五指毛桃對阿爾茨海默病小鼠學(xué)習(xí)記憶功能及過氧化損傷的影響

馮勁立，李 想

（1.廣東省中山市中醫(yī)院，廣東 中山528400；2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)熱帶醫(yī)學(xué)研究所，廣東 廣州210000）

阿爾茨海默?。ˋlzheimer's disease，AD）是一種常見于老年人的以進(jìn)行性認(rèn)知功能減退為特征的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。 研究發(fā)現(xiàn)，其發(fā)病與遺傳、免疫功能、炎癥作用、激素水平的改變、細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)改變以及神經(jīng)遞質(zhì)改變等多因素相關(guān)[1]。 由于現(xiàn)有藥物對AD 的治療作用仍不理想，因此尋找新型的AD 治療藥物顯得尤為迫切。 五指毛桃是廣東地區(qū)常用中藥,為桑科技物粗葉榕Ficrs hirta 的根，現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，其具有調(diào)節(jié)免疫功能[2]、抗炎癥反應(yīng)、抗氧化、抗腦組織缺血性損傷[3]等作用。 本實驗利用目前公認(rèn)的AlCl3造模方式制作阿爾茨海默病小鼠模型， 并以此為研究載體， 研究五指毛桃對阿爾茨海默病的治療作用以及相關(guān)機制。 現(xiàn)將實驗結(jié)果報道如下。

1 材料

1.1 動物

NIH 小鼠，60 只，雌性，體質(zhì)量（20±2）g，由廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供， 許可證號：SCXK （粵）2013-002。 標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境下飼養(yǎng)： 溫度20～25 ℃， 濕度40%～60%，自然光照，標(biāo)準(zhǔn)鼠飼喂食。

1.2 藥物及試劑

五指毛桃以蒸餾水煎煮后， 濃縮成濃度為1.8 g/mL 的藥液，間歇滅菌后備用。 按照體表面積換算出小鼠所需給藥劑量， 以蒸餾水配制成相應(yīng)濃度使用。 大、 中、 小劑量為分別為36、18、9 g/（kg·d）。AlCl3（分析純，臺山市粵僑試劑塑料有限公司，批號20101101）。 MDA 測定試劑盒 （南京建成， 批號：20140117）。 SOD 測定試劑盒 （南京建成， 批號：20140301）。

1.3 儀器

LW-2Ⅱ型小鼠水迷宮裝置（中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所）。

2 方法

2.1 實驗分組及給藥

NIH 小鼠隨機分成5 組，分別為模型組、五指毛桃大、中、小劑量組及空白組，除空白組10 只外的其余各組小鼠均以AlCl3（200 mg/kg） 進(jìn)行灌胃造模，1次/d，共40 d[4]；空白組以等體積生理鹽水灌胃。 造模完成后，五指毛桃大、中、小劑量組小鼠分別以各對應(yīng)劑量36、18、9 g/（kg·d）五指毛桃水提液進(jìn)行灌胃，1 mL/次，2 次/d，共20 d；空白組及模型組分別以等體積蒸餾水灌胃。 每組10 只。

2.2 水迷宮測試

水迷宮裝置為80 cm×50 cm×20 cm 黑色有機玻璃槽，內(nèi)設(shè)起點、終點(臺階)及4個盲端。 各組小鼠于末次給藥后2 h 進(jìn)行訓(xùn)練，上、下午各進(jìn)行2 次，每次訓(xùn)練間隔60 s，共3 d，第4 天開始正式測試。正式測試共3 d，1 次/d。 將小鼠面向池壁放入水中，記錄2 min 內(nèi)尋找平臺所需時間。若小鼠入水后2 min 內(nèi)未能找到平臺，則將其置于平臺上并停留10 s，逃避潛伏期記錄為2 min。 到達(dá)盲端的則定為錯誤次數(shù)，收集數(shù)據(jù)后以3 d 平均值進(jìn)行統(tǒng)計。

2.3 SOD 及MDA 的測定

水迷宮測試結(jié)束后， 以斷頸法處死小鼠并獲取全腦，制備成濃度為10%的腦勻漿。 參照試劑盒說明書方法，測定各組腦勻漿的MDA 及SOD 含量。

2.4 統(tǒng)計學(xué)處理

3 結(jié)果

3.1 五指毛桃對AD 小鼠記憶功能的影響

與空白組比較， 模型組小鼠的記憶功能均呈顯著的下降（P＜0.01）。與模型組小鼠比較，五指毛桃各劑量組小鼠潛伏期縮短，錯誤次數(shù)減少（P＜0.05），其中，五指毛桃中、大劑量組小鼠表現(xiàn)更為明顯（P＜0.01）。 結(jié)果見表1。

表1 水迷宮實驗小鼠潛伏期及錯誤次數(shù) （±s，n=10）

表1 水迷宮實驗小鼠潛伏期及錯誤次數(shù) （±s，n=10）

注：與正常組比較*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較#P＜0.05，##P＜0.01。

錯誤次數(shù)（次）3.26±1.26 9.82±4.46**7.32±3.16#5.84±3.32##4.51±2.11##組別正常組模型組五指毛桃小劑量組五指毛桃中劑量組五指毛桃大劑量組給藥劑量（g/kg）--91 8 36潛伏期（s）14.0±3.36 25.0±4.82**23.0±4.84 20.0±4.36##17.0±3.82##

3.2 五指毛桃對AD 小鼠MDA 及SOD 的影響

與空白組比較， 模型組小鼠的MDA 明顯升高，SOD 則明顯下降（P＜0.01）。 與模型組比較，五指毛桃各劑量組小鼠MDA 均有所降低， 其中五指毛桃中、大劑量組小鼠表現(xiàn)尤為明顯（P＜0.01）；與模型組小鼠比較，五指毛桃中、大劑量組小鼠SOD 均有所升高，大劑量組小鼠表現(xiàn)更明顯（P＜0.01）。 結(jié)果見表2。

表2 各組小鼠MDA 及SOD 含量的比較 （±s，n=10）

表2 各組小鼠MDA 及SOD 含量的比較 （±s，n=10）

注：與正常組比較*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較#P＜0.05，##P＜0.01。

SOD（U/mL）169.32±5.86 150.46±7.46**152.18±7.12 155.71±5.37#160.28±6.11##組別正常組模型組五指毛桃小劑量組五指毛桃中劑量組五指毛桃大劑量組給藥劑量（g/kg）--91 8 36 MDA（nmol/mL）10.02±3.36 19.38±4.43**17.84±6.13#15.71±4.36##13.56±5.05##

4 討論

隨著社會逐漸步入老齡化時代，AD 的發(fā)病率逐漸升高，并已悄然成為導(dǎo)致人類死亡的主要疾病之一，嚴(yán)重威脅著老年人的身心健康，影響患者生活質(zhì)量。 AD 的病因及發(fā)病機制至今未完全清楚。 本病多起病于老年期，起病隱匿，呈進(jìn)行性加重，病理過程復(fù)雜。 目前，國內(nèi)外對于AD的研究主要立足于幾個方面，其中“過氧化損傷”備受關(guān)注。 現(xiàn)有的研究證實，過氧化損傷是不同病因?qū)е翧D 的最終途徑[5]，其主要表現(xiàn)為老年斑形成、神經(jīng)纖維纏結(jié)以及神經(jīng)元缺失3 種特征性病理損害[6-7]。MDA 是自由基作用于脂質(zhì)發(fā)生過氧化反應(yīng)的最終產(chǎn)物。 而SOD 則是生物體內(nèi)重要的抗氧化酶，生物體內(nèi)清除自由基的首要物質(zhì)。 其具有對抗與阻斷因氧自由基對細(xì)胞造成的損害，并及時修復(fù)受損細(xì)胞。 二者作為研究藥物“抗氧化損傷”的重要指標(biāo)，已獲得醫(yī)學(xué)界公認(rèn)。

五指毛桃，俗稱牛奶木、土黃芪，素有“南芪”之稱?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，其含補骨脂素、佛手柑內(nèi)酯、β-谷甾醇、鄰苯二甲酸二異丁酯等多種化學(xué)活性成分[8-10]。 其中，五指毛桃當(dāng)中富含的補骨脂素被證實具有類雌激素作用。本實驗結(jié)果顯示， 五指毛桃能有效改善AD 小鼠的記憶功能， 并降低其腦組織中的MDA 含量， 提高SOD活性，從而起到防治AD 的作用。其作用機制可能與其能降低大腦的過氧化損傷有關(guān)，有待進(jìn)一步研究。

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