經(jīng)導(dǎo)管建立兔急性腎動(dòng)脈血栓栓塞模型

沈長(zhǎng)銀，彭虹，石蓓，劉漢林，劉志江，趙然尊，許官學(xué)

（遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院心內(nèi)科，貴州 遵義 563003）

經(jīng)導(dǎo)管建立兔急性腎動(dòng)脈血栓栓塞模型

沈長(zhǎng)銀，彭虹，石蓓，劉漢林，劉志江，趙然尊，許官學(xué)

（遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院心內(nèi)科，貴州 遵義 563003）

目的探討導(dǎo)管法建立兔急性腎動(dòng)脈血栓栓塞模型的可行性，為研究急性腎動(dòng)脈血栓栓塞及急性腎功能衰竭提供可靠實(shí)驗(yàn)室方法學(xué)。方法新西蘭大白兔20只，隨機(jī)分為栓塞組及對(duì)照組，每組10只。栓塞組經(jīng)股動(dòng)脈置管，自制血栓經(jīng)導(dǎo)管行選擇性兔腎動(dòng)脈栓塞，記錄栓塞前后主動(dòng)脈壓力變化情況，分別于術(shù)前，術(shù)后1、2及10 h抽血化驗(yàn)?zāi)I功能，然后切取兔腎臟后處死動(dòng)物，標(biāo)本行病理學(xué)檢查；對(duì)照組只行股動(dòng)脈置管，不行血栓栓塞，分別在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)行腎功能及病理學(xué)檢查。結(jié)果栓塞組8只兔成功行單側(cè)腎動(dòng)脈栓塞，2只置管失敗，腎動(dòng)脈造影結(jié)果提示手術(shù)即刻腎動(dòng)脈栓塞成功，主動(dòng)脈壓力在栓塞成功后比栓塞前升高（P＜0.05）。栓塞術(shù)后2 h兔腎功能肌酐及尿素氮升高，術(shù)后10 h升高明顯并同時(shí)有乳酸脫氫酶升高，對(duì)照組腎功能及乳酸脫氫酶無明顯變化（P＜0.05）。栓塞組在栓塞后10 h腎臟病理學(xué)證實(shí)血栓栓塞組腎臟可見腎皮質(zhì)梗死約占腎皮質(zhì)70%～90%，梗死灶周圍腎臟組織充血、出血伴中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。對(duì)照組無腎梗死，僅見腎臟稍充血，腎小管輕微水腫（P＜0.05）。結(jié)論經(jīng)導(dǎo)管建立兔急性腎動(dòng)脈血栓栓塞模型成功率高，栓塞術(shù)后腎功能及病理學(xué)變化符合臨床急性腎動(dòng)脈血栓變化過程，此方法簡(jiǎn)單易行，可控制性好，能為急性腎動(dòng)脈栓塞臨床治療及藥物干預(yù)研究提供可靠動(dòng)物模型。

腎動(dòng)脈造影；兔；急性腎功能衰竭；腎動(dòng)脈栓塞

本課題組曾在進(jìn)行兔急性心肌梗死無復(fù)流的實(shí)驗(yàn)研究中[1-2]，經(jīng)導(dǎo)管進(jìn)行兔腎動(dòng)脈造影，發(fā)現(xiàn)可以使用人5 F右冠狀動(dòng)脈指引導(dǎo)管行兔腎動(dòng)脈造影并行選擇性腎動(dòng)脈血栓栓塞，方法簡(jiǎn)單易行，可控性好，能提供可靠的符合臨床過程的急性腎動(dòng)脈血栓栓塞動(dòng)物模型，為研究急性腎動(dòng)脈栓塞、急性腎功能不全以及相應(yīng)藥物干預(yù)提供可靠的實(shí)驗(yàn)室方法學(xué)。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及材料

健康雄性新西蘭大白兔20只。體重2.5～3.5 kg，由遵義醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，隨機(jī)分為栓塞組10只及對(duì)照組10只。西門子公司Artis Zee Ceiling DSA機(jī)，美國(guó)麥瑞通公司Merit(R)Manifold三接頭高壓注射器，Cordis公司6 F橈動(dòng)脈鞘管，雅培公司BMW導(dǎo)絲，TERUMO公司runthrough導(dǎo)絲及超滑導(dǎo)絲，美敦力5 F右3.5指引導(dǎo)管，凝血酶，25%烏拉坦，碘海醇造影劑及肝素等。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1麻醉及兔股動(dòng)脈置管25%烏拉坦按1 g/kg耳緣靜脈麻醉，全麻后后背固定于手術(shù)臺(tái)，右側(cè)腹股溝區(qū)局部備皮、消毒和鋪巾，切開皮膚，依次分離皮膚、筋膜及肌肉組織，鈍性分離股動(dòng)脈鞘，暴露股動(dòng)脈、股靜脈和股神經(jīng)。動(dòng)脈兩端予以橡皮筋拉緊阻斷血流，采用兒科頭皮穿刺針直視下穿刺，穿入動(dòng)脈血管后，調(diào)整穿刺針方向，沿穿刺針內(nèi)推入runthrough導(dǎo)絲至腹主動(dòng)脈，沿runthrough導(dǎo)絲緩慢置入經(jīng)石蠟油潤(rùn)滑涂過的Cordis公司6 F橈動(dòng)脈鞘管，鞘管內(nèi)肝素鹽水抗凝。

1.2.2栓塞血栓制作經(jīng)兔股動(dòng)脈鞘管抽動(dòng)脈血10 ml，加入凝血酶20 u混勻，37℃冰箱敷育2 h，見大塊血栓形成，然后用手術(shù)刀片把血栓細(xì)分為約2～3 mm×2～3 mm大小血栓,血栓大小適于通過5 F導(dǎo)管即可。

1.2.3兔腎動(dòng)脈造影充分肝素化后，X線透視并在超滑導(dǎo)絲導(dǎo)引下，經(jīng)6 F橈動(dòng)脈鞘管送入人冠狀動(dòng)脈5 F右指引導(dǎo)管至兔降主動(dòng)脈，退出超滑導(dǎo)絲，排氣，調(diào)整指引導(dǎo)管頭端，高壓手推造影劑行雙側(cè)腎動(dòng)脈造影，記錄相應(yīng)造影圖片，觀察腎動(dòng)脈走行，同時(shí)記錄主動(dòng)脈壓力變化情況（表1）。

1.2.4兔腎動(dòng)脈血栓栓塞建立過程造影后定位腎動(dòng)脈開口，稍調(diào)節(jié)指引導(dǎo)管頭端，讓指引導(dǎo)管對(duì)準(zhǔn)腎動(dòng)脈開口，把BMW導(dǎo)絲頭端塑性，導(dǎo)絲沿指引導(dǎo)管緩慢通過腎動(dòng)脈至腎動(dòng)脈遠(yuǎn)端分支，沿導(dǎo)絲緩慢推送指引導(dǎo)管使其進(jìn)入腎動(dòng)脈內(nèi)，5 ml注射器輕輕吸取自制血栓1枚，緩慢輕輕注入三接頭高壓注射器內(nèi)，然后予以注射器緩慢推造影劑，使血栓緩慢注入腎動(dòng)脈內(nèi)，栓塞成功后行腎動(dòng)脈造影，觀察記錄腎動(dòng)脈血流變化情況，腎動(dòng)脈造影見腎動(dòng)脈內(nèi)血栓影，并出現(xiàn)遠(yuǎn)端腎動(dòng)脈不顯影為栓塞模型成功。

1.2.5腎功能檢查分別于術(shù)前，術(shù)后1、2及10 h經(jīng)動(dòng)脈鞘管抽血5 ml行腎功能檢查（表2），每次抽血后肝素鹽水封管以防動(dòng)脈鞘內(nèi)血液凝固。

1.2.6病理學(xué)檢查10 h后開腹取相應(yīng)雙腎標(biāo)本后處死動(dòng)物，腎臟標(biāo)本用10%福爾馬林固定后行病理學(xué)檢查。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

利用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩兩比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1腎動(dòng)脈造影及腎動(dòng)脈栓塞

模型組8只兔均成功行雙側(cè)腎動(dòng)脈造影及單側(cè)腎動(dòng)脈血栓栓塞，2只兔股動(dòng)脈置管失敗。對(duì)照組2只兔股動(dòng)脈置管失敗，1只麻醉死亡。置管失敗原因?yàn)? F股動(dòng)脈鞘管撕裂股動(dòng)脈。見圖1、2。

2.2栓塞前后兔主動(dòng)脈壓力變化

與栓塞前比較，栓塞后兔主動(dòng)脈收縮壓和舒張壓均明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

2.3栓塞前后兔腎功能變化情況

栓塞術(shù)后2 h兔腎功能肌酐及尿素氮升高，術(shù)后10 h升高明顯并同時(shí)有乳酸脫氫酶升高，對(duì)照組腎功能及乳酸脫氫酶無明顯變化（P＜0.05）。見表2。

圖1 兔右腎動(dòng)脈栓塞術(shù)

圖2 兔左腎動(dòng)脈栓塞術(shù)

2.4病理結(jié)果

2.4.1腎臟標(biāo)本大體肉眼觀未栓塞兔腎臟顏色暗紅，無水腫；栓塞兔右腎，表面多點(diǎn)狀出血，顏色為暗紅及灰白相間，稍水腫。栓塞兔左腎見壞死區(qū)與非壞死區(qū)分界明顯，壞死區(qū)顏色發(fā)黑及灰白。

2.4.2光鏡HE染色：栓塞腎可見腎皮質(zhì)梗死約占腎皮質(zhì)的70%～90%，梗死灶部分相互融合，部分多灶融合，梗死灶周圍腎臟組織充血、出血伴中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。對(duì)照組無腎梗死，僅見腎臟稍充血，腎小管輕微水腫。見圖3。

圖3 腎臟光鏡檢查結(jié)果

表1 栓塞前后兔主動(dòng)脈壓力變化（mmHg±s）

表1 栓塞前后兔主動(dòng)脈壓力變化（mmHg±s）

注：?與栓塞前比較，P＜0.05

分組n收縮壓舒張壓平均動(dòng)脈壓栓塞前875±950±662±7栓塞后892±5?73±4?66±9

表2 兔腎動(dòng)脈栓塞前后腎功能變化情況（±s）

表2 兔腎動(dòng)脈栓塞前后腎功能變化情況（±s）

注：?與栓塞前比較，P＜0.05

分組n肌酐/（μmol/L）尿素氮/（mmol/L）LDH/（u/L）對(duì)照組772±87.5±1.2350±45栓塞前868±77.3±1.4320±55栓塞后1 h874±67.6±2.1210±60栓塞后2 h8115±8?9.1±3.2?318±70栓塞后10 h8225±29?20.36±2.4?3213±200?

3 討論

臨床上腎動(dòng)脈栓塞如處理不及時(shí)常常導(dǎo)致嚴(yán)重后果甚至死亡[3-5]，因此構(gòu)建符合臨床上腎動(dòng)脈急性血栓栓塞動(dòng)物模型，對(duì)于腎動(dòng)脈栓塞的治療及藥物干預(yù)研究極為重要。文獻(xiàn)報(bào)道使用兔建立腎動(dòng)脈栓塞動(dòng)物模型方法有一級(jí)微銅圈栓塞、股動(dòng)脈插管栓塞等[6-7]，均未能完全反映臨床上急性腎動(dòng)脈血栓栓塞病理過程。我們?cè)谶M(jìn)行兔急性心肌梗死無復(fù)流的研究中，發(fā)現(xiàn)可用人5 F指引導(dǎo)管行兔腎動(dòng)脈造影，通過自制血栓成功行選擇性兔腎動(dòng)脈栓塞，栓塞后兔腎功能變化及病理學(xué)檢查證實(shí)兔急性腎動(dòng)脈血栓栓塞模型構(gòu)建成功，符合急性腎動(dòng)脈栓塞臨床過程，文獻(xiàn)鮮見報(bào)道。

本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M10只兔中成功行選擇性兔腎動(dòng)脈造影8只，2只置管失敗，造影后8只兔均成功行選擇性腎動(dòng)脈血栓栓塞，栓塞后造影證實(shí)血栓栓塞模型成功，本實(shí)驗(yàn)血栓栓塞位于兔腎動(dòng)脈主干，故腎臟梗死灶范圍較大，如需構(gòu)建栓塞范圍較小模型，可采用微導(dǎo)管選擇性進(jìn)入腎動(dòng)脈分支進(jìn)行栓塞，如需建立雙側(cè)腎臟梗死模型，可行雙側(cè)腎動(dòng)脈血栓栓塞。

本實(shí)驗(yàn)栓塞后兔主動(dòng)脈壓力升高，其中收縮壓及舒張壓較栓塞前升高明顯，栓塞前后主動(dòng)脈壓變化差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），原因可能與栓塞后腎臟急性缺血引起交感神經(jīng)興奮或腎素分泌增加有關(guān)，但因筆者未進(jìn)行有關(guān)腎素檢測(cè)，也未進(jìn)一步喂養(yǎng)兔并行主動(dòng)脈壓監(jiān)測(cè)，能否作為制作兔高血壓模型，需要進(jìn)一步研究。

總之，在使用導(dǎo)管行血栓栓塞時(shí)要注意：指引導(dǎo)管頭端要在腎動(dòng)脈內(nèi)，以免血栓發(fā)生其他部位動(dòng)脈誤栓塞，本模型構(gòu)建通過5F指引導(dǎo)管行兔腎動(dòng)脈造影并成功行血栓栓塞，有以下優(yōu)點(diǎn)：①人橈動(dòng)脈鞘管及指引導(dǎo)管臨床上獲取方便，不需要特殊訂制，可從導(dǎo)管室使用后收集利用，兔成本低，可減少實(shí)驗(yàn)費(fèi)用，便于大規(guī)模實(shí)驗(yàn)進(jìn)行；②如需進(jìn)行藥物干預(yù)，可直接通過指引導(dǎo)管內(nèi)注入腎動(dòng)脈，也可以通過指引導(dǎo)管模擬臨床上急性腎動(dòng)脈栓塞介入治療過程如溶栓及介入取栓治療；③模型建立后如需要進(jìn)一步進(jìn)行干預(yù)研究，可經(jīng)另一側(cè)股動(dòng)脈或雙側(cè)頸動(dòng)脈置管行造影或介入治療。不足之處：實(shí)驗(yàn)條件要求較高，需在有DSA實(shí)驗(yàn)室條件醫(yī)院進(jìn)行，需要有一定介入治療經(jīng)驗(yàn)的心血管或周圍血管醫(yī)生才能完成，因而建立模型受限。

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（王榮兵 編輯）

Establishment of rabbit model of acute renal artery thrombosis through catheter

Chang-yin SHEN,Hong PENG,Bei SHI,Han-lin LIU,Zhi-jiang LIU,Ran-zun ZHAO,Guan-xue XU
(Department Of Cardiology,the Affiliated Hospital of Zunyi Medical College, Zunyi,Guizhou 563003,P.R.China)

【Objective】To explore the feasibility of establishing the model of acute renal artery thrombosis in rabbits by catheter method，and provide reliable laboratory method for the study of acute renal artery thrombosis and acute renal failure.【Methods】Twenty New Zealand white rabbits were randomly divided into embolization and control groups with ten in each group.The embolization group was performed with the femoral artery catheter,and the renal artery embolization was performed with self-made thrombus,then the changes of aortic pressure before and after operation were recorded,kidney function were tested before the operation,1 hour,2 hours and 10 hours after the operation.Then the rabbits were killed and kidneys were cut for pathological examination.While the control group was only received femoral artery catheterization.The renal function and pathological examination were underwent in the corresponding time.【Results】Eight rabbits in the embolization group underwent unilateral renal artery embolization,and catheterization was failed in 2 rabbits.Renal artery angiography showed that the operation was successful.The aortic pressure raised after embolization(P<0.05).After 2 hours of embolization,serum creatinine and urea nitrogen of rabbits raised,they were significantly increased and the lactate dehydrogenase raised 10 hours after operation.The renal function and lactic dehydrogenase of control group had no obvious changes(P<0.05). Kidney pathological changes confirmed that the embolism renal cortical infarction occured in 70%-90%of renalcortex,kidney tissue hyperemia,hemorrhage and infiltration of neutrophils were found around the infarction focus. The control group had no renal infarction,slight hyperemia in kidney was seen,slight edema was found in renal tubules（P<0.05).【Conclusions】The establishment of rabbit model of acute renal artery thrombosis through catheter had a high success rate.Renal functions and pathological changes were similar with the clinical process of renal artery embolism.This method was simple and convenient and could be controlled well.It could provide a reliable animal model for the study of clinical treatment and drug intervention of acute renal artery embolization.

renal arteriography;rabbit;acute renal failure;renal artery embolism

R-332

B

1005-8982（2015）25-0069-04

2015-02-18

貴州省中醫(yī)藥管理局中醫(yī)藥、民族醫(yī)藥科學(xué)技術(shù)研究課題資助項(xiàng)目（No：QZYY2011-72）

石蓓，E-mail：shibei2147@163.com