酶抑制法速測(cè)技術(shù)在農(nóng)藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用

楊靜++王歡++謝偉強(qiáng)++劉麗萍

摘要 介紹了農(nóng)藥殘留速測(cè)技術(shù)，重點(diǎn)介紹了酶抑制法速測(cè)技術(shù)以及其所依據(jù)的速測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)，并對(duì)基于酶抑制法的農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)在檢測(cè)過(guò)程中的注意事項(xiàng)作了闡述，以期為今后的農(nóng)殘速測(cè)提供了參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞 農(nóng)藥殘留；速測(cè)技術(shù)；酶抑制法；速測(cè)儀

中圖分類號(hào) S481.8；TS207.53 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 B 文章編號(hào) 1007-5739（2015）17-0161-01

農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全逐漸成為社會(huì)關(guān)注的熱點(diǎn)問(wèn)題，由于我國(guó)農(nóng)產(chǎn)品市場(chǎng)為 “小農(nóng)戶、大市場(chǎng)”的生產(chǎn)銷售模式，要求農(nóng)產(chǎn)品的殘留檢驗(yàn)結(jié)果必須在較短時(shí)間內(nèi)準(zhǔn)確完成，但是采用傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)室定量檢測(cè)往往不能滿足這一要求。因此，發(fā)展高效、快速的農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)是解決這個(gè)問(wèn)題的最好途徑。

1 農(nóng)藥殘留速測(cè)技術(shù)

現(xiàn)有的農(nóng)藥大致可分為氨基甲酸酯類、擬除蟲(chóng)菊酯類、有機(jī)氯類、有機(jī)磷類等。由于農(nóng)藥的品種繁多、化學(xué)結(jié)構(gòu)復(fù)雜，給農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)提出了更高的要求。農(nóng)藥殘留速測(cè)技術(shù)可分為生物檢測(cè)、化學(xué)檢測(cè)和生化檢測(cè)三大類，目前研究較多的有生物傳感器法、酶抑制法、儀器分析法、活體檢測(cè)法等。其中，酶抑制法是相對(duì)成熟的一種對(duì)特定農(nóng)藥進(jìn)行殘留速測(cè)的技術(shù)，也是目前使用最為廣泛的農(nóng)藥殘留速測(cè)技術(shù)。

2 酶抑制法速測(cè)技術(shù)

酶抑制法的工作原理是基于有機(jī)磷及氨基甲酸酯可特異性地抑制昆蟲(chóng)中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中乙酰膽堿酶（AchE）的活性的原理，在乙酰膽堿酶及乙酰膽堿共存的體系下，加入待測(cè)農(nóng)產(chǎn)品提取液和指示劑，根據(jù)反應(yīng)體系中乙酰膽堿酶活性受到抑制的情況（由指示劑指示），判斷出產(chǎn)品中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥是否超標(biāo)。該法適用于有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的檢測(cè)。

3 酶抑制法所依據(jù)的農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)

目前，農(nóng)藥殘留檢測(cè)不同速測(cè)方法均制定成相關(guān)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，儀器設(shè)備也都是基于這些標(biāo)準(zhǔn)開(kāi)發(fā)，其原理和操作要點(diǎn)可按標(biāo)準(zhǔn)要求執(zhí)行，在此不作重復(fù)，為了方便使用，下面列出現(xiàn)有的農(nóng)藥殘留速測(cè)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法供選用參考。NY/T 448《蔬菜上有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)方法》、GB/T 18625《茶葉中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的簡(jiǎn)易檢驗(yàn)方法——酶抑制法》、GB/T 18630《蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的簡(jiǎn)易檢驗(yàn)方法——酶抑制法》、GB/T 5009.199《蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測(cè)》。

4 基于酶抑制法開(kāi)發(fā)的農(nóng)藥殘留速測(cè)儀器

國(guó)內(nèi)一些儀器生產(chǎn)企業(yè)以相關(guān)國(guó)標(biāo)為基礎(chǔ)建立檢測(cè)方法，并生產(chǎn)了速測(cè)儀器進(jìn)行推廣應(yīng)用，例如上海博納新技術(shù)研究所生產(chǎn)的CL-BⅢ殘留農(nóng)藥測(cè)定儀、深圳市安鑫寶科技發(fā)展有限公司生產(chǎn)的WT-R01智能數(shù)碼型農(nóng)殘速測(cè)儀等。

5 農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)儀檢測(cè)過(guò)程注意事項(xiàng)

5.1 試劑保存與配制

按照使用說(shuō)明的要求，緩沖液和顯色劑可在室溫下進(jìn)行保存，酶試劑和底物要求在0～4 ℃下進(jìn)行冷藏保存；底物和凍干酶粉用緩沖液進(jìn)行配制，顯色劑和緩沖液用純凈水或蒸餾水稀釋，稀釋時(shí)應(yīng)注意各種試劑對(duì)應(yīng)的稀釋液，同時(shí)注意用量[1]。試劑切勿冷凍至結(jié)冰，使用前搖勻，用一瓶取一瓶，防止其他物質(zhì)的污染。并且遵循“只出不進(jìn)”的原則，每次檢測(cè)時(shí)，吸出的試劑不管使用與否都不能放回試劑瓶中。所有用于轉(zhuǎn)移試劑或樣品的器具都要專用并貼上標(biāo)識(shí)[2]。

5.2 培養(yǎng)溫度與時(shí)間

在關(guān)于培養(yǎng)溫度與時(shí)間的問(wèn)題上，關(guān)鍵要保證樣品測(cè)試與對(duì)照測(cè)試保持相同的條件，檢測(cè)結(jié)果才有一致性。不同廠家生產(chǎn)的酶因靈敏度和穩(wěn)定性不同，其對(duì)培養(yǎng)溫度要求也有所不同，另外培養(yǎng)時(shí)間也不同[3]。

5.3 樣品處理

對(duì)于一些葉綠素較高的蔬菜，為減少色素的干擾，可采取整株浸提的方法。有些農(nóng)作物會(huì)產(chǎn)生對(duì)酶有影響的植物次生物，這些次生物容易導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果呈假陽(yáng)性，比如蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、蘑菇、茭白及番茄等，處理這類樣品時(shí)，可采用整株浸提或采用表面測(cè)定法[4]。待測(cè)樣品大小為1 cm×1 cm比較適宜，太大或太小都會(huì)影響提取。另外，由于同一樣品不同部位農(nóng)藥含量也不同，因此如果采用重復(fù)性檢測(cè)時(shí)，最好為同一待測(cè)液，否則可能出現(xiàn)重復(fù)性不好的情況[5]。

5.4 樣品提取

對(duì)樣品進(jìn)行振蕩提取時(shí)，可采用振蕩器，如果手動(dòng)振搖，盡量注意幅度不要大，以免影響結(jié)果。

5.5 儀器操作

在檢測(cè)的過(guò)程中，操作的速度應(yīng)盡量快，即加入底物和上機(jī)測(cè)試的時(shí)間一定要快，且底物的量要一致，否則也會(huì)帶來(lái)誤差。

5.6 結(jié)果判斷

抑制率在40%～50%之間的樣品為可疑超標(biāo)樣，>50%為超標(biāo)樣，≥40%的樣品需重復(fù)檢驗(yàn)2次以上，超標(biāo)樣品應(yīng)用氣相色譜儀或液相色譜儀進(jìn)行精確定量檢測(cè)確認(rèn)。

6 結(jié)語(yǔ)

就目前發(fā)展來(lái)看，農(nóng)產(chǎn)品安全檢測(cè)要體現(xiàn)快速和準(zhǔn)確，因?yàn)檗r(nóng)產(chǎn)品在生產(chǎn)、運(yùn)輸及銷售的各個(gè)環(huán)節(jié)，都可能受到污染，都需要控制安全質(zhì)量，以上介紹的檢測(cè)技術(shù)已經(jīng)廣泛在我國(guó)食用農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)流通領(lǐng)域、質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)部門(mén)和科研院所使用，是農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管一項(xiàng)重要的內(nèi)容。文章所提出的關(guān)于速測(cè)技術(shù)中的一些注意事項(xiàng)，可以作為農(nóng)產(chǎn)品快速檢驗(yàn)的重要依據(jù)，有助于相關(guān)部門(mén)農(nóng)藥殘留檢測(cè)工作的順利開(kāi)展。

7 參考文獻(xiàn)

[1] 馬愛(ài)國(guó).農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)技術(shù)實(shí)務(wù)[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2011.

[2] 王曉飛，周啟星.蔬菜中農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展[J].生態(tài)科學(xué)，2004，23（4）：356-361.

[3] 紀(jì)淑娟，趙麗麗.快速檢測(cè)果菜類蔬菜有機(jī)磷農(nóng)藥殘留結(jié)果分析[J].沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2002，33（1）：14-16.

[4] 李艷莉.蔬菜中有機(jī)磷與氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留酶抑制法快速檢測(cè)技術(shù)[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2015（11）：148.

[5] 劉豐茂.農(nóng)藥質(zhì)量與殘留實(shí)用檢測(cè)技術(shù)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2011.endprint