轉(zhuǎn)錄水平上具有組織特異性，如吉紅等[19]對(duì)草魚LPL mRNA表達(dá)水平的研究表明，脂肪組織、心臟中LPL mRNA表達(dá)量最高，其次是肝胰臟、肌肉、鰓；奧斯卡[20]對(duì)鯉魚LPL mRNA表達(dá)水平研究表明，肝組織＞腦組織＞肌肉。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：齊口裂腹魚肝胰臟LPL mRNA表達(dá)量高于肌肉，與丁雪芬[21]對(duì)鱖魚、Li Xiangfei等[22]對(duì)武昌魚的研究結(jié)果一致；且肝胰臟及肌肉LPL mRNA表達(dá)量為亞成魚＞幼魚＞成魚，與Saera-Vila等[6]對(duì)金頭鯛的研究結(jié)果相似。這可能與機(jī)體成熟及肌肉生長(zhǎng)強(qiáng)度有關(guān)，齊口裂腹魚在幼魚、亞成魚階段處于生長(zhǎng)旺盛時(shí)期，肌肉生長(zhǎng)強(qiáng)烈，等達(dá)到成魚階段，生長(zhǎng)減緩，脂肪酸氧化供能代謝需求降低，同時(shí)受激素影響，肝胰臟、肌肉LPL mRNA的表達(dá)水平下調(diào)[23]。劉茜[24]研究發(fā)現(xiàn)，草魚LPL在肌肉中的表達(dá)量稍高于肝臟，這可能是由于齊口裂腹魚和草魚的脂肪蓄積模式不同，也可能與研究條件不同有關(guān)。大量研究還表明，LPL表達(dá)還受水溫、季節(jié)、營(yíng)養(yǎng)水平等的影響，其具體分子機(jī)制還待進(jìn)一步探究。

Semenkovich[25]研究表明，機(jī)體組織中FAS表達(dá)水平的升高會(huì)顯著增加甘油三酯在體內(nèi)的沉積，從而導(dǎo)致肥胖。目前，關(guān)于動(dòng)物不同生長(zhǎng)階段FAS mRNA表達(dá)的研究主要集中在豬。單體中等[26-27]研究28 周齡前及90 kg以下的豬腹部組織FAS mRNA表達(dá)水平，結(jié)果表明豬在一定生長(zhǎng)階段，腹部組織中FAS mRNA表達(dá)水平與日齡呈正相關(guān)。韓光明[28]對(duì)吉富羅非魚的研究表明，肝臟是魚類合成脂肪酸的主要場(chǎng)所[29]，也是魚類隨營(yíng)養(yǎng)狀況而改變脂肪蓄積的主要調(diào)節(jié)性儲(chǔ)脂器官[30]，肝臟FAS mRNA表達(dá)水平略高于肌肉。覃川杰[31]對(duì)瓦氏黃顙魚的研究發(fā)現(xiàn)，肝臟FAS mRNA表達(dá)水平高于肌肉。本實(shí)驗(yàn)研究表明：齊口裂腹魚肝胰臟FAS mRNA表達(dá)量高于肌肉；且肝胰臟FAS mRNA為M組表達(dá)量最高，S、L組次之；肌肉FAS基因mRNA的表達(dá)為M組顯著高于S、L組，與IMF的趨勢(shì)一致。這可能是由于齊口裂腹魚在幼魚階段外源性脂肪酸足夠魚體生長(zhǎng)，F(xiàn)AS mRNA表達(dá)量較低，而在亞成魚階段，體內(nèi)需要合成大量的脂肪酸來(lái)參與脂肪的合成與沉積，從而導(dǎo)致FAS mRNA表達(dá)量升高，到成魚階段性腺發(fā)育，F(xiàn)AS mRNA表達(dá)被抑制，降低了肝胰臟及肌肉中脂肪酸沉積。

肌間脂肪的沉積主要是肌肉內(nèi)脂肪細(xì)胞對(duì)甘油三酯的合成與分解能力的綜合體現(xiàn)，而參與脂肪合成和分解的脂肪代謝酶有多種，其對(duì)脂肪沉積的調(diào)控機(jī)制也十分復(fù)雜。王剛等[18]對(duì)豬肌肉組織LPL基因表達(dá)的發(fā)育性變化及其與肌間脂肪沉積關(guān)系的研究發(fā)現(xiàn)，肌肉組織中LPL基因的表達(dá)對(duì)于IMF的沉積有積極的影響，而楊海玲等[32]研究表明，豬肌間脂肪沉積主要是脂肪酸合成酶活性較高所致，與脂肪分解酶關(guān)系不大。由此可見，脂蛋白酯酶和脂肪酸合成酶基因表達(dá)共同影響IMF沉積。本研究表明肌間脂肪含量為M組最高，S、L組次之，與LPL mRNA及FAS mRNA表達(dá)水平呈一定正相關(guān)，而IMF決定魚肉品質(zhì)的高低，因此，研究魚類脂質(zhì)代謝相關(guān)基因表達(dá)的差異，可以從分子生物水平控制魚類體脂沉積，為提高魚肉品質(zhì)、優(yōu)化魚種提供理論依據(jù)。

[1] 蘇傳福. 齊口裂腹魚的營(yíng)養(yǎng)需要[J]. 天津水產(chǎn), 2007(增刊1): 25-29.

[2] 周興華, 鄭曙明, 吳青, 等. 齊口裂腹魚肌肉營(yíng)養(yǎng)成分的分析[J]. 大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報(bào), 2005, 20(1): 20-24.

[3] 向梟, 陳建, 周興華, 等. 5種脂肪源對(duì)齊口裂腹魚生長(zhǎng)性能及血清生化指標(biāo)的影響[J]. 動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào), 2010, 22(2): 498-504.

[4] MEAD J R, IRVINE S A, RAMJI D P. Lipoprotein lipase: structure, function, regulation, and role in disease[J]. Journal of Molecular Medicine, 2002, 80(12): 753-769.

[5] OKU H, KOIZUMI N, OKUMURA T, et al. Molecular characterization of lipoprotein lipase, hepatic lipase and pancreatic lipase genes: effects of fasting and refeeding on their gene expression in red sea bream Pagrus major[J]. Comparative Biochemistry and Physiology Part B: Biochemistry and Molecular Biology, 2006, 145(2): 168-178.

[6] SAERA-VILA A, CALDUCH-GINER J A, GóMEZ-REQUENI P, et al. Molecular characterization of gilthead sea bream (Sparus aurata) lipoprotein lipase. Transcriptional regulation by season and nutritional condition in skeletal muscle and fat storage tissues[J]. Comparative Biochemistry and Physiology Part B: Biochemistry and Molecular Biology, 2005, 142(2): 224-232.

[7] ALBALAT A, SáNCHEZ-GURMACHES J, GUTIéRREZ J, et al. Regulation of lipoprotein lipase activity in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) tissues[J]. General and Comparative Endocrinology, 2006, 146(3): 226-235.

[8] CHIRALA S S, WAKIL S J. Structure and function of animal fatty acid synthase[J]. Lipids, 2004, 39(11): 1045-1053.

[9] ZHENG Jialang, LUO Zhi, ZHU Qingling, et al. Molecular cloning and expression pattern of 11 genes involved in lipid metabolism in yellow catfi sh Pelteobagrus fulvidraco[J]. Gene, 2013, 531(1): 53-63.

[10] TIAN Juan, WEN Hua, ZENG Lingbing, et al. Changes in the activities and mRNA expression levels of lipoprotein lipase (LPL), hormone-sensitive lipase (HSL) and fatty acid synthetase (FAS) of Nile tilapia (Oreochromis niloticus) during fasting and re-feeding[J]. Aquaculture, 2013, 400: 29-35.

[11] LIVAK K J, SCHMITTGEN T D. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2－ΔΔCTmethod[J]. Methods, 2001, 25(4): 402-408.

[12] ZHAO Feng, ZHUANG Ping, SONG Chao, et al. Amino acid and fatty acid compositions and nutritional quality of muscle in the pomfret, Pampus punctatissimus[J]. Food Chemistry, 2010, 118(2): 224-227.

[13] 尹洪濱, 孫中武, 孫大江, 等. 6種養(yǎng)殖鱘鰉魚肌肉營(yíng)養(yǎng)成分的比較分析[J]. 大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報(bào), 2004, 19(2): 92-96.

[14] 陳靜, 梁銀銓, 黃道明, 等. 不同生長(zhǎng)階段匙吻鱘肌肉成分的研究[J].水生態(tài)學(xué)雜志, 2008, 1(1): 65-68.

[15] 施培松. 匙吻鱘和鳙的生長(zhǎng)、肌肉品質(zhì)比較及FAS基因克隆與表達(dá)[D].武漢: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué), 2013.

[16] FORTIN A, ROBERTSON W M, TONG A K W. The eating quality of Canadian pork and its relationship with intramuscular fat[J]. Meat Science, 2005, 69(2): 297-305.

[17] SMITH S, WITKOWSKI A, JOSHI A K. Structural and functional organization of the animal fatty acid synthase[J]. Progress in Lipid Research, 2003, 42(4): 289-317.

[18] 王剛, 曾勇慶, 武英, 等. 豬肌肉組織LPL基因表達(dá)的發(fā)育性變化及其與肌內(nèi)脂肪沉積關(guān)系的研究[J]. 畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào), 2007, 38(3): 253-257.

[19] 吉紅, 蘇尚順, 劉茜, 等. 草魚LPL基因的表達(dá)及饑餓和再投喂對(duì)其影響[J]. 水產(chǎn)學(xué)報(bào), 2009, 33(6): 981-986.

[20] 奧斯卡. 日糧脂肪對(duì)鯉魚脂蛋白脂酶和脂肪酸合成酶基因表達(dá)的影響[D]. 重慶: 西南大學(xué), 2012.

[21] 丁雪芬. 魚類脂蛋白脂酶(LPL)和肝脂酶(HL)基因及其分子進(jìn)化研究[D]. 廣州: 暨南大學(xué), 2007.

[22] LI Xiangfei, JIANG Guangzhen, QIAN Yu, et al. Molecular characterization of lipoprotein lipase from blunt snout bream Megalobrama amblycephala and the regulation of its activity and expression by dietary lipid levels[J]. Aquaculture, 2013, 416: 23-32.

[23] JOSé IBá?EZ A, PEINADO-ONSURBE J, SáNCHEZ E, et al. Lipoprotein lipase (LPL) is highly expressed and active in the ovary of European sea bass (Dicentrarchus labrax L.), during gonadal development[J]. Comparative Biochemistry and Physiology Part A: Molecular & Integrative Physiology, 2008, 150(3): 347-354.

[24] 劉茜. 草魚LPL基因克隆及草魚脂肪細(xì)胞提取與培養(yǎng)的研究[D]. 楊凌: 西北農(nóng)林科技大學(xué), 2007.

[25] SEMENKOVICH C F. Regulation of fatty acid synthase (FAS)[J]. Progress in Lipid Research, 1997, 36(1): 43-53.

[26] 單體中, 汪以真, 劉建新, 等. 不同日齡豬腹脂中脂肪酸合成酶(FAS)基因表達(dá)規(guī)律的研究[J]. 畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào), 2006, 37(7): 662-666.

[27] 單體中, 汪以真. 豬不同生長(zhǎng)階段脂肪酸合成酶基因的表達(dá)差異[J].農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào), 2006, 14(2): 293-294.

[28] 韓光明. 飼料脂肪水平對(duì)吉富羅非魚生長(zhǎng)、體脂沉積、脂肪酸組成及脂肪酸合成酶的影響[D]. 南京: 南京農(nóng)業(yè)大學(xué), 2009.

[29] LIKIMANI T A, WILSON R P. Effects of diet on lipogenic enzyme activities in channel catfi sh hepatic and adipose tissue[J]. The Journal of Nutrition, 1982, 112(1): 112-117.

[30] LIANG X F, OGATA H Y, OKU H. Effect of dietary fatty acids on lipoprotein lipase gene expression in the liver and visceral adipose tissue of fed and starved red sea bream Pagrus major[J]. Comparative Biochemistry and Physiology Part A: Molecular & Integrative Physiology, 2002, 132(4): 913-919.

[31] 覃川杰. 瓦氏黃顙魚(Pelteobagrus vachelli)脂肪代謝相關(guān)基因cDNA的克隆及表達(dá)分析[D]. 上海: 華東師范大學(xué), 2010.

[32] 楊海玲, 曾勇慶, 魏述東, 等. 萊蕪豬脂肪代謝酶活性的發(fā)育性變化及其對(duì)肌內(nèi)脂肪沉積的影響[J]. 畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào), 2005, 36(11): 1150-1154.

Growth, Muscle Quality and Gene Expression of Lipoprotein Lipase and Fatty Acid Synthase of Schizothorax prenanti Tchang

XIA Xiaojie, WU Yinglong*, FENG Jiao, ZENG Liping, ZHOU Cheng
(College of Food Science, Sichuan Agricultural University, Ya’an 625014, China)

Objective: To investigate the growth, muscle quality and gene expression of lipoprotein lipase (LPL) and fatty acid synthase (FAS) of Schizothorax p renanti Tchang (SPT) at different growth stages. Methods: SPT with body weights of (137.8 ± 1.7) g (small, juvenile), (312.4 ± 11.8) g (medium, subadult) and (500.9 ± 31.4) g (large, adult) were collected, respectively. Their body condition indexes, visceral indexes and major muscle nutrients were determined. Meanwhile, LPL and FAS mRNA levels in liver and muscle of SPT at the juvenile, subadult and adult growth periods were evaluated by realtime PCR. Results: Compared with the small group, boby condition indexes, hepatopancreas index (HIS), mesenteric lipid index and water content were reduced in the medium group and large group (P < 0.05). The contents of crude protein and crude ash showed no signifi cant change in muscle. The intermuscular fat was the least abundant in the large group (P < 0.05). The LPL and FAS mRNA expression levels in liver for the small group, medium and large group were signifi cantly higher than in muscle (P < 0.05). The LPL mRNA and FAS mRNA expression levels in liver were the lowest in the large group (P < 0.05). The LPL mRNA and FAS mRNA expression levels in muscle were the highest in the medium group (P < 0.05). Conclusion: The essential nutrients in muscle are reduced at the adult stage, and the content of intramusclar fat is correlated with the expression of LPL mRNA and FAS mRNA.

Schizothorax prenanti Tchang; growth; quality; lipoprotein lipase; fatty acid synthase

TS241.1

A

1002-6630（2015）01-0164-06

10.7506/spkx1002-6630-201501031

2014-03-12

四川農(nóng)業(yè)大學(xué)“211”工程雙支計(jì)劃項(xiàng)目（2013）

夏曉杰（1988—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)楣δ苄允称贰-mail：472269396@qq.com

*通信作者：鄔應(yīng)龍（1963—），男，教授，博士，研究方向?yàn)楣δ苄允称?。E-mail：wuyinglong99@163.com