硝普鈉對(duì)保存期間懸浮紅細(xì)胞變形性的作用研究

李海軍

廣元市中心醫(yī)院 檢驗(yàn)科（廣元 628000）

輸血是臨床搶救患者生命時(shí)一種不可替代的治療手段，在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中占據(jù)重要地位。目前，成分輸血已成常態(tài)，主要有懸浮紅細(xì)胞、血漿和血小板三大血液制品。其中，懸浮紅細(xì)胞的應(yīng)用非常廣泛，其用量居首位［1］。眾所周知，紅細(xì)胞輸注的主要作用是改善患者因貧血導(dǎo)致的氧供不足。雖然懸浮紅細(xì)胞在保存過(guò)程中，其攜氧量沒(méi)有發(fā)生改變，但在紅細(xì)胞輸入人體后，能否順利隨著血液循環(huán)流動(dòng)到目標(biāo)組織或器官，取決于紅細(xì)胞的變形性。若紅細(xì)胞變形能力差，無(wú)法通過(guò)微小血管，不能順利攜帶氧氣到達(dá)目標(biāo)器官或組織，反而可能引起栓塞，造成不良影響。已有較多研究［2－4］發(fā)現(xiàn)，紅細(xì)胞在保存期間變形能力逐漸下降，其原因在于紅細(xì)胞的一氧化氮（NO）丟失。硝普鈉是一種常見(jiàn)的NO供體，能夠釋放NO分子［5］。因此，本研究探討補(bǔ)充硝普鈉對(duì)懸浮紅細(xì)胞在保存期間紅細(xì)胞變形性的影響。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)分組

來(lái)源于中心血站的50袋懸浮紅細(xì)胞，200mL/袋，于保存期的第1、3、5、7、14、21、28、35天各取20mL，分裝成4管，5mL/管。根據(jù)數(shù)字隨機(jī)表法，按照編號(hào)將標(biāo)本隨機(jī)分為4組，A組作為對(duì)照組，不做任何處理，另外3管分別與硝普鈉混合培養(yǎng)成濃度為1μmol/L（B組）、5μmol/L（C組）和10μmol/L（D組）。

1.2 試劑與儀器

SNP試劑（碧云天生物技術(shù)研究所，海門）、PBS溶液（0.072 5M，pH 7.4，國(guó)產(chǎn)分析純）、SA6000自動(dòng)血液流變測(cè)試儀（賽科希德科技發(fā)展有限公司，北京）。

1.3 紅細(xì)胞變形性的檢測(cè)

紅細(xì)胞變形性的檢測(cè)采用賽科希德SA6000自動(dòng)血液流變測(cè)試儀，該儀器采用錐－板式旋轉(zhuǎn)結(jié)構(gòu)原理，利用黏度測(cè)量法計(jì)算血液流變學(xué)相關(guān)指標(biāo)，其測(cè)定的紅細(xì)胞變形指數(shù)越大，表示紅細(xì)胞變形性越差。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行處理，定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）描述。同一時(shí)間點(diǎn)的不同組間比較采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)的方差分析，并進(jìn)一步采用SNK法進(jìn)行兩兩比較；同一組不同時(shí)間點(diǎn)的比較采用重復(fù)測(cè)量方差分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α設(shè)定為0.05。

2 結(jié)果

2.1 不同組別的相關(guān)指標(biāo)隨時(shí)間延長(zhǎng)而變化的趨勢(shì)圖

每組標(biāo)本的紅細(xì)胞變形指數(shù)、聚集指數(shù)和剛性指數(shù)均有隨著時(shí)間延長(zhǎng)而緩慢增高的趨勢(shì)（圖1～4）。

2.2 同一時(shí)間點(diǎn)不同組間的比較

各時(shí)間點(diǎn)，與A組的紅細(xì)胞變形指數(shù)相比，B組和D組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而C組有明顯變化（P＜0.05）；與A組的聚集指數(shù)和剛性指數(shù)比較，B、C、D 3組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（表1～3）。

2.3 同一組不同時(shí)間點(diǎn)的比較

隨著時(shí)間延長(zhǎng)，4組標(biāo)本的紅細(xì)胞變形指數(shù)、聚集指數(shù)和剛性指數(shù)均發(fā)生改變。其中，A、B、C、D 4組紅細(xì)胞變形指數(shù)分別在D14、D21、D28、D21發(fā)生明顯變化，其后保持明顯增高趨勢(shì)（P＜0.05）。A、B、C、D 4組紅細(xì)胞的聚集指數(shù)均在D21后保持明顯增高趨勢(shì)（P＜0.05），4組變化趨勢(shì)一致。A、B、C、D 4組紅細(xì)胞的剛性指數(shù)均在D28后保持明顯增高趨勢(shì)（P＜0.05），4組變化趨勢(shì)一致（表1～3）。

圖1 A組相關(guān)指標(biāo)的變化趨勢(shì)

圖2 B組相關(guān)指標(biāo)的變化趨勢(shì)

圖3 C組相關(guān)指標(biāo)的變化趨勢(shì)

圖4 D組相關(guān)指標(biāo)的變化趨勢(shì)

表1 不同保存時(shí)間點(diǎn)的懸浮紅細(xì)胞的變形指數(shù)（±s，n＝50）

表1 不同保存時(shí)間點(diǎn)的懸浮紅細(xì)胞的變形指數(shù)（±s，n＝50）

注：與A組比較，＃P＜0.05；同一組不同時(shí)間點(diǎn)比較，＊P＜0.05

D1 D3 D5 D7 D14 D21 D28 D35 A組 0.61±0.02 0.62±0.02 0.62±0.03 0.63±0.02 0.68±0.08＊ 0.71±0.07＊ 0.72±0.06＊ 0.75±0.05組別＊B組 0.61±0.03 0.61±0.05 0.62±0.03 0.64±0.02 0.65±0.05 0.70±0.04＊ 0.71±0.05＊ 0.76±0.05＊C組 0.55±0.06＃ 0.56±0.04＃ 0.57±0.05＃ 0.59±0.03＃ 0.61±0.04＃ 0.63±0.07＃ 0.66±0.06＃＊ 0.68±0.08＃＊D組 0.61±0.06 0.62±0.05 0.63±0.04 0.65±0.04 0.66±0.05 0.70±0.04＊ 0.71±0.06＊ 0.76±0.05＊

表2 不同保存時(shí)間點(diǎn)的懸浮紅細(xì)胞的聚集指數(shù)（±s，n＝50）

表2 不同保存時(shí)間點(diǎn)的懸浮紅細(xì)胞的聚集指數(shù)（±s，n＝50）

注：同一組不同時(shí)間點(diǎn)比較，＊P＜0.05

D1 D3 D5 D7 D14 D21 D28 D35 A組 5.21±0.15 5.22±0.15 5.21±0.14 5.22±0.15 5.39±0.35 6.43±0.48＊ 6.89±0.38＊ 7.75±0.37組別＊B組 5.23±0.14 5.22±0.28 5.23±0.36 5.25±0.14 5.37±0.23 6.44±0.57＊ 6.95±0.43＊ 7.85±0.34＊C組 5.18±0.18 5.16±0.18 5.17±0.28 5.21±0.21 5.26±0.27 6.39±0.47＊ 6.97±0.63＊ 7.94±0.48＊D組 5.23±0.17 5.19±0.24 5.19±0.29 5.24±0.31 5.35±0.42 6.46±0.45＊ 6.98±0.49＊ 7.84±0.36＊

表3 不同保存時(shí)間點(diǎn)的懸浮紅細(xì)胞的剛性指數(shù)（±s，n＝50）

表3 不同保存時(shí)間點(diǎn)的懸浮紅細(xì)胞的剛性指數(shù)（±s，n＝50）

注：同一組不同時(shí)間點(diǎn)比較，＊P＜0.05

D1 D3 D5 D7 D14 D21 D28 D35 A組 4.08±0.14 4.09±0.25 4.22±0.23 4.38±0.35 4.55±0.71 4.97±0.31 5.41±0.45＊ 6.34±0.27組別＊B組 4.10±0.25 4.14±0.29 4.19±0.23 4.42±0.36 4.59±0.23 4.92±0.45 5.43±0.32＊ 6.27±0.55＊C組 4.14±0.41 4.18±0.50 4.20±0.31 4.43±0.26 4.66±0.43 4.89±0.42 5.49±0.41＊ 6.26±0.43＊D組 4.13±0.29 4.17±0.44 4.24±0.31 4.47±0.33 4.65±0.28 4.98±0.54 5.46±0.42＊ 6.16±0.38＊

3 討論

NO在心血管活動(dòng)中起重要作用，主要?dú)w因于它對(duì)血管平滑肌的作用。人類紅細(xì)胞能夠表達(dá)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（NOS2或iNOS）和內(nèi)皮型一氧化氮合酶（NOS3或eNOS），因此有能力合成 NO［6］。不管是細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外的NO，均能調(diào)節(jié)紅細(xì)胞的生理功能［7－8］。紅細(xì)胞變形性是紅細(xì)胞的重要生理功能之一，研究［9－10］發(fā)現(xiàn)，NO 能夠調(diào)節(jié)紅 細(xì)胞的 變形能力。Mesquita等［11］的研究證實(shí)，乙酰膽堿和NO供體spermine－NONOate都能改善紅細(xì)胞變形性，而且他們認(rèn)為乙酰膽堿的作用可能是歸因于其能誘導(dǎo)紅細(xì)胞膜上乙酰膽堿M1型受體介導(dǎo)的NO合成，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)NO供體對(duì)紅細(xì)胞變形性的調(diào)節(jié)作用存在濃度依賴性。硝普鈉是一種無(wú)機(jī)亞硝酸鹽，臨床常用作降壓藥，其作用機(jī)制是通過(guò)釋放NO，增加血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)的cGMP水平，從而達(dá)到擴(kuò)張血管，降低血壓的作用［5］。本研究通過(guò)補(bǔ)充硝普鈉發(fā)現(xiàn)，當(dāng)其濃度為5μmol/L時(shí)，能夠明顯降低懸浮紅細(xì)胞的變形指數(shù)，說(shuō)明其能夠改善懸浮紅細(xì)胞的變形能力（P＜0.05），但對(duì)紅細(xì)胞的聚集指數(shù)和剛性指數(shù)無(wú)明顯影響（P＞0.05）。當(dāng)硝普鈉濃度為1μmol/L或10μmol/L時(shí)，其對(duì)紅細(xì)胞變形性無(wú)影響，說(shuō)明硝普鈉對(duì)紅細(xì)胞變形性的作用存在濃度依賴性，只有在合適的濃度才能發(fā)揮作用。

紅細(xì)胞的變形能力對(duì)于維護(hù)血液循環(huán)有著重要意義，它能使紅細(xì)胞通過(guò)微循環(huán)的小血管，降低大血管的高切應(yīng)力血液黏滯。Grau等［12］通過(guò)小鼠實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，紅細(xì)胞變形性的降低對(duì)微循環(huán)灌注造成了損傷。因此，重視懸浮紅細(xì)胞在保存期間變形性的改變，對(duì)于紅細(xì)胞的輸血療效具有重要意義。影響紅細(xì)胞變形性的因素主要為細(xì)胞比容、細(xì)胞形狀、細(xì)胞質(zhì)的黏滯性和細(xì)胞膜的機(jī)械特性。其中，細(xì)胞膜的機(jī)械特性才是細(xì)胞膜黏彈性的主要決定因素。正常紅細(xì)胞的變形性依賴細(xì)胞代謝：1）離子泵的轉(zhuǎn)運(yùn)，例如 Na＋－K＋－ATP 和 Ca2＋－ATP；2）Na＋－K＋－ATP是紅細(xì)胞比容的調(diào)節(jié)器，細(xì)胞質(zhì)的黏滯性維持細(xì)胞內(nèi)外滲透壓的平衡；3）Ca2＋－ATP可以使細(xì)胞內(nèi)Ca2＋維持低濃度水平，其本質(zhì)是保護(hù)正常的紅細(xì)胞變形性［13－14］。盡管本研究和其他文獻(xiàn)［9－11］都 證 明，NO具有調(diào)節(jié)紅細(xì)胞力學(xué)性狀的作用，但NO對(duì)紅細(xì)胞變形性的影響機(jī)制還未完全清楚。

綜上所述，本研究結(jié)果表明，NO能夠顯著影響紅細(xì)胞變形性，且NO對(duì)紅細(xì)胞變形性的維持具有調(diào)控作用。在體內(nèi)，紅細(xì)胞具有兩種來(lái)源的NO：一種是上皮細(xì)胞合成并彌散到血流的；一種是紅細(xì)胞本身合成的。因此，除了NO的血流阻抗作用之外，NO對(duì)紅細(xì)胞變形性的影響也對(duì)血流量的控制有直接作用。但是，NO影響紅細(xì)胞變形性的目標(biāo)結(jié)構(gòu)或功能尚未明確，有待進(jìn)一步研究。

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