裙帶菜內(nèi)生菌Bacillus sp.QD-4發(fā)酵液化學(xué)成分研究

申 麗 秦 云 李 明 王 晶 傅 奕 王鳳舞▲

1.揚(yáng)州大學(xué)醫(yī)學(xué)院，江蘇揚(yáng)州 225001；2.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，山東青島 266109；3.蘇州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與生物科學(xué)學(xué)院，江蘇蘇州 215007

裙帶菜內(nèi)生菌Bacillus sp.QD-4發(fā)酵液化學(xué)成分研究

申 麗1秦 云2李 明1王 晶1傅 奕3王鳳舞2▲

1.揚(yáng)州大學(xué)醫(yī)學(xué)院，江蘇揚(yáng)州 225001；2.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，山東青島 266109；3.蘇州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與生物科學(xué)學(xué)院，江蘇蘇州 215007

目的研究裙帶菜內(nèi)生菌Bacillus sp.QD-4發(fā)酵液的化學(xué)成分。方法采用硅膠柱層析、羥丙基葡聚糖凝膠柱層析、薄層層析、反相高效液相色譜等方法對(duì)QD-4發(fā)酵液乙酸乙酯提取物進(jìn)行分離純化，并采用質(zhì)譜、核磁共振譜等技術(shù)及文獻(xiàn)比對(duì)的方法對(duì)化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定；采用改良Ellman法測(cè)定化合物對(duì)乙酰膽堿酯酶（AChE）的抑制活性。 結(jié)果從QD-4發(fā)酵液乙酸乙酯提取物中分離得到5種化合物：環(huán)-（L-亮氨酸-L-4-羥脯氨酸）（1）、環(huán)-（L-脯氨酸-L-酪氨酸）（2）、環(huán)-（甘氨酸-L-脯氨酸）（3）、環(huán)-（L-脯氨酸-D-酪氨酸）（4）和尿嘧啶（5）。在400 μg/mL濃度下，化合物2和4對(duì)AChE的抑制率分別為（11.62±2.29）%和（5.62±1.63）%。結(jié)論化合物2和4對(duì)AchE具有一定的抑制活性，是Bacillus sp.QD-4發(fā)酵液抑制AChE活性的物質(zhì)基礎(chǔ)。

裙帶菜；內(nèi)生菌；化學(xué)成分；環(huán)二肽；乙酰膽堿酯酶抑制活性

海洋生態(tài)環(huán)境的特殊性（高鹽、高壓、缺氧、低溫、寡營養(yǎng)、閉光）迫使很多海洋生物為了生存而代謝產(chǎn)生一些結(jié)構(gòu)獨(dú)特、生物活性顯著的化學(xué)物質(zhì)[1]，這些海洋天然產(chǎn)物在藥物開發(fā)中占據(jù)重要的位置。海洋無脊椎動(dòng)物、海藻和微生物是海洋天然產(chǎn)物的三大來源，其中海洋微生物最具研究開發(fā)前景。越來越多的研究表明，很多分離自海洋動(dòng)物的活性物質(zhì)是由其共生微生物產(chǎn)生的；營養(yǎng)相對(duì)豐富的海底沉積物、海藻、海綿和紅樹植物是產(chǎn)生新化合物的海洋微生物的主要棲息地或宿主[2-4]。

裙帶菜為多年生大型經(jīng)濟(jì)褐藻，在我國只有一種，主要分布于青島、煙臺(tái)、威海和大連等海區(qū)。裙帶菜含有多種營養(yǎng)物質(zhì)，被稱為“海藻之王”、“長壽菜”；它具有抗腫瘤、抗氧化、降血脂、降膽固醇和降血壓等多種生理活性[5]，還具有潤腸通便、祛斑護(hù)膚、延緩衰老等功效。因此，從裙帶菜內(nèi)共生菌中尋找新藥先導(dǎo)化合物具有很好的可行性。

菌株QD-4是從青島海域的裙帶菜中分離獲得的一株芽孢桿菌（Bacillus sp.），前期篩選發(fā)現(xiàn)，該菌株小量發(fā)酵產(chǎn)物具有顯著的乙酰膽堿酯酶（AChE）抑制活性。因此，對(duì)QD-4進(jìn)行了大量的液體發(fā)酵，其發(fā)酵液經(jīng)乙酸乙酯萃取后，去除溶劑得粗浸膏30 g；采用硅膠柱層析、薄層層析、羥丙基葡聚糖凝膠柱層析、高效液相色譜和重結(jié)晶等方法進(jìn)行粗浸膏的分離純化，最終分離獲得5個(gè)化合物，分別是：環(huán)-（L-亮氨酸-L-4-羥脯氨酸）（1）、環(huán)-（L-脯氨酸-L-酪氨酸）（2）、環(huán)-（甘氨酸-L-脯氨酸）（3）、環(huán)-（L-脯氨酸-D-酪氨酸）（4）和尿嘧啶（5）。AChE抑制活性測(cè)定表明，化合物2和4對(duì)AChE具有一定的抑制活性，而化合物1和3對(duì)AChE沒有明顯作用。

1 儀器與材料

AVANCE 600核磁共振儀（德國Bruker公司），maXis超高分辨飛行時(shí)間質(zhì)譜儀（德國Bruker公司），P200Ⅱ高效液相色譜儀（大連依利特分析儀器有限公司），Agilent 1260高效液相色譜儀（美國安捷倫公司），Hatachi U-3900紫外分光光度計(jì)（日立公司），DU-800紫外/可見分光光度計(jì)（美國貝克曼庫爾特有限公司），XS205D分析天平（梅特勒托利多公司）等。

Sinochrom ODS-AP色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）（大連依利特分析儀器有限公司），羥丙基葡聚糖凝膠（瑞典Pharmacia Biotech公司），柱層析硅膠（200～300目）（青島海洋化工廠分廠），薄層層析板GF254（2.5 cm× 7.5 cm）（上海滬試化工有限公司），制備薄層層析板GF254（20 cm×20 cm）（煙臺(tái)江友硅膠開發(fā)有限公司），氘代氯仿和二甲基亞砜（DMSO）（Aldrich公司），色譜純甲醇（TEDIA公司），乙酰膽堿酯酶、3，5-二硫二硝基苯甲酸、乙酰膽堿碘代物、他克林和十二烷基磺酸鈉均由美國Sigma公司生產(chǎn)；其他試劑為分析純。

菌株QD-4是從青島海域裙帶菜中分離獲得的一株細(xì)菌，根據(jù)其生理生化特征和16S rDNA序列分析，鑒定該菌株為芽孢桿菌（GeneBank號(hào)：KJ809566）[6]。

2 方法與結(jié)果

2.1 菌株發(fā)酵

菌株Bacillus sp.QD-4采用液體發(fā)酵法。將4°C冰箱中保存的菌株轉(zhuǎn)接于LB平板上進(jìn)行活化，再將活化好的菌種接種到裝有200 mL LB營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基的500 mL三角瓶中，置于恒溫振蕩培養(yǎng)箱中180 r/min，37°C培養(yǎng)3 d。

2.2 提取與分離

菌株QD-4液體發(fā)酵產(chǎn)物經(jīng)8000r/min離心10min，將菌體和發(fā)酵液分離。發(fā)酵液經(jīng)乙酸乙酯萃取3次后，合并乙酸乙酯相、去除溶劑得粗浸膏30 g。粗浸膏經(jīng)硅膠柱層析粗分，梯度洗脫[氯仿/甲醇（V/V）100︰0→100∶32]得到6個(gè)極性段組分Fr.1～Fr.6（即：氯仿/甲醇100∶0、100∶1、100∶4、100∶16、100∶32、0∶100）。

Fr.3（即100∶4極性組分，1.2 g）經(jīng)羥丙基葡聚糖凝膠柱層析得到組分Fr.3-2和Fr.3-3，F(xiàn)r.3-2和Fr. 3-3分別經(jīng)高效液相色譜法進(jìn)一步分離純化得到化合物2（23.8 mg）[P200Ⅱ高效液相色譜儀，甲醇∶水（V/ V）=2∶8，0.8 mL/min，230 nm，tR=26.4 min]和化合物3（18.8 mg）[Agilent 1260高效液相色譜儀，甲醇∶水（V/V）= 2∶8，0.8 mL/min，230 nm，tR=4.0 min]。

Fr.4（即100：16極性組分，2.2 g）經(jīng)硅膠柱層析，氯仿/甲醇梯度洗脫得到組分Fr.4-1和Fr.4-2。Fr.4-1經(jīng)羥丙基葡聚糖凝膠柱層析得到的組分Fr.4-1-3，再經(jīng)高效液相色譜法進(jìn)一步分離純化得到Fr.4-1-3-2和化合物1（25.2 mg）[P200Ⅱ高效液相色譜儀，甲醇∶水（V/V）=2∶8，0.8 mL/min，228 nm，tR=29.6 min]。Fr. 4-1-3-2經(jīng)制備薄層層析得到組分Fr.4-1-3-2-1（展開劑：氯仿/甲醇=20∶1，Rf=0.21），F(xiàn)r.4-1-3-2-1再經(jīng)高效液相色譜法進(jìn)一步分離純化得到化合物4（13.4 mg）[P200Ⅱ高效液相色譜儀，甲醇∶水（V/V）=2∶8，0.8 mL/min，228 nm，tR=12.6 min]。Fr.4-2經(jīng)甲醇重結(jié)晶得到的組分Fr.4-2-1，再經(jīng)高效液相色譜法進(jìn)一步分離純化得到化合物5（2.8 mg）[Agilent 1260高效液相色譜儀，甲醇∶水（V/V）=2∶8，0.8 mL/min，254 nm，tR=4.1 min]。

2.3 化合物結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1為白色片狀結(jié)晶。正源高分辨ESI-MS顯示其準(zhǔn)分子離子峰m/z 249.1203[M+Na]+和475.2524 [2M+Na]+，說明該化合物的分子量為226，分子式為C11H18N2O3（calcd for C11H18N2O3Na，249.1210）。1H NMR（600 MHz，DMSO-d6），δ：8.00（1H，s，4-NH），5.08（1H，d，J=3.0 Hz，8-OH），4.39（1H，dd，J=10.8，7.2 Hz，H-6），4.28（1H，m，H-3），4.05（1H，t，J=6.0 Hz，H-8），3.48（1H，dd，J=12.6，4.8 Hz，H-9a），3.22（1H，d，J= 12.6 Hz，H-9b），2.04（1H，dd，J=12.6，6.6 Hz，H-7a），1.93（1H，m，H-7b），1.88（1H，m，H-10a），1.77（1H，m，H-11），1.34（1H，m，H-10b），0.87（3H，d，J=4.2 Hz，H-12），0.86（3H，d，J=4.2 Hz，H-13）。1H NMR（600 MHz，CD3OD），δ：4.52（1H，ddd，J=11.4，6.6，1.2 Hz，H-6），4.46（1H，br t，J=4.2 Hz，H-8），4.17（1H，m，H-3），3.66（1H，dd，J=12.6，4.2 Hz，H-9a），3.43（1H，d，J= 13.2 Hz，H-9b），2.28（1H，m，H-7a），2.09（1H，ddd，J= 26.4，11.4，4.8 Hz，H-7b），1.92（2H，m，H-10a，H-11），1.52（1H，m，H-10b），0.97（3H，d，J=6.6 Hz，H-12），0.96（3H，d，J=6.6 Hz，H-13）。13C NMR（150 MHz，DMSO-d6），δ：170.7（C-5），166.6（C-2），67.1（C-8），57.0（C-6），53.7（C-9），52.5（C-3），37.7（C-10），36.6（C-7），24.0（C-11），22.8（C-12），21.9（C-13）。經(jīng)文獻(xiàn)比對(duì)[7-9]，化合物1被鑒定為環(huán)-（L-亮氨酸-L-4-羥脯氨酸）。

化合物2為白色粉末。正源高分辨ESI-MS顯示其準(zhǔn)分子離子峰m/z 283.1051[M+Na]+和543.2213 [2M+Na]+，說明該化合物的分子量為260，分子式為C14H16N2O3（calcd for C14H16N2O3Na，283.1053）。1H NMR（DMSO-d6，600 MHz），δ：9.20（1H，s，14-OH），7.88（1H，s，4-NH），7.04（2H，d，J=8.4 Hz，H-12，H-16），6.63（2H，d，J=8.4 Hz，H-13，H-15），4.24（1H，t，J= 4.8 Hz，H-3），4.04（1H，dd，J=9.0，7.2 Hz，H-6），3.40（1H，dd，J=12.0，8.4 Hz，H-9a），3.25（1H，m，H-9b），2.92（2H，m，H-10），1.99（1H，m，H-7a），1.72（2H，m，H-8），1.39（1H，m，H-7b）。13C NMR（150MHz，DMSO-d6），δ：168.7（C-5），164.9（C-2），155.7（C-14），130.6（C-12，C-16），126.9（C-11），114.6（C-13，C-15），58.2（C-6），55.9（C-3），44.4（C-9），34.6（C-10），27.7（C-7），21.7（C-8）。經(jīng)文獻(xiàn)比對(duì)[7，10-11]，化合物2被鑒定為環(huán)-（L-脯氨酸-L-酪氨酸）。

化合物3為白色片狀結(jié)晶。正源高分辨ESI-MS顯示其準(zhǔn)分子離子峰m/z 155.0815[M+H]+、177.0628 [M+Na]+和331.1369[2M+Na]+，說明其分子量為154，分子式為 C7H10N2O2（calcd for C7H11N2O2，155.0815）。1H NMR（600 MHz，CDCl3），δ：6.94（1H，s，4-NH），4.10（1H，dd，J=15.6，8.4 Hz，H-6），4.09（1H，d，J=16.2 Hz，H-3a），3.90（1H，dd，J=16.9，4.2 Hz，H-3b），3.64（1H，m，H-9a），3.57（1H，m，H-9b），2.38（1H，m，H-7a），2.06（2H，m，H-8），δ1.93（1H，m，H-7b）。13C NMR（150 MHz，CDCl3），δ：169.8（C-5），163.4（C-2），58.5（C-6），46.6（C-3），45.3（C-9），28.4（C-7），22.4（C-8）。經(jīng)文獻(xiàn)比對(duì)[8，10，12]，化合物3被鑒定為環(huán)-（甘氨酸-L-脯氨酸）。

化合物4為白色粉末。正源高分辨ESI-MS顯示其準(zhǔn)分子離子峰m/z 261.1232[M+H]+、283.1053[M+Na]+和543.2213[2M+Na]+，說明該化合物的分子量為260，分子式為C14H16N2O3（calcd for C14H17N2O3，261.1234）。1H NMR（600 MHz，DMSO-d6），δ：9.34（1H，s，14-OH），8.11（1H，d，J=3.6 Hz，4-NH），6.90（2H，d，J= 8.4 Hz，H-12，H-16），6.67（2H，d，J=8.4 Hz，H-13，H-15），3.91（1H，dd，J=9.0，4.8 Hz，H-6），3.41（1H，m，H-9a），3.19（1H，m，H-9b），2.92（1H，dd，J= 13.8，5.4 Hz，H-10a），2.86（1H，dd，J=9.6，6.0 Hz，H-3），2.76（1H，dd，J=13.8，4.8 Hz，H-10b），1.95（1H，m，H-8a），1.79（1H，m，H-7a），1.57（2H，m，H-7b，H-8b）。經(jīng)文獻(xiàn)比對(duì)[10]，化合物4被鑒定為環(huán)-（L-脯氨酸-D-酪氨酸）。

化合物5為白色粉末。正源高分辨ESI-MS顯示其準(zhǔn)分子離子峰m/z 113.0363[M+H]+和135.0172[M+Na]+，說明該化合物的分子量為112，分子式為C4H4N2O2（calcd for C4H5N2O2，113.0346）。1H-NMR（600 MHz，DMSO-d6），δ：11.01（1H，brs，3-NH），10.84（1H，brs，1-NH），7.38（1H，s，H-6），5.44（1H，s，H-5）。該1HNMR譜與文獻(xiàn)報(bào)道的尿嘧啶基本一致[13]，因此，化合物5被鑒定為尿嘧啶。

2.4 化合物抑制AChE活性

化合物用DMSO溶解，配制成適當(dāng)濃度的溶液（400 μg/mL）。AChE抑制活性測(cè)定參照改良Ellman法[14]。取4支10 mL的試管（1～4）分別標(biāo)注為空白、對(duì)照、樣品、本底放于37°C的恒溫水浴中，向這4支試管中分別添加pH=8.0磷酸緩沖液（2950、2880、2880、2950μL）、乙酰膽堿碘代物20μL、顯色劑DTNB100μL；然后向1、2號(hào)試管中各加入DMSO 100 μL，3、4號(hào)試管中各加入待測(cè)樣品溶液100 μL，2、3號(hào)試管中再各加入70 μL的AChE，混勻、水浴中反應(yīng)4 min 20 s后，再向各試管中分別添加40%的SDS 100 μL終止反應(yīng)，最后在412 nm下測(cè)各試管吸光度值，計(jì)算化合物對(duì)AChE的抑制率[15]。

采用上述方法測(cè)定化合物1～4的AChE抑制活性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在400 μg/mL濃度下，化合物2和4對(duì)AChE具有明顯的抑制活性，其抑制率分別為（11.62± 2.29）%和（5.62±1.63）%，化合物1和3沒有AChE抑制活性。

3 討論

AChE是老年性腦神經(jīng)退行性疾病——阿爾茨海默?。ˋlzheimer disease，AD）的一個(gè)酶抑制劑作用靶點(diǎn)，抑制AChE活性可以明顯改善和緩解患者的癥狀。目前臨床用于治療AD的加蘭他敏是從石蒜科雪花蓮中發(fā)現(xiàn)的生物堿類AChEI，我國自主研發(fā)的石杉?jí)A甲是來源于石杉科蛇足石杉的一種可逆性AChEI。天然產(chǎn)物來源廣泛多樣、結(jié)構(gòu)新穎獨(dú)特，而成為抗AD藥物研發(fā)的重要資源[16-18]。

作為一種大型經(jīng)濟(jì)褐藻，裙帶菜（U.pinnatifida）的葉狀體不但可食用，還可作為中藥使用，其藥用歷史最早見于明代姚可成的《食療本草》。裙帶菜的化學(xué)成分及藥理活性得到廣泛研究，但其內(nèi)生菌的化學(xué)成分研究開展較少[19]。前期實(shí)驗(yàn)中，本課題組從青島海域的裙帶菜中分離獲得7株內(nèi)生真菌和5株內(nèi)生細(xì)菌，其中芽孢桿菌Bacillus sp.QD-4發(fā)酵液能顯著抑制AChE活性[6]。經(jīng)進(jìn)一步研究，從QD-4發(fā)酵液中分離獲得4個(gè)環(huán)二肽化合物（1～4），其中化合物2和4對(duì)AChE具有一定的抑制活性。文獻(xiàn)表明，海洋微生物是環(huán)二肽類化合物的豐富資源，不同結(jié)構(gòu)的環(huán)二肽類化合物，其生物功能顯著不同，具有廣泛的的生物活性[20]。本研究發(fā)現(xiàn)環(huán)二肽化合物具有抑制AChE的活性，這為研究開發(fā)AChE抑制劑提供了新思路。

[1]郭躍偉.海洋天然產(chǎn)物和海洋藥物研究的歷史現(xiàn)狀和未來[J].自然雜志，2008，31（1）：28-32.

[2]Skropeta D，Wei L.Recent advances in deep-sea natural products[J].Nat Prod Rep，2014，31（8）：999-1025.

[3]Blunt JW，Copp BR，Keyzers RA，et al.Marine natural products[J].Nat Prod Rep，2014，31（2）：160-258.

[4]Hu GP，Yuan J，Sun L，et al.Statistical research on marine natural products based on data obtained between 1985 and 2008[J].Mar Drugs，2011，9（4）：514-525.

[5]張文竹，劉紅兵，管華詩.裙帶菜的化學(xué)成分及其生物活性研究進(jìn)展[J].海洋科學(xué)，2009，33（4）：72-75.

[6]秦云，王鳳舞.裙帶菜內(nèi)生菌的分離鑒定及其抑制AChE活性的研究[J].現(xiàn)代食品科技，2015，31（1）：53-58，266.

[7]Rosa SD，Mitova M，Tommonaro G.Marine bacteria associated with sponge as source of cyclic peptides[J].Biomol Eng，2003，20（4-6）：311-316.

[8]Furtado NAJC，Pupo MT，Carvalho I，et al.Diketopiperazines produced by an Aspergillus fumigatus brazilian strain[J].J Braz Chem Soc，2005，16（6B）：1448-1453.

[9]李德海，顧謙群，朱偉明，等.海洋放線菌11014中抗腫瘤活性成分的研究I.環(huán)二肽[J].中國抗生素雜志，2005，8（8）：449-452，468.

[10]Campbell J，Lin Q，Geske GD，et al.New and unexpected insights into the modulation of luxr-type quorum sensing by cyclic dipeptides[J].Chem Biol，2009，4（12）：1051-1059.

[11]熊江，周俊，戴好富，等.多蕊商陸的化學(xué)成分[J].云南植物研究，2002，24（3）：401-405.

[12]尹宏權(quán)，田黎，付紅偉，等.海洋細(xì)菌Bacillus Marinus化學(xué)成分分離和結(jié)構(gòu)鑒定[J].北京理工大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，27（5）：460-462.

[13]普雷士.波譜數(shù)據(jù)表-有機(jī)化合物的結(jié)構(gòu)解析[M].上海：華東理工大學(xué)出版社，2002：237.

[14]柏志全，周麗麗，鄭輝，等.電針穴位對(duì)腦缺血-再灌流大鼠海馬和大腦皮層AChE活性的影響[J].暨南大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版，2002，23（5）：101-104.

[15]董玉潔，樸美子，王懋存，等.長島海洋生物內(nèi)生真菌的分離及抗老年癡呆活性篩選[J].中國食品學(xué)報(bào)，2012，12（4）：43-47.

[16]樓影涵，査曉明，張莉莉，等.來源于天然產(chǎn)物的乙酰膽堿酯酶抑制劑研究進(jìn)展[J].藥學(xué)進(jìn)展，2012，36（9）：385-393.

[17]張赟彬，宋慶，胡劉巖.天然產(chǎn)物中乙酰膽堿酯酶抑制劑的研究現(xiàn)狀[J].上海應(yīng)用技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2011，11（1）：1-6.

[18]侯改芳.海洋天然產(chǎn)物的電噴霧電離質(zhì)譜（ESI-MS）及其乙酰膽堿酯酶抑制活性構(gòu)效關(guān)系分析[D].青島：中國海洋大學(xué)，2013：26-27.

[19]Wang FW.Bioactive metabolites from Guignardia sp，an endophytic fungus residing in Undaria pinnatifida[J]. Chin J Nat Med，2012，10（1）：72-76.

[20]楊子娟，向蘭，邢杰，等.環(huán)二肽的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代藥物與臨床，2009，24（2）：73-81.

Study on chemical constituents of liquid culture of endoPhyte Bacillus sP. QD-4 from Undaria Pinnatifida

SHEN Li1QIN Yun2LI Ming1WANG Jing1FU Yi3WANG Fengwu2▲

1.Medical College,Yangzhou University,Jiangsu Province,Yangzhou 225001,China;2.College of Food Science and Engineering,Qingdao Agricultural University,Shandong Province,Qingdao 266109,China;3.School of Biology and Basic Medical Sciences,Soochow University,Jiangsu Province,Suzhou 215007,China

Objective To study chemical constituents of liquid culture of endophyte Bacillus sp.QD-4 from Undaria pinnatifida.Methods Isolation and purification of EtOAc extract of liquid culture of QD-4 was performed through silica gel chromatograph,gel filtration over Sephadex LH-20,TLC and RP-HPLC and structures of obtained compounds were elucidated by spectral techniques such as mass spectrum,NMR spectra and comparison with literatures.Acetylcholesterase (AChE)inhibitory activity of compounds was evaluated by modified Ellman method.Results Five compounds were isolated from the EtOAc extract of liquid culture of strain QD-4 and identified as cyclo-(L-Leu-L-4-hydroxy-Pro)(1),cyclo-(L-Pro-L-Tyr)(2),cyclo-(Gly-L-Pro)(3),cyclo-(L-Pro-D-Tyr)(4)and uracil(5)respectively. At concentration of 400 μg/mL,compounds 2 and 4 were found to inhibit acetylcholesterase with inhibition rate of (11.62±2.29)%and (5.62±1.63)%respectively.Conclusion Compounds 2 and 4 can inhibit acetylcholesterase to some extent,which is material basis of liquid culture of Bacillus sp.QD-4 for AChE inhibitory activity.

Undaria pinnatifida;Endophyte;Chemical constituent;Cyclic dipeptide;AChE inhibitory activity

R931.77

A

1673-7210（2015）11（a）-0053-04

2015-06-23本文編輯：趙魯楓）

山東省青島市科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（13-1-4-199-jch）；江蘇省揚(yáng)州市社會(huì)發(fā)展科技攻關(guān)項(xiàng)目（YZ2011097）。

申麗（1972-），女，博士，副教授，主要從事天然藥物化學(xué)研究。

▲通訊作者