融水小型豬F1代的血常規(guī)、血生化與電解質(zhì)指標

劉 科，施赫赫，，陳 淦，鄺少松，劉盛來，劉運忠，鐘志勇，郭金彪，耿慶山，唐小江

(1．廣東省醫(yī)學實驗動物中心，佛山 528248;2．廣東貝格生物科技有限公司，佛山 510642;3．廣州醫(yī)藥工業(yè)研究總院，廣州 510240;4．佛山科技學院，佛山 528231;5．廣東省醫(yī)學科學院，廣州 510060)

1 材料和方法

1.1 動物來源

F1代普通級融水小型豬85頭，其中4月齡測定85頭，雌性43頭、雄性42頭;12月齡豬測定36頭，雌雄各半。由廣東貝格生物科技有限公司(廣東省醫(yī)學實驗動物中心小型豬研究基地)提供，實驗動物及實驗操作經(jīng)過廣東省醫(yī)學實驗動物中心倫理委員會批準。

1.2 動物飼養(yǎng)條件

飼養(yǎng)環(huán)境為普通級，濕簾通風系統(tǒng)和局部保溫燈控制舍內(nèi)溫濕度，夏天溫度控制在28℃ ～30℃，冬天溫度控制在16℃ ～20℃。每天定時定量飼喂全價顆粒料，上下午各一次，自由飲水。

1.3 主要儀器

德國賽多利斯電子分析天平(BS223S)，上海安亭科學儀器廠生產(chǎn)的低速大容量離心機(TDL-5-A)，日本光電公司生產(chǎn)的全自動血球計數(shù)儀(CelltacE MEK-7222K)和意大利愛康公司生產(chǎn)的全自動血液生化分析儀(ECHO)，用激光計數(shù)法檢驗。

1.4 方法

1.4.1 血樣采集

采血前禁食12 h，3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，前腔靜脈取血，每只動物采血量為5 mL，用于血液生理生化指標的測定。

1.4.2 血常規(guī)、血生化與電解質(zhì)指標的檢測

使用真空采血管(EDTAK2抗凝劑)取4 mL全血，以全自動血球計數(shù)儀測定白細胞數(shù)(WBC)、中性粒細胞數(shù)(NE)、淋巴細胞數(shù)(LY)、單核細胞數(shù)(MO)、嗜酸粒細胞數(shù)(EO)、嗜堿粒細胞數(shù)(BA)、中性粒細胞比例(NE%)、淋巴細胞比例(LY%)、單核細胞比例(MO%)、嗜酸性粒細胞比例(EO%)、嗜堿性粒細胞比例(BA%)、紅細胞數(shù)(RBC)、血紅蛋白(HGB)、紅細胞比積(HCT)、平均紅細胞體積(MCV)、平均紅細胞血紅蛋白(MCH)、平均血紅蛋白濃度(MCHC)、紅細胞容積分布寬度(RDW)、血小板數(shù)(PLT)、血小板壓積(PCT)、平均血小板體積(MPV)、血小板分布寬度(PDW)22項血常規(guī)指標。

使用真空采血管(促凝劑)取1 mL非抗凝血，離心分離血清，以全自動生化分析儀檢測丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、血清球蛋白(GLOB)、白蛋白/球蛋白(A/G)、總膽紅素(TBIL)、葡萄糖(GLU)、尿素氮(BUN)、肌酐(CR)、膽固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、磷(P5+)、鈣(Ca2+)、鉀(K+)、鈉(Na+)、氯(Cl－)等 22 項血生化、電解質(zhì)指標。

1.4.3 統(tǒng)計方法

實驗數(shù)據(jù)采用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件進行處理。所有測定值均以平均數(shù)(ˉx)和標準差(SD)表示，采用t檢驗，P ＜0.05作為差異顯著性界值，P＜0.01作為差異極顯著性界值。

2 結(jié)果

2.1 血常規(guī)

融水小型豬血常規(guī)指標測定結(jié)果見表1。同月齡雄性與雌性相比，血常規(guī)指標僅RDW有顯著性差異(P＜0.05)。同性別12月齡與4月齡比較，雌性和雄性血常規(guī) WBC、LY、MO、LY%、MO%、RDW、PLT指標均顯著降低(P ＜ 0.05)，NE、EO、NE%、EO%、MCV、MCH、MPV、HCT 指標均顯著升高(P ＜0.05);雌性的HGB、RBC指標顯著升高(P ＜0.05)，其他指標差異不顯著(P ＞0.05)。

表1 融水小型豬4月齡、12月齡血常規(guī)指標Tab．1 The blood parameters of Rongshui miniature pigs in the 4thmonth-old and 12thmonth-old

表2 4月齡、12月齡融水小型豬血生化、電解質(zhì)指標Tab．2 The blood biochemical and electrolyte indices of Rongshui miniature pigs in the 4thmonth and 12thmonth

2.2 血生化與電解質(zhì)

相同月齡的不同性別之間大部分指標差異較小，且大部分差別均在1個標準差之內(nèi)(表2)。但是，相同性別的不同月齡之間的差異非常明顯:在ALT、AST、ALP、CK、LDH 等 5 個酶學指標中，除雌性的CK、LDH差異無顯著性外，12月齡雌性和雄性均顯著低于4月齡(P＜0.05);在蛋白質(zhì)代謝的4項指標，12月齡的總蛋白增加而白球比下降(P ＜ 0.01);在脂質(zhì)代謝的 CHOL，TG，HDL-C，LDL-C等4個指標中，除雄性CHOL下降一個標準差，其他指標均變化不大。12月齡的TBIL、BUN均下降，而CR上升最為顯著(P ＜0.01)，雌性GLU下降顯著(P＜0.01)。電解質(zhì)表現(xiàn)為血Ca2+上升，而血K+下降。

3 討論

血常規(guī)、血清生化和電解質(zhì)指標是病理學、生理學等研究中的重要參考依據(jù)［2］。本研究對4月齡及12月齡融水小型豬的血常規(guī)、血生化和電解質(zhì)指標的測定，反映了幼年與成年融水小型豬的生理生化狀態(tài)。由于影響動物實驗效果的因素包括動物因素、飼養(yǎng)環(huán)境和營養(yǎng)因素、動物實驗技術環(huán)節(jié)因素［3］，本研究在同一環(huán)境下、使用相同的飼料，采用同一種進行采血方法，并使用相同的檢測儀器進行分析。

結(jié)果表明，相同月齡時，兩性別的血常規(guī)指標、血生化和電解質(zhì)的大部分指標差異不大，但不同月齡之間的部分指標差異明顯。隨著月齡的增加，融水小型豬的血常規(guī)指標中，白細胞數(shù)、淋巴細胞比例、血小板數(shù)下降，血紅蛋白含量升高，而紅細胞數(shù)變化不大。吳曙光等［4］對貴州小型豬研究也表明，在不同月齡段多數(shù)血液生化指標有顯著差異(P＜0.05)。血生化指標中的5個酶(ALT、AST、ALP、CK、LDH)12月齡均下降;反應蛋白代謝功能的總蛋白上升，而白球比下降，提示細胞免疫增強;反應脂質(zhì)代謝的4個指標差異很小，提示融水小型豬可能適合用于復制脂質(zhì)代謝紊亂如高血脂癥疾病模型。肌酐(CR)是反應腎功能的指標，總膽紅素(TBIL)是反應膽汁代謝的指標，融水小型豬不同性別之間的差異很小，但12月齡的BUN和TBIL顯著低于4月齡，這與人的情況非常相似。血清電解質(zhì)的性別差異很小，12月齡的血鈣升高而血鉀下降，但變化均在1個標準差范圍內(nèi)。

融水小型豬是否適合作為人類疾病動物模型呢?為便于比較，我們參考國內(nèi)外文獻［5－10］，制作了表3和表4。表3可見，成年融水小型豬的白細胞數(shù)與哥廷根豬類似，比較接近人類，而4月齡融水小型豬的白細胞較高，與中國農(nóng)大小型豬、西藏小型豬、五指山小型接近;在紅細胞數(shù)方面，融水小型豬比另外4種小型豬均小，更接近人類。血紅蛋白和血小板則與其他小型豬、比格犬和大鼠接近，在人類正常值范圍內(nèi)。

從表4可見，成年融水小型豬的絕大部分生化與電解質(zhì)指標與人類正常值范圍非常接近。其中22項生化、電解質(zhì)指標中，有11.5項(AST、ALT、TP、ALB、A/G、BUN、CHOL、TG、雄性的 GLU、K+、Na+、Cl－)在人類正常值范圍，占52.3%;另外7.5項指標(ALP、GLOB、TBIL、CR、HDL-C、LDH-C、雌性的GLU、Ca2+)非常接近人類正常值范圍，占34.1%;兩者合計達86.4%(1922)。另外3項指標(CK、LDH、P5+)也在人類正常值范圍最大值的2.5倍以內(nèi)。而哥廷根小型豬雖然大部分指標也在或接近人類正常值范圍，占64.7%(1117)，3項指標(ALT、LDH、P5+)在人類正常值范圍最大值的2.5倍以內(nèi)，但有三項指標CK、TBIL、CR分別超過人類正常值范圍最大值10倍、20倍、500倍以上，且其標準差特別大，不適合作為涉及心(CK)、肝(TBIL)、腎(CR)等相關指標的疾病模型。中國農(nóng)大小型豬的大部分指標也在或接近人類正常值范圍，占 66.7%(1218)，5 項指標(ALT、ALP、P5+，K+、雌性的AST、LDH-C)在人類正常值范圍限值2倍以內(nèi)，但CK超過人類正常值范圍限值5倍以上，且檢測除了雄性AST外，4個心肌酶均不在人類正常值范圍。我們獲得的西藏小型豬和五指山小型豬檢測項目較少，大部分指標也在或接近人類正常值范圍，但反映CK、GLU遠低于人類。

總之，從本文獲得的資料看，融水小型豬的血常規(guī)、血生化和電解質(zhì)指標多數(shù)接近人類，數(shù)據(jù)標準差小，且月齡變化與人類相似，部分指標顯著優(yōu)于哥廷根等小型豬，提示融水小型豬具備培育成實驗用小型豬的優(yōu)越條件。

表3 融水小型豬與其他小型豬、犬、大鼠、人的血常規(guī)指標比較Tab．3 Comparison of blood parameters among Rongshui miniature pigs，dog，rat，human and other minipigs

表4 融水小型豬與其他小型豬、犬、大鼠、人的血液生化指標比較Tab．4 Comparison of blood biochemical indices among Beige miniature pigs，dog，rat，human and other minipigs

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