直腸癌患者癌組織XPG C46T基因多態(tài)性與新輔助放化療療效的關系

黃文瑜，湯帆，孫勝，曹傳培，王彬

(1九江市第一人民醫(yī)院，江西九江332000;2九江學院附屬醫(yī)院)

直腸癌患者就診時多數(shù)已屬中晚期，手術是其主要治療方法，但5年生存率僅約50%［1］。新輔助放化療被視為腫瘤細胞的減量治療，可減小腫瘤負荷，提高腫瘤的手術完全切除率［2］。奧沙利鉑聯(lián)合卡培他濱方案(XELOX方案)化療聯(lián)合放療是目前進展期結直腸癌新輔助治療的常用方案，但其療效個體差異較大［3］。研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤細胞DNA損傷修復能力與化療療效關系密切，腫瘤細胞DNA修復能力降低可導致鉑類藥物治療腫瘤的臨床緩解率升高［4］。XPG(ERCC5)是核苷酸切除修復途徑(NER)的一種關鍵因子，參與鉑類藥物引起的DNA損傷修復過程。本研究探討XPG C46T基因多態(tài)性對直腸癌新輔助放化療療效的影響。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2009年9月～2012年9月九江市第一人民醫(yī)院收治的Ⅱ～Ⅲ期中低位直腸癌(距離肛緣≤12 cm)患者45例，年齡25～86歲、平均48歲，KPS評分≥60分，均無肝、肺等遠處器官轉(zhuǎn)移，均可耐受放化療。

1.2 新輔助放化療方法 ① XELOX方案化療:奧沙利鉑50 mg/(m2·周)，加入5%葡萄糖250 mL，靜滴2 h;卡培他濱 800 mg/(m2·次)，2次/天，5天/周，隨放療周期服用。②放療:直線加速器X線照射，靶區(qū)包括直腸原發(fā)灶及淋巴引流區(qū)域。等中心三野照射，后野 ∶左側野 ∶右側野=2∶1∶1，放射劑量為50 Gy/25次/5周。放化療期間定期檢查血常規(guī)和肝腎功能，并予以積極的對癥治療和營養(yǎng)支持。

1.3 相關指標觀察

1.3.1 臨床療效 放化療結束6周后進行CT和(或)MRI檢查，根據(jù)實體瘤療效標準判定放化療效果，包括完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、穩(wěn)定(SD)和進展(PD)，CR+PR為有效，SD+PD為無效。

1.3.2 XPG C46T基因多態(tài)性 采用RT-PCR方法檢測直腸癌組織中XPG C46T基因多態(tài)性分布情況。具體步驟:① DNA提取:分別取5 mg病理標本，常規(guī)脫蠟脫水，提取DNA(參照上海強生DNA提取試劑盒步驟)，-20℃保存。② PCR擴增:反應體積為 15 μL，含 DNA 模板 0.5 μL、10 × Taq 緩沖液 1.5 μL、dNTP(2.5 mmol/L)0.3 μL、引物(rs1047768-F、rs1047768-R)(50 pmol/μL)各 0.2 μL、Taq DNA 聚合酶(5 U/μL)0.1 μL、MgCl21.2 μL、dH2O 11 μL。反應條件:95℃預變性;95℃ 30 s、67.5 ℃ 45 s、72 ℃ 60 s，20 個循環(huán);95 ℃ 30 s、58℃ 30 s、72℃ 40 s，20個循環(huán);72℃延伸6 min。③電泳:將擴增產(chǎn)物用3%瓊脂糖凝膠電泳，緩沖液為1×TBE，恒壓150 V，耗時30 min，結束后將瓊脂糖凝膠在成像儀下觀測結果并攝片。④限制性片段長度多態(tài)性聚合酶鏈反應:將上述PCR產(chǎn)物XPG C46T(rs1047768)采用限制性內(nèi)切酶酶切，反應總體積為 15 μL，含 10 × R 緩沖液 1.5 μL、PCR 產(chǎn)物10 μL、內(nèi)切酶(10 U/μL)0.1 μL、dH2O 3.5 μL，37℃水浴過夜后加入緩沖液終止反應。儀器收集信號，采用SDS軟件分析結果。XPG C46T基因型C/C 為 157 bp，T/T 為 110、47 bp，C/T 為 157、110、47 bp。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料比較采用χ2檢驗。采用單因素分析法分析放化療效果與直腸癌患者臨床病理特征、XPG C46T基因多態(tài)性的關系。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 放化療效果 放療化結束后6周，CR 5例、PR 22例、SD 14例、PD 4例，有效27例、無效18例，有效率為60.00%。

2.2 放化療效果與直腸癌患者臨床病理特征的關系 放化療效果與患者性別、年齡、病理類型、KPS評分均無關(P均＞0.05)。見表1。

表1 放化療效果與直腸癌患者臨床病理參數(shù)的關系(例)

2.2 放化療效果與XPG C46T基因型的關系 本組C/C基因型21例，C/T 15例，T/T 9例。放化療有效患者直腸癌組織XPG C46T基因型C/C為18例、無效者為 3例(P＜0.05)，C/T分別為 6、9例(P ＜0.05)，T/T 分別為3、6 例(P ＜0.05)。

3 討論

相對于術后放化療而言，新輔助放化療可改進直腸癌局部控制、降低放化療毒副反應、增加保肛率、延長無進展生存時間［5］。奧沙利鉑聯(lián)合卡培他濱(XELOX方案)化療聯(lián)合放療是進展期結直腸癌新輔助治療的常用方案，但放化療效果個體差異大。藥物個體敏感性差異主要由個體遺傳因素決定，且與藥物作用機制、代謝相關基因的單核苷酸基因多態(tài)性(SNP)相關［6］。目前，國內(nèi)外關于不同基因位點多態(tài)性與鉑類藥物敏感性關系的研究繁多，針對性選擇基因位點以有效判定鉑類藥物敏感性是研究重點。

鉑類藥物進入腫瘤細胞后可形成鉑-DNA加和物，使DNA內(nèi)部彼此形成交聯(lián)，導致DNA雙螺旋結構破壞，引起DNA復制障礙。XPG(ERCC5)可參與鉑類藥物引起的DNA損傷修復過程，其108個修復基因的啟動子區(qū)域SNP位點超過1/3基因(包括ERCC5)啟動子區(qū)至少存在一個高頻SNP位點，并可能因此影響修復基因的表達水平［7］。Chen等［8］報道，中國漢族晚期大腸癌患者ERCC5-763A＞G位點在鉑類藥物化療有效組和無效組中分布差異存在統(tǒng)計學意義，XPG基因啟動子區(qū)域ERCC5-763A＞GSNP多態(tài)性與鉑類藥物化療敏感性相關。XPG C46T基因多態(tài)性可作為奧沙利鉑治療進展期大腸癌患者客觀緩解率、疾病進展時間及生存期的預測指標［9～11］。Monzo 等［12］報道，XPG C46T參與DNA修復過程，與奧沙利鉑化療敏感性有關，C/C基因型大腸癌患者的客觀緩解率顯著高于C/T和T/T基因型患者，且C/C基因型患者疾病控制率高于其他基因型患者。上述研究探討的均為XPG C46T基因多態(tài)性與姑息化療或術后化療患者藥物敏感性的關系，而其與新輔助治療的關系鮮有報道。本研究新輔助放化療治療直腸癌的有效率為60.00%，與國外相關報道［13］結果相似。療效與直腸癌患者性別、年齡、病理類型、KPS評分無關;考慮放化療療效與人體內(nèi)多種因素相關，是各種因素綜合作用的結果。但本組CR率(11.1%)較低，考慮與樣本量小有關，亦不能排除人種及民族差異性因素。

本研究結果顯示，XPG C46T三種基因型新輔助放化療有效者和無效者直腸癌組織中分布差異有統(tǒng)計學意義，有效組C/C基因型者多于無效組，C/T及T/T基因型者均少于無效組，與Monzo等［12］結果相符，提示XPG C46T基因多態(tài)性分布可反映新輔助放化療的敏感性。XPG C46T基因多態(tài)性可能通過對基因轉(zhuǎn)錄活性的影響導致基因表達水平變化，從而使DNA修復能力發(fā)生改變，引起不同患者對鉑類藥物反應出現(xiàn)差異。但是，腫瘤細胞對放化療敏感性不僅取決于單個基因或單個SNP，更大程度取決于多個基因或多個SNP之間的彼此作用。因此，本研究結論仍有待進一步考證。

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