HPLC法同時(shí)測(cè)定孕婦金花片中梔子苷和芍藥苷的含量

劉君怡，楊敏，張盛，黃榮增 （湖北中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖北武漢430065）

孕婦金花片由梔子、白芍、金銀花等9味中藥材提取精制而成，具有清熱、安胎的功效。臨床主要用于孕婦頭痛、暈眩、口鼻生瘡、咽喉腫痛等。梔子苷是梔子的主要成分之一，具有瀉火除煩、清熱利尿、涼血解毒等功效［1］。白芍的主要成分為芍藥苷，臨床上白芍組方常用于治療多種腹痛以及肋痛、痛經(jīng)、肢體痙攣痛、頭痛等，具有直接鎮(zhèn)痛作用［2］。筆者采用反相高效液相色譜法，研究孕婦金花片中梔子苷和芍藥苷的含量測(cè)定方法，為孕婦金花片的質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)提供參考依據(jù)。

1 儀器與試劑

Dionex－P680高效液相色譜儀；上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司5200H型超聲波清洗器；AT－201電子分析天 （d＝0.01mg，瑞士）；孕婦金花片 （自制）；梔子苷對(duì)照品，供含量測(cè)定用，中國(guó)藥品生物檢定所，批號(hào)：110749－200309；芍藥苷對(duì)照品，供含量測(cè)定用，中國(guó)藥品生物檢定所，批號(hào)：0736－9508；乙腈為色譜純；水為重蒸餾水 （自制）；甲酸等其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的配制

溶液的配制參照文獻(xiàn) ［3～6］進(jìn)行。①對(duì)照品溶液：取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥器中干燥36h的梔子苷對(duì)照品和芍藥苷對(duì)照品適量，分別精密稱定，加甲醇制成每1mL含梔子苷90μg、芍藥苷50μg的溶液。②供試品溶液：取孕婦金花片10片，研勻，取約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇50mL，密塞，輕輕振搖，稱定重量，超聲處理50min，放冷，稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，振搖，用0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液即得。③陰性對(duì)照溶液：按孕婦金花片處方比例和工藝，制備不含白芍和梔子的陰性樣品。按供試品溶液制備方法制得陰性對(duì)照溶液。

2.2 色譜條件

色譜柱：Aglient XDB－C18柱 （4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈－0.1%甲酸 （12.5∶87.5）；流速：1.0mL／min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：236nm［7～9］。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

按照上述色譜條件，取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各10μL進(jìn)樣，記錄色譜圖。理論塔板數(shù)按梔子苷峰計(jì)算不低于11000，按芍藥苷峰計(jì)算不低于7000，分離度均大于1.5，峰形對(duì)稱，陰性無(wú)干擾。結(jié)果見(jiàn)圖1、2、3。

圖1 對(duì)照品溶液色譜圖

圖2 供試品溶液色譜圖

圖3 陰性對(duì)照溶液色譜圖

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

取兩種對(duì)照品適量，分別精密稱定，加甲醇制成濃度為180μg／mL的梔子苷和100μg／mL的芍藥苷的混合對(duì)照品溶液，精密量取上述對(duì)照品溶液1、2、4、6、8、10mL分別置于10mL量瓶中，加甲醇定容，搖勻。分別精密量取上述對(duì)照品溶液10μL，各進(jìn)樣2次，按上述色譜條件測(cè)定。以峰面積平均值為縱坐標(biāo) （Y），以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo) （X）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，梔子苷在0.18～1.8μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為Y＝12.982 X－0.0634，r＝0.9999；芍藥苷在0.10～1.0μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為Y＝23.088 X－0.0472，r＝0.9999。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取同一對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定，結(jié)果梔子苷的峰面積RSD為0.6%，芍藥苷的峰面積RSD為0.9%。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，按上述色譜條件，分別于0、2、4、8、12、24h測(cè)定峰面積。結(jié)果梔子苷的峰面積RSD為1.2%，芍藥苷的峰面積RSD為0.7%，試驗(yàn)結(jié)果表明，供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

按照含量測(cè)定的方法，對(duì)同一樣品 （批號(hào)：131201）測(cè)定6次，結(jié)果梔子苷和芍藥苷含量平均值分別為4.3436、2.4047mg／g，RSD分別為1.8%、1.3%。

2.8 加樣回收試驗(yàn)

取已知含量的孕婦金花片樣品（批號(hào)：131201）細(xì)粉6份，每份約0.4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入對(duì)照品溶液20mL，精密加甲醇30mL，按2.1.2項(xiàng)供試品溶液制備方法制備，分別按上述色譜條件測(cè)定。結(jié)果 （見(jiàn)表1、2）表明本法回收率為分別為99.88%、99.39%，RSD分別為1.5%、1.3%。

表1 梔子苷回收試驗(yàn)結(jié)果

表2 芍藥苷回收試驗(yàn)結(jié)果

2.9 含量測(cè)定

按照上述含量測(cè)定方法，測(cè)定三批孕婦金花片的含量，采用外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 三批孕婦金花片中梔子苷和芍藥苷的含量測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)論

中藥及其制劑很多以梔子苷或芍藥苷為含量測(cè)定指標(biāo)，流動(dòng)相多采用甲醇－水、乙腈－水、乙腈－磷酸等系統(tǒng)［6～9］。筆者采用反相高效液相色譜法，同時(shí)測(cè)定孕婦金花片中梔子苷和芍藥苷的含量，對(duì)測(cè)定波長(zhǎng)和流動(dòng)相等條件進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)考察，結(jié)果流動(dòng)相為乙腈－0.1%甲酸 （12.5∶87.5），可使梔子苷和芍藥苷與雜質(zhì)峰分離情況最佳；檢測(cè)波長(zhǎng)為236nm，梔子苷和芍藥苷的檢測(cè)靈敏度均較高。此方法準(zhǔn)確可靠、重現(xiàn)性好，可用于孕婦金花片的質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)。

［1］ 孟祥樂(lè)，李紅偉，李顏，等 .梔子化學(xué)成分及其藥理作用研究進(jìn)展 ［J］.中國(guó)新藥雜志，2011，20（11）：959～967.

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