胃癌組織中SPARC、MMP-9的表達及意義

李楊，吳繼鋒，趙文娣，張紅，秦蓉，王道斌

(1安徽醫(yī)科大學附屬安慶市立醫(yī)院，安徽安慶246002;2安徽醫(yī)科大學)

研究發(fā)現(xiàn)，富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC)可參與組織重建、形態(tài)生長、細胞遷移和增殖，從而調(diào)節(jié)機體的生理和病理過程［1］;其在某些腫瘤中異常表達并可誘導某些基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)的表達［2］。本研究探討胃癌組織中SPARC、MMP-9在胃癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集1999年3月～2005年5月安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院診治的胃癌患者108例，均經(jīng)手術(shù)病理檢查證實診斷，男77例、女31例，年齡29～77歲、中位年齡58歲。其中乳頭狀腺癌14例，管狀腺癌33例，低分化腺癌29例，印戒細胞癌19例，黏液腺癌13例;TNM分期Ⅰ期9例，Ⅱ期19例，Ⅲ期68例，Ⅳ期12例;分化程度為高分化18例，中分化29例，低分化61例。術(shù)前均未接受化療及放療。取其手術(shù)切除的胃癌組織(觀察組)，同時取89例距腫瘤組織＞5 cm的胃黏膜組織(對照組)。

1.2 SPARC、MMP-9表達檢測 采用免疫組化SP法。組織標本均經(jīng)4%甲醛固定，石蠟包埋，切片;常規(guī)脫蠟、水化后，枸櫞酸緩沖液水浴抗原修復;滴加鼠抗人 SPARC即用型單克隆抗體(濃度為1∶1 200，美國Zymed公司)或兔抗人MMP-9單克隆抗體(即用型，北京中杉生物技術(shù)有限公司)，常規(guī)免疫組化方法染色。SPARC以人正常皮膚組織為陽性對照，MMP-9以人乳腺癌組織為陽性對照，均以PBS代替一抗作為陰性對照。結(jié)果由兩名醫(yī)師獨立閱片并評定結(jié)果。間質(zhì)細胞胞質(zhì)和(或)細胞核出現(xiàn)黃色或黃褐色顆粒為SPARC陽性細胞;癌細胞胞質(zhì)出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒為MMP-9陽性細胞;無著色或陽性細胞數(shù)＜10%為陰性，陽性細胞數(shù)≥10%為陽性［3］。分析SPARC、MMP-9表達與胃癌臨床病理參數(shù)的關系及胃癌組織SPARC與MMP-9表達的關系。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料比較采用四格表χ2檢驗、行×列表χ2檢驗或Wilcoxon秩和檢驗;相關性分析采用Spearman秩相關法。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組SPARC、MMP-9表達比較 SPARC主要表達于間質(zhì)細胞，MMP-9主要表達于癌細胞。觀察組、對照組 SPARC陽性表達率分別為 88.0%、14.1%(P ＜0.01)，MMP-9 陽性表達率分別為69.4%、19.1%(P ＜0.01)。

2.2 SPARC、MMP-9表達與胃癌臨床病理特征的關系 胃癌組織SPARC表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(P均＜0.05)，MMP-9與組織學類型、分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(P均＜0.05)，二者與性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤部位及遠處轉(zhuǎn)移均無關(P均＞0.05)。見表1。

2.3 胃癌組織中SPARC與MMP-9表達的關系胃癌組織中MMP-9與SPARC表達呈正相關(r=0.561，P ＜0.01)。

表1 SPARC、MMP-9表達與胃癌臨床病理特征的關系［例(%)］

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)，在不同類型腫瘤中SPARC表達的細胞有所不同［4，5］。本研究顯示，SPARC 主要表達于間質(zhì)細胞，少數(shù)表達于胃癌細胞，推測可能是間質(zhì)細胞合成的SPARC被腫瘤細胞內(nèi)化［6］。SPARC與惡性腫瘤生物學行為密切相關的可能機制:①SPARC直接抑制一些基質(zhì)蛋白的合成，改變間質(zhì)的成分和結(jié)構(gòu);②間接上調(diào)基質(zhì)降解酶類的合成，從而使癌細胞易于突破淋巴管和血管的基底膜而向脈管浸潤;③誘導細胞變圓，發(fā)揮抗黏附作用，從而增加腫瘤細胞的侵襲能力［7，8］。SPARC 的水解產(chǎn)物——鈣離子結(jié)合肽能刺激血管生成和細胞生長，外源性SPARC還可以降低血管生成抑制劑的濃度，促進血管生成［9］。本研究結(jié)果顯示，胃癌間質(zhì)細胞SPARC的陽性表達率顯著高于正常胃黏膜組織，與相關文獻一致［10，11］，提示 SPARC 可能參與了胃癌的發(fā)生;同時，SPARC表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關，提示其與胃癌的進展有關。研究證實，MMP-9參與多種腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移，可能機制為:①去除侵襲的機械性屏障;②影響細胞間的粘連;③水解蛋白質(zhì)釋放某些生物活性物質(zhì);④影響多種生長因子的活性［12］。本研究發(fā)現(xiàn)，MMP-9表達與胃癌的組織學類型、分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關，提示MMP-9與胃癌的發(fā)生、發(fā)展有關，與相關文獻結(jié)論一致［13］。

腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移涉及復雜的細胞之間以及細胞與間質(zhì)之間的反應。目前認為間質(zhì)成分并不是被動的，而是主動地參與腫瘤的生物學行為。SPARC作為細胞外基質(zhì)成分之一，發(fā)揮抗黏附作用，使腫瘤細胞間的黏附特性消失、相互分離，更易于浸潤周圍組織和遠處轉(zhuǎn)移。SPARC能夠介導外周血單核細胞表達MMP-1和MMP-9，介導成纖維細胞表達 MMP-1、MMP-3、MMP-9。車軼群等［14］報道，在乳腺癌細胞中SPARC通過上調(diào)MT1-MMP進而活化MMP-2。但在SPARC敲除小鼠腹腔內(nèi)注入卵巢癌細胞后，與野生型小鼠相比可觀察到MMP-2和MMP-9上調(diào)，人基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子1(TIMP-1)及 TIMP-2下調(diào)［15］。本研究也發(fā)現(xiàn)胃癌組織SPARC與MMP-9表達呈正相關。因此，我們認為胃癌組織間質(zhì)細胞分泌的SPARC可能通過上述機制上調(diào)腫瘤細胞MMP-9表達，使基底膜及細胞外基質(zhì)降解而發(fā)生浸潤、轉(zhuǎn)移。因此，進一步研究SPARC及MMP-9的相互作用及調(diào)節(jié)機制，可為闡明胃癌實質(zhì)與間質(zhì)之間的相互作用提供有力依據(jù)，進而為抑制胃癌的浸潤和轉(zhuǎn)移提供有效的途徑。

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