P53在膽囊上皮內(nèi)瘤變及膽囊癌組織中的表達(dá)及臨床意義

潘獻(xiàn)柱，吳義春

汪曉慶，謝琳琳 （安徽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校病理學(xué)教研室，安徽 合肥230601）

膽囊癌是消化系統(tǒng)常見腫瘤之一，具有惡性程度高、易侵犯等特點(diǎn)。該病早期無特異性的癥狀和體征，預(yù)后極差［1］。膽囊癌的發(fā)生發(fā)展是一個多基因、多階段的過程，其發(fā)生機(jī)制十分復(fù)雜，許多癌基因的激活及抑癌基因的失活參與了這一過程。本研究擬采用SP法檢測膽囊上皮內(nèi)瘤變及膽囊癌中P53的表達(dá)，探討其在膽囊癌發(fā)生中的作用和其在臨床病理診斷中的意義。

1 材料與方法

1.1 材料

所有標(biāo)本取自安徽省第二人民醫(yī)院2010年1月至2014年6月手術(shù)切除標(biāo)本，共138例。其中低級別上皮內(nèi)瘤變標(biāo)本54例（男18例，女36例），高級別上皮內(nèi)瘤變標(biāo)本45例（男19例，女26），膽囊癌39例（男15例，女24例）。女性多于男性?；颊吣挲g35～79歲，平均年齡（42.9±2.1）歲。

試劑：即用型兔抗人COX－2單克隆抗體、鼠抗人P53單克隆抗體，均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。

1.2 方法

采用免疫組織化學(xué)SP法檢測所有標(biāo)本中的P53和COX－2蛋白的表達(dá)。按照SP試劑盒操作程序進(jìn)行。用已知的陽性片作陽性對照，用PBS代替一抗作陰性對照。P53為淺黃色或棕黃褐色顆粒，定位于細(xì)胞核（圖1）。高倍鏡下每張切片隨機(jī)選擇4個視野，每個視野計數(shù)200個細(xì)胞，計算每張切片陽性細(xì)胞數(shù)百分比。細(xì)胞內(nèi)無著色為（－），陽性細(xì)胞數(shù) ＜25%為 （＋），25～50%為（＋ ＋），＞50%為（＋ ＋ ＋）。COX－2以胞漿染色呈棕黃色至深棕黃色為陽性（圖2）。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

運(yùn)用SPSS 17.0軟件進(jìn)行分析。計數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組P53表達(dá)率的比較

P53在膽囊癌組織（見圖1）中的陽性表達(dá)率明顯高于其在上皮內(nèi)瘤變中的表達(dá)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 各組P53表達(dá)率的比較

2.2 各組P53和COX－2表達(dá)率之間的關(guān)系

不同組別中組織表達(dá)P53蛋白和COX－2蛋白（見圖2）呈正相關(guān)（P＜0.01）。見表2。

圖1 膽囊癌細(xì)胞核P53陽性表達(dá)（SP法）

圖2 膽囊癌細(xì)胞槳COX－2陽性表達(dá)（SP法）

表2 P53與COX－2表達(dá)率之間的關(guān)系

3 討論

P53基因位于人染色體17p，控制著細(xì)胞的代謝、DNA的修復(fù)與合成，是迄今發(fā)現(xiàn)的與人類腫瘤相關(guān)性最高的基因，分為野生型和突變型兩種。野生型P53是抑癌基因，可導(dǎo)致細(xì)胞凋亡，其產(chǎn)物野生型P53蛋白（wtP53）有維持基因穩(wěn)定、抑制癌變、調(diào)節(jié)細(xì)胞分化和衰老等功能［2］。P53基因一旦突變、雜合性丟失或與病毒結(jié)合，P53蛋白結(jié)構(gòu)就會改變，其不僅失去正常wtP53的生長抑制作用，還具有癌基因的功能，從而促進(jìn)腫瘤發(fā)生［3］。

P53基因缺失或突變是許多腫瘤發(fā)生的原因之一。野生型P53蛋白的半衰期極短，較難檢測。利用免疫組織化學(xué)只能檢測到突變型P53蛋白的表達(dá)［4］。本研究表明，P53蛋白在上皮內(nèi)瘤變中就已出現(xiàn)，并隨著膽囊組織異型性不斷增加，表達(dá)率也不斷升高，組間具有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。從而表明P53基因突變及表達(dá)發(fā)生在膽囊癌的形成階段，膽囊上皮從上皮內(nèi)瘤變到癌變這一過程中，P53基因突變具有重要意義，與膽囊癌變關(guān)系密切，并可作為膽囊良、惡性病變鑒別診斷的輔助指標(biāo)。

環(huán)氧合酶－2（COX－2）能夠?qū)⒒ㄉ南∷徂D(zhuǎn)化為前列腺素，并且是這一過程中的關(guān)鍵限速酶，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中起著十分重要的作用［5］。COX－2的表達(dá)與膽囊癌的浸潤程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和Nevin分期有密切關(guān)系。本研究檢測了COX－2蛋白在膽囊上皮內(nèi)瘤變和膽囊癌組織中的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其表達(dá)率也隨膽囊組織異型性增加而增加（P＜0.05），并與P53蛋白表達(dá)呈正相關(guān)（（P＜0.01）。有研究顯示兩者都能促進(jìn)腫瘤的血管生成，而新生血管生成是腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的前提［6］。本研究認(rèn)為，COX－2及P53通過在腫瘤血管生成等方面相互作用，促進(jìn)了膽囊癌的發(fā)展。因此，聯(lián)合檢測膽囊癌組織中COX－2及P53表達(dá)，可為臨床膽囊癌的早期診斷、病情進(jìn)展、惡性程度的判斷及預(yù)后估測提供重要參考依據(jù)。

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