醫(yī)用注射器具中DEHP增塑劑溶出量測(cè)定

【作者】鄭建，王敏珠，王安燕，徐萍華，韓銀，文燕，張莉

國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局杭州醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，杭州市，310009

醫(yī)用注射器具中DEHP增塑劑溶出量測(cè)定

【作者】鄭建，王敏珠，王安燕，徐萍華，韓銀，文燕，張莉

國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局杭州醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，杭州市，310009

建立氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)測(cè)定醫(yī)用注射器具醫(yī)療器械產(chǎn)品中DEHP溶出量分析方法，探討樣品前處理對(duì)測(cè)定的影響和評(píng)價(jià)。通過(guò)分析確認(rèn)，模擬臨床使用條件，在37oC條件下平衡浸提，浸提液經(jīng)氯仿萃取，萃取液進(jìn)行氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析。該方法簡(jiǎn)便快速，方法檢出限低，定性定量準(zhǔn)確。定量下限(S/N =5)為 0.075 μg/mL，平均加標(biāo)回收率為92%～ 98%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.01%～1.61%。 此方法樣品前處理簡(jiǎn)單、干擾少、重現(xiàn)性好、分離效率高, 可做為醫(yī)用注射器具醫(yī)療器械產(chǎn)品中DEHP溶出量的質(zhì)量控制的方法之一。

注射器；氣相色譜-質(zhì)譜法；DEHP；塑化劑

一次性無(wú)菌注射器是我國(guó)20世紀(jì)80年代引進(jìn)的一種新型醫(yī)療器械。它能避免交叉感染，使用方便,是臨床上廣泛使用的一種注射穿刺器械，目前，國(guó)內(nèi)年產(chǎn)量約160億只，年產(chǎn)值約50億元[1]。其結(jié)構(gòu)主要由芯桿、活塞、外套與注射針構(gòu)成，主要原材料有注射針—奧氏體不銹鋼（GB 18457—2001）、注射器（注射器外套—聚丙烯、芯桿—聚丙烯或聚乙烯、活塞—天然橡膠、潤(rùn)滑劑—聚二甲基硅氧烷）[2-4]。由高分子材料組成的注射器往往可能加入鄰苯類(lèi)物質(zhì)增強(qiáng)注射器的可塑像和柔軟度，特別是注射器所用橡膠活塞采用的天然橡膠[5]部位尤為明顯。因而采用一次性注射器吸取、溶配及注射含脂溶性溶劑的注射液時(shí)，則可能溶出鄰苯類(lèi)物質(zhì)，而鄰苯類(lèi)物質(zhì)應(yīng)用最多的是DEHP。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究表明，DEHP具有廣泛的不良反應(yīng)，明顯表現(xiàn)為肝臟毒性和睪丸萎縮[7]。“臺(tái)灣塑化劑事件”中DEHP是通過(guò)胃腸道吸收后對(duì)人體產(chǎn)生不良影響，注射器中溶出的DEHP，則能直接進(jìn)入人體血液、器官和組織，相對(duì)于胃腸道吸收可能對(duì)患者帶來(lái)更嚴(yán)重的危害[8]，因此有必要控制注射器中的DEHP含量，從而更有效地加強(qiáng)對(duì)注射器的技術(shù)監(jiān)控工作，保證消費(fèi)者使用其安全性。

1　實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器和試劑

安捷倫7890A/5975C 氣相質(zhì)譜聯(lián)用儀；鄰苯二甲酸二（2-乙基已基）酯（DEHP）標(biāo)準(zhǔn)品（FLUKA公司），三氯甲烷（色譜純），乙醇（色譜純，TEDIA“天地”試劑公司），無(wú)水硫酸鈉（色譜純，西格瑪公司）， Milli-Q超純水系統(tǒng)；樣品：一次性使用無(wú)菌注射器（帶針）。

1.2浸提液制備

參考行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YY/T 0927—2014:聚氯乙烯醫(yī)療器械中鄰苯二甲酸二(2一乙基己基)酯(DEHP)溶出量測(cè)定指南及醫(yī)療器械在臨床中的使用情況，本文選用乙醇水溶液（密度為0.937 8 g/mL）、氯化鈉注射作為浸提液，樣品加浸提液至公稱容量，在37±1°C下恒溫（1 h），將樣品與液體分離，冷卻至室溫作為樣品浸提液。

1.3樣品浸提液的預(yù)處理

取“1.2”制備的浸提液于玻璃離心管中，加入氯仿震蕩5 min，離心分離，取氯仿層作為檢驗(yàn)液待測(cè)。

1.4儀器條件[8]

氣相-質(zhì)譜聯(lián)用儀： 安捷倫7890A-5975C。

色譜柱：HP-5MS石英毛細(xì)管柱30 m×0.25 mm×0.25 μm。

柱溫：150°C保持0.5 min，然后以10°C/min的速度升溫至280°C，保持7 min。

進(jìn)樣口溫度：280°C。

EI離子源溫度：230°C， 四級(jí)桿溫度：150°C。進(jìn)樣體積：1 μL。載氣：氦氣，純度≥99.99%， 流速：1.5 mL/min。測(cè)定方式：全掃描總離子圖（TIC）定性，選擇離子檢測(cè)（SIM）定量。

1.5標(biāo)準(zhǔn)溶液制備

準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)物的DEHP約1.0 g，用氯仿配成100 mg/mL的儲(chǔ)備液，再用氯仿配置0.5～10 μg/mL 5個(gè)系列DEHP標(biāo)準(zhǔn)溶液待測(cè)。

2　結(jié)果與討論

2.1樣品浸提液預(yù)處理方法的選擇

水或鹽溶液容易對(duì)柱子及離子源造成污染，縮短使用壽命，不能將“1.2”制備出的浸提液直接進(jìn)儀器分析，因此需要對(duì)浸提液進(jìn)行預(yù)處理將水和鹽成分去除。若參考行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YY/T 0927—2014，即采用將浸提液在50°C真空干燥箱中干燥，待浸提液完全消失再用等體積正己烷溶解的方法[9]，試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)浸提液中水分子很難被蒸發(fā)，特別是鹽溶液中的水分子更不容易去除，同時(shí)一般注射器醫(yī)療器械產(chǎn)品中DEHP含量很微量，用等體積的正己烷溶解后，供試液中待測(cè)物一般在儀器檢出限以下。因此本文根據(jù)DEHP微溶于水而易溶于氯仿的性質(zhì)，采用浸提液中加入氯仿震蕩5 min，離心分離，取氯仿層作為檢驗(yàn)液的方法。該方法快速，簡(jiǎn)單，又降低方法檢出限。

2.2定性分析

通過(guò)測(cè)定DEHP標(biāo)準(zhǔn)溶液，可以確定在“1.4”儀器條件下DEHP色譜峰的保留時(shí)間在7.62 min，DEHP總離子圖及特征離子圖見(jiàn)圖1、圖2。樣品液檢出的色譜峰不受其他峰干擾與標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜峰的保留時(shí)間一致，并且樣品扣除背景的質(zhì)譜圖中DEHP的全部特征離子均出現(xiàn)。

圖1　DEHP總離子圖Fig.1 Full scan pr°duct i°n spectrum

2.3定量分析

采用外標(biāo)法，選擇DEHP的定量選擇離子為m/z=70、149、167，在氣相-質(zhì)譜聯(lián)用儀的SIM掃描模式下，分別對(duì)“1.5”工作標(biāo)準(zhǔn)溶液和“1.3”的樣品檢驗(yàn)液進(jìn)行分析。由DEHP的濃度對(duì)響應(yīng)值建立工作標(biāo)準(zhǔn)曲線及回歸方程，根據(jù)工作標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品檢驗(yàn)液中DEHP的含量，最終計(jì)算出每副樣品中DEHP的溶出含量。

2.4方法學(xué)驗(yàn)證

2.4.1校準(zhǔn)曲線、線性范圍及檢出限

在分析確認(rèn)的色譜條件下測(cè)定DEHP標(biāo)準(zhǔn)系列的響應(yīng)值，在0.5～10 μg/mL的線性范圍內(nèi)曲線方程y=5.561E+004x（回歸方程強(qiáng)制過(guò)零），r2=0.999 4。以3倍信噪比S/N對(duì)應(yīng)作檢出限0.015 μg/mL，將5倍的檢出限作為方法定量下限0.075 μg/mL。

2.4.2精密度及準(zhǔn)確度

配制0.5 μg/mL的DEHP標(biāo)準(zhǔn)溶液試樣進(jìn)行6次測(cè)定。得精密度（RSD）為1.71%，回收率97.3%。結(jié)果表明精密度準(zhǔn)確度良好。

2.4.3加標(biāo)回收率試驗(yàn)

準(zhǔn)備6份一次性使用注射器（帶針）樣品，分別采用乙醇水及生理鹽水浸提制備檢驗(yàn)液，檢驗(yàn)液經(jīng)處理后分別精密加入標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5、1.0、2.0 mL，每種濃度制備3份。按上述方法測(cè)定DEHP含量。結(jié)果顯示：乙醇水為浸提液，回收率在92%～98%（表1）、生理鹽水為浸提液，回收率在90%～98%（表2），表明回收率情況良好。

表2　生理鹽水為浸提介質(zhì)的回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=3)Tab.2 The rec°very rate °f water as extracti°n medium test results

2.5樣品測(cè)定

采用本方法對(duì)10批市售一次性使用注射器（帶針）樣品進(jìn)行測(cè)試，實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，注射器活塞的頂端（活塞—天然橡膠）有一層薄薄的油狀物質(zhì)，對(duì)此進(jìn)行氯仿萃取分析，發(fā)現(xiàn)注射器活塞中有相當(dāng)高的DEHP溶出量，采用生理鹽水作為浸提液，則發(fā)現(xiàn)注射器活塞中DEHP溶出含量在0.82～1.67 μg/副，乙醇作為浸提介質(zhì)溶出量在1.86～6.55 μg/副；注射器（帶針）整個(gè)產(chǎn)品以生理鹽水作為浸提介質(zhì)DEHP溶出量在1.02～2.03 μg/副，乙醇作為浸提介質(zhì)DEHP溶出量在1.99～7.24 μg/副。

2.6結(jié)論

根據(jù)DEHP微溶于水而易溶于三氯甲烷的性質(zhì)，采用在浸提液中加入氯仿震蕩5 min，離心分離，取氯仿層作為檢驗(yàn)液的方法。該方法快速，簡(jiǎn)單，定性定量準(zhǔn)確，定量下限低，特別適合注射器（DEHP含量較低）產(chǎn)品的分析?？勺鰹橐淮涡允褂米⑸淦鳂悠分蠨EHP溶出量控制的方法之一。

通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，目前部分國(guó)內(nèi)非聚氯乙烯材料的醫(yī)療器械產(chǎn)品注射器被檢測(cè)出有DEHP溶出量，則可能是注射器組成部件活塞材料中添加DEHP導(dǎo)致。希望本次試驗(yàn)的發(fā)現(xiàn)能夠引起相關(guān)企業(yè)及監(jiān)管部門(mén)的重視。

[1] 李靜莉, 楊婉娟, 郝擎, 等. 一次性使用無(wú)菌注射器上市后質(zhì)量現(xiàn)狀分析與思考[J]. 中國(guó)醫(yī)療器械雜志, 2012, 36(6): 441-443.

[2] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局. YY/T 0242—2007 醫(yī)用輸液, 輸血,注射器具用聚丙烯專(zhuān)用料[S].

[3] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局. YY/T 0114—2008 醫(yī)用輸液, 輸血,注射器具用聚乙烯專(zhuān)用料[S].

[4] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局. YY/T 0243—2003 一次性使用無(wú)菌注射器用活塞[S].

[5] 商務(wù)部對(duì)外貿(mào)易司. 一次性使用注射器出口質(zhì)量控制指南[Z].中國(guó)醫(yī)藥保健品進(jìn)出口商會(huì), 2010.

[6] 于樂(lè)云, 王朦夏, 秦櫟媛, 等. 鄰苯二甲酸二異辛酯對(duì)雄性小鼠主要臟器及生殖功能的影響[J]. 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2008, 25(5): 505.

[7] 陳琳, 錢(qián)青, 張吉吉, 等. 醫(yī)療途徑中增塑劑DEHP的溶出及其安全性研究概況[J]. 中國(guó)藥房, 2011, 22(33): 3073-3075.

[8] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局. YY/T 0927—2014 聚氯乙烯醫(yī)療器械中鄰苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)溶出量測(cè)定指南[S].

Determination of Plasticizer DEHP Released from Medical Injection Equipment

【 Writers 】ZHENG Jian, WANG Minzhu, WANG Anyan, XU Pinghua, HAN Yin, WEN Yan, ZHANG Li Medical Device Supervising and Testing Center of Hangzhou, State Food and Drug Administration, Hangzhou, 310009

【 Abstract 】To established an effective GC-MS /MS method for the contents determination of the residual DEHP in injection equipment, and investigate the effect of the pretreatment on the measurement. To simulate the clinical conditions of use, under the condition of 37oC balance extraction, extract liquor by chloroform extraction, then the extract followed by analysis of GC-MS /MS. The method was simple, rapid, sensitive and accurate. The limits of quantitation( LOQ, S/N = 5) of cyclohexanone was 0.075 μg/mL, The spiked average recoveries ranged from 92% to 98%.The relative standard deviations( RSDs) of the method ranged from 1.01% to 1.61%, The method was simple, fast,sensitive and accurate,and may serve as a mass control method for residual DEHP in injection equipment.

injection equipment, gas chromatography tandem mass spectrometry, DEHP, plasticizer

X132

A

10.3969/j.issn.1671-7104.2015.06.017

1671-7104(2015)06-0451-03

2015-06-11

浙江省科技廳計(jì)劃項(xiàng)目(2015F30009)

鄭建，工程師，E-mail: fancyzl1@163.c°m