奶牛乳房中藥涂膜劑毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究

周慶民，徐 馨，馮萬(wàn)宇，黃 健，張 艷（黑龍江省獸醫(yī)科學(xué)研究所，齊齊哈爾 161006）

奶牛乳房中藥涂膜劑毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究

周慶民，徐 馨，馮萬(wàn)宇，黃 健，張 艷
（黑龍江省獸醫(yī)科學(xué)研究所，齊齊哈爾 161006）

為研究奶牛乳房中藥涂膜劑的一般毒性及特殊毒性，評(píng)價(jià)其使用安全性，通過皮膚過敏實(shí)驗(yàn)、單次和多次給藥皮膚刺激實(shí)驗(yàn)、測(cè)定半數(shù)致死量和最大耐受量的急性毒性實(shí)驗(yàn)，考察其安全性。結(jié)果：皮膚過敏實(shí)驗(yàn)顯示奶牛乳房中藥涂膜劑無任何皮膚致敏性。單次給藥皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)顯示涂膜劑對(duì)完整皮膚無刺激性，對(duì)破損皮膚僅在用藥后1h出現(xiàn)輕微刺激，24h后刺激反應(yīng)消失；多次給藥皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)顯示涂膜劑對(duì)完整皮膚無刺激性，對(duì)破損皮膚僅在用藥3d后出現(xiàn)輕度刺激。說明奶牛乳房中藥涂膜劑單次和多次給藥對(duì)完整皮膚無任何刺激性，而對(duì)破損皮膚有輕度刺激作用。奶牛乳房中藥涂膜劑最大給藥量（臨床用量的562.5倍）實(shí)驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)毒性反應(yīng)。結(jié)論：該制劑可安全應(yīng)用于臨床。

中藥涂膜劑；過敏實(shí)驗(yàn)；皮膚刺激；急性毒理

奶牛乳房中藥涂膜劑是以中草藥復(fù)合提取物為功效成分的新型制劑，具有消炎止痛、解熱鎮(zhèn)痛、活血化瘀、消腫散癰的作用，適用于奶牛臨床型乳房炎的治療，用法為將涂膜劑均勻涂抹于患乳的腫脹部位，直接作用于患處，在乳頭表面迅速形成保護(hù)膜，以隔離保護(hù)創(chuàng)面，既能廣譜高效殺滅乳頭上的細(xì)菌和病毒，又能阻止病原微生物通過乳頭管口侵入乳腺組織，還能促進(jìn)乳孔快速閉合，以降低感染機(jī)會(huì)［1-3］。為了驗(yàn)證奶牛乳房中藥涂膜劑的應(yīng)用安全性，筆者等對(duì)其進(jìn)行皮膚過敏實(shí)驗(yàn)、皮膚刺激實(shí)驗(yàn)、急性毒性實(shí)驗(yàn)等毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究，為臨床安全用藥提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥物及試劑

奶牛乳房中藥涂膜劑，由黑龍江省獸醫(yī)科學(xué)研究所研制生產(chǎn)，批號(hào)20140719。1％和0.1％的2，4-二硝基氯代苯，由廣州偉伯化工有限公司生產(chǎn)，批號(hào)20140611。阿拉伯膠，由天津虔誠(chéng)偉業(yè)科技發(fā)展有限公司生產(chǎn)，批號(hào)20140415。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

8周齡清潔級(jí)ICR品系小鼠60只，雌雄各半，體重20～23g；16周齡清潔級(jí)ICR品系小鼠18只，雌雄各半，體重300～350g；健康無損傷的哈白兔12只，雌雄兼用，體重2.0～2.3kg，均購(gòu)于中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所動(dòng)物試驗(yàn)中心。

1.3 皮膚過敏實(shí)驗(yàn)

將18只16周齡ICR小鼠隨機(jī)分成3組，每組6只，第1組為陰性對(duì)照組，第2組為陽(yáng)性對(duì)照組，第3組為實(shí)驗(yàn)組。實(shí)驗(yàn)前24h用8％硫化鈉將每只鼠背部?jī)蓚?cè)去毛，左右兩側(cè)去毛面積各3cm×3cm，每只鼠的脫毛部位均無皮膚損傷，然后用溫水輕輕擦拭干凈待用［4-5］。在小鼠左側(cè)去毛的皮膚上進(jìn)行致敏接觸實(shí)驗(yàn)，具體操作為：第1組在各鼠左側(cè)脫毛處涂抹0.15g的賦形劑，第2組在各鼠左側(cè)脫毛處涂抹1％的2，4-二硝基氯代苯0.15g，第3組在各鼠左側(cè)脫毛處涂抹0.15g的奶牛乳房中藥涂膜劑，涂藥時(shí)間分別在第0、7和14天，然后各組給藥處用兩層紗布覆蓋，外裹一層玻璃紙，再用繃帶固定，貼敷時(shí)間6h。在小鼠右側(cè)去毛的皮膚上進(jìn)行激發(fā)接觸實(shí)驗(yàn)，具體操作：在實(shí)驗(yàn)第14天時(shí)，第1組在各鼠右側(cè)皮膚脫毛處涂抹0.15g的賦形劑，第2組在各鼠右側(cè)皮膚脫毛處涂抹0.1％的2，4-二硝基氯代苯0.15g，第3組各鼠在右側(cè)皮膚脫毛處涂抹0.15g的奶牛乳房中藥涂膜劑。分別進(jìn)行激發(fā)，覆蓋、包裹、固定方法同上，貼敷時(shí)間6h后用溫水清洗干凈給藥部位，分別在去除藥物后24h、48h、72h自然光線下肉眼觀察小鼠皮膚紅斑和水腫等局部皮膚過敏反應(yīng)情況（皮膚出現(xiàn)紅斑或水腫即為皮膚過敏反應(yīng)，致敏發(fā)生率10％以下為無致敏性、10％～30％為輕度致敏性、30％～60％為中度致敏性、60％～80％為重度致敏性、90％以上為極度致敏性），同時(shí)密切觀察其精神狀態(tài)、全身性過敏反應(yīng)癥狀等。

1.4 皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)

1.4.1 一次給藥皮膚刺激實(shí)驗(yàn) 將6只白色家兔隨機(jī)分成兩組，每組3只，分別為完整皮膚組和破損皮膚組（在用藥部位用消毒手術(shù)刀作“#”形劃破，以滲血為度）。在給藥前24h將家兔背部?jī)蓚?cè)用8％硫化鈉脫毛，左右各8cm×8cm，左側(cè)為給藥區(qū)，右側(cè)為對(duì)照區(qū)。給藥區(qū)涂抹奶牛乳房中藥涂膜劑，對(duì)照區(qū)涂不含藥物的賦形劑，用兩層紗布和一層玻璃紙覆蓋，再用繃帶固定，貼敷4h后，除去受試藥物，用溫水清潔給藥部位，在去除藥物后1h、24h、48h、72h自然光線下肉眼觀察涂敷部位有無紅斑和水腫等。

1.4.2 多次給藥皮膚刺激實(shí)驗(yàn) 將6只白色家兔隨機(jī)分成兩組，每組3只，分別為完整皮膚組和破損皮膚組（在用藥部位用消毒手術(shù)刀作“#”形劃破，以滲血為度）。在給藥前24h將家兔背部?jī)蓚?cè)用8％硫化鈉脫毛，左右各8cm×8cm，左側(cè)為給藥區(qū)，右側(cè)為對(duì)照區(qū)。給藥區(qū)涂抹奶牛乳房中藥涂膜劑，對(duì)照區(qū)涂抹不含藥物的賦形劑，用兩層紗布和一層玻璃紙覆蓋，再用繃帶固定，貼敷4h后，除去受試藥物，用溫水清潔給藥部位，在自然光線下肉眼觀察涂敷部位有無紅斑和水腫等。第2天重復(fù)以上操作，連續(xù)1周。

1.5 急性毒性實(shí)驗(yàn)

1.5.1 奶牛乳房中藥涂膜劑對(duì)小鼠半數(shù)致死量（LD50）測(cè)定 取8周齡ICR小鼠30只，隨機(jī)平均分為5組，第1組為空白對(duì)照組，第2組為賦形劑對(duì)照組，第3、4、5組為藥物實(shí)驗(yàn)組。實(shí)驗(yàn)前24h，先將小鼠背部脊柱兩側(cè)用8％硫化鈉溶液進(jìn)行脫毛，面積約1cm×1cm［6-9］。第1組小鼠不涂抹任何藥物；第2組小鼠涂抹不含藥物的賦形劑2次，隔4h一次，每次10mL/kg體重；第3、4、5組小鼠分別涂抹奶牛乳房中藥涂膜劑1次、2次、3次，隔4h一次，每次10mL/kg體重。涂藥后用兩層紗布覆蓋，固定。在給藥前12h和給藥后4h內(nèi)禁食，自由飲水。給藥24h后用溫水洗凈藥物，觀察小鼠被毛、呼吸、活動(dòng)狀態(tài)、糞尿性狀及顏色、鼻、眼、口腔分泌物及死亡情況，連續(xù)7d。

1.5.2 小鼠對(duì)奶牛乳房中藥涂膜劑最大耐受量測(cè)定 取8周齡ICR小鼠30只，隨機(jī)分為5組，每組6只，第1組為空白對(duì)照組，第2組為賦形劑對(duì)照組，第3、4、5組為藥物實(shí)驗(yàn)組［10-12］。實(shí)驗(yàn)前24h，先將小鼠背部脊柱兩側(cè)用8％硫化鈉溶液進(jìn)行脫毛，面積約1cm×1cm。第1組小鼠不涂抹任何藥物；第2組小鼠涂抹不含藥物的賦形劑3次，隔2h一次，每次10mL/kg體重；第3、4、5組小鼠分別涂抹100％濃度的奶牛乳房中藥涂膜劑3次、4次、5次，隔2h一次，每次10mL/kg體重。涂藥后用兩層紗布覆蓋，固定。在給藥前12h和給藥后4h內(nèi)禁食，自由飲水。給藥24h后用溫水洗凈藥物，觀察小鼠的死亡情況或中毒反應(yīng)，連續(xù)7d。

2 結(jié)果

2.1 皮膚過敏實(shí)驗(yàn)

由表1可以看出，2，4-二硝基氯代苯組和奶牛乳房中藥涂膜劑組均無過敏反應(yīng)情況，表明奶牛乳房中藥涂膜劑對(duì)小鼠無致敏性。

表1 皮膚過敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2 皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)

2.2.1 一次給藥皮膚刺激性實(shí)驗(yàn) 從表2看出，在去除藥物后1h，完整皮膚組的給藥區(qū)皮膚均未出現(xiàn)刺激反應(yīng)，與對(duì)照區(qū)皮膚比較無差別；破損皮膚組對(duì)照區(qū)皮膚未出現(xiàn)刺激反應(yīng)，給藥區(qū)皮膚僅在給藥后1h出現(xiàn)輕度刺激，皮膚略紅，24h后刺激反應(yīng)消失。

2.2.2 多次給藥皮膚刺激性實(shí)驗(yàn) 從表3看出，連續(xù)7d給藥，完整皮膚組的給藥區(qū)皮膚均未出現(xiàn)刺激反應(yīng)，與對(duì)照區(qū)皮膚比較無差別；破損皮膚組對(duì)照區(qū)皮膚未出現(xiàn)刺激反應(yīng)，給藥區(qū)皮膚僅在給藥后第3天出現(xiàn)輕度刺激，皮膚略紅。

表2 一次給藥皮膚刺激反應(yīng)情況

表3 多次給藥皮膚刺激反應(yīng)情況

2.3 急性毒性實(shí)驗(yàn)

2.3.1 奶牛乳房中藥涂膜劑對(duì)小鼠LD50測(cè)定 從表4看出，各組小鼠飲食、活動(dòng)、糞尿均正常，未發(fā)現(xiàn)任何的中毒癥狀和死亡情況，未能測(cè)定出其LD50。

表4 奶牛乳房中藥涂膜劑對(duì)小鼠LD50測(cè)定結(jié)果

2.3.2 小鼠對(duì)奶牛乳房中藥涂膜劑最大耐受量測(cè)定 從表5看出，涂抹奶牛乳房中藥涂膜劑4次/d的小鼠，第2天死亡1只，第3天死亡2只，第4天死亡3只；涂抹奶牛乳房中藥涂膜劑5次/d的小鼠，第1天死亡1只，第2天死亡2只，第3天死亡3只。故以每天涂抹3次為最大耐受量，即每只小鼠約0.6 mL/d，以奶牛4個(gè)乳區(qū)同時(shí)用藥為準(zhǔn)，每只奶牛用量為40 mL/d，即每只小鼠的最大耐受量倍數(shù)為562.5倍，較為安全。

表5 小鼠對(duì)奶牛乳房中藥涂膜劑最大耐受量測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)論

皮膚過敏實(shí)驗(yàn)顯示，奶牛乳房中藥涂膜劑無任何皮膚致敏性。單次給藥皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)顯示，涂膜劑對(duì)完整皮膚無刺激，對(duì)破損皮膚僅在給藥后1h出現(xiàn)輕度刺激，皮膚略紅，24h后刺激反應(yīng)消失；多次給藥皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)顯示，涂膜劑對(duì)完整皮膚無刺激，對(duì)破損皮膚僅在給藥后3d出現(xiàn)輕度刺激，皮膚略紅。說明奶牛乳房中藥涂膜劑單次和多次給藥對(duì)完整皮膚無任何刺激性，對(duì)破損皮膚有輕度刺激作用。LD50測(cè)定實(shí)驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)小鼠有任何的中毒癥狀。而臨床用量的562.5倍奶牛乳房中藥涂膜劑最大給藥量實(shí)驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)毒性反應(yīng)，說明其經(jīng)皮給藥是安全的。

［1］李冀，于雪，馬育軒，等.中藥及其有效成分抗炎機(jī)制的研究進(jìn)展［J］.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2010（2）：134-137.

［2］鄧家剛，郭力城.抗炎中藥活性成分的研究進(jìn)展［J］.現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2007，23（2）：201-203.

［3］鄒堂斌，劉娟.中藥抗炎作用及其機(jī)制研究進(jìn)展［J］.中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2006（6）：23-25.

［4］王鋒，李文娜，但家立，等.蒙藥消腫散涂膜劑皮膚刺激和皮膚過敏實(shí)驗(yàn)研究［J］.遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，31（3）：243-244.

［5］吳麗穎.創(chuàng)傷涂膜劑的藥理學(xué)研究及安全性評(píng)價(jià)［D］.石家莊：河北醫(yī)科大學(xué)，2012.

［6］楊赤兵，譚大琦，姜楠，等.創(chuàng)愈靈涂膜劑毒理學(xué)研究［J］.湖北中醫(yī)雜志，2007，29（9）：58-59.

［7］常瑞龍.中藥通絡(luò)搽劑的毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究［D］.蘭州：甘肅中醫(yī)學(xué)院，2014.

［8］張有新.威靈仙的功效與藥理毒理研究［J］.包頭醫(yī)學(xué)，2012，36（4）：196-198.

［9］楊秀斐，余玉木，陳醒言，等.散瘀消腫膏皮膚毒性實(shí)驗(yàn)研究［J］.臨床醫(yī)學(xué)，2006（4）：22-23.

［10］劉光斌，張玉葉，姜芳寧，等.濕疹乳膏皮膚毒性實(shí)驗(yàn)研究［J］.實(shí)用醫(yī)技雜志，2006（6）：861-862.

［11］許麗萍，李培鋒，伊樂，等.嘎木珠爾涂膜劑的長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)研究［J］.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2009（4）：25.

［12］姚會(huì)枝，李吉學(xué)，鄭海娜.冬凌草提取物對(duì)大鼠長(zhǎng)期毒性的實(shí)驗(yàn)研究［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2010（6）：1371-1373.

Study on the Toxicity of Traditional Chinese Medicine Plastics for Dairy Cow Nipple

Zhou Qingmin，Xu Xin，F(xiàn)engWanyu，et al
（HeilongjiangInstitute ofVeterinaryScience，Qiqihar 161006，China）

General and special toxicityoftraditional Chinese medicine plastics for dairycownipple were studied，and its safetyin application was evaluated.Traditional Chinese medicine plastics for cownipple was preliminary assessed thought sensitivity test，cutaneous stimulation of Master single test and multiple dosing，acute toxicity test of median lethal dose and maximum tolerable dose.The hypersensitiveness experiment showed that the traditional Chinese medicine plastics had no cutaneous sensitization.Master single skin stimulus test showed that the plastics had no irritation to complete skin and micro-stimulation to damaged skin one hour after，and the irritant reaction disappeared 24 hour later.Multiple dosing skin stimulus test showed that the plastics had no irritation to complete skin and micro-stimulation to damaged skin 3 days after administration.Presentation of results was that the traditional Chinese medicine plastics had no irritation to complete skin and micro-stimulation to damaged skin.Maximum dosage experiment showed that the toxic reaction had not detected under 562.5 times ofclinic dosage.Conclusion：The preparation is safe in clinic application.

traditional Chinese medicine plastics；hypersensitiveness experiment；acute toxicity

S823.5

A

2095-3887（2015）05-0050-04

10.3969/j.issn.2095-3887.2015.05.014

2015-06-01

周慶民（1964-），男，研究員，大學(xué)本科。研究方向：臨床診療與新獸藥開發(fā)。

徐馨（1983-），女，助理研究員，碩士研究生。研究方向：新獸藥研發(fā)與臨床診療。