豬繁殖與呼吸綜合征弱毒疫苗的免疫與抗體監(jiān)測分析

李明波 宋忠旭 盧琴 董斌科 孫華 雷斌 陳友文 段茂春 梅書棋

摘要：為探討湖北某試驗(yàn)豬場豬群PRRS減毒活疫苗的免疫效果，選擇HP-PRRS弱毒疫苗（JXA1-R株）對20頭35日齡仔豬進(jìn)行初步免疫試驗(yàn)，4周后采血進(jìn)行PRRS抗體檢測；另采集未免疫疫苗的20、30、60、70、120日齡階段豬只血樣194份，免疫疫苗的基礎(chǔ)母豬群血樣265份和配種前后備豬血樣65份，分析其血清PRRS抗體陽性率、S/P均值和CV值。結(jié)果顯示，20頭35日齡仔豬免疫疫苗后4周抗體陽性率達(dá)85%，S/P均值和CV值分別為1.55和30%，初步表明疫苗免疫效力良好；未免疫疫苗的豬只在20～60日齡時抗體值隨母源抗體逐步下降，在60日齡時達(dá)到最低為33%，70～120日齡時抗體值由85%上升到96%，說明此生長階段已感染PRRSV；全部母豬群和后備豬抗體陽性率分別為87%和92%，S/P值>2.5的比例為9.1%，表明疫苗總體免疫穩(wěn)定，并判斷該場為PRRSV感染陽性穩(wěn)定場。通過試驗(yàn)研究，旨在為該場科學(xué)防控PRRS提供臨床依據(jù)。

關(guān)鍵詞：豬繁殖與呼吸綜合征；弱毒疫苗；免疫；抗體監(jiān)測

中圖分類號：S852.4 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2015）21-5359-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.21.039

Study on Immunization and Antibody Monitoring of Attenuated PRRS Live Vaccine

LI Ming-bo，SONG Zhong-xu，LU qin，DONG Bin-ke，SUN Hua，LEI Bin，CHEN You-wen，DUAN Mao-chun，MEI Shu-qi

（Institute of Animal Husbandry and Veterinary Science，Hubei Academy of Agricultural Sciences，Wuhan 430064，China）

Abstract：In order to investigate the immune effects of attenuated PRRS live vaccine in a pig farm in Hubei， 20 piglets of 35-day-old were selected to get vaccination by hp-PRRS attenuated vaccine （JXA1-R strain）. After four weeks the blood antibody against PRRS were tested. Simultaneously， 194 samples of unvaccinated piglets at 20， 30， 60， 70， 120 days stage，265 samples of breeding sows and 65 samples of gilts were collected for serum antibody positive rate of PRRS， S/P mean and CV values. The results showed that the antibody-positive rate of the 20 piglets was 85% after four weeks， the S/P mean and CV values were 1.55 and 30%， respectively. It indicted that the vaccine had good efficacy. The antibody value of the unvaccinated piglets at 20-60 days of age gradually declined with the maternal antibody and reached a minimum of 33% at 60 days of age. 70-120 days the antibody positive rates were ranged from 85% to 96%， which indicated that this stage had been infected with PRRSV. The antibody positive rates of breeding sows and gilts were 87% and 92%， respectively. The ratio of S/P value more than 2.5 was 9.1%， which indicated that the vaccination was overall stable and the farm was determined positive stable farm infected PRRSV. The experiment was aimed at provide a clinical reference for scientific PRRS prevention and control.

Key words： porcine reproductive and respiratory syndrome； attenuated vaccine； immunity； antibody monitoring

豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）引起的高度接觸感染性傳染病，且具有較強(qiáng)的免疫抑制性[1]。該病主要引起初胎和妊娠后期母豬的流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、高熱等；哺乳期仔豬、保育豬最易感染出現(xiàn)臨床癥狀或者繼發(fā)其他細(xì)菌性疾病如鏈球菌、副豬嗜血桿菌、多殺性巴氏桿菌等，病死率較高，以出現(xiàn)發(fā)熱、眼結(jié)膜水腫、呼吸衰竭、關(guān)節(jié)腫脹、間質(zhì)性肺炎等綜合癥狀為主。豬繁殖與呼吸綜合征病毒可經(jīng)呼吸道、胎盤、公豬精液等感染傳播。

中國目前一些養(yǎng)殖場或地區(qū)主要流行北美型豬繁殖與呼吸綜合征病毒[2-4]，分類學(xué)上屬于以JX-A1和HuN4等為代表的亞群4變異毒株[5]。PRRS引發(fā)的臨床癥狀以及導(dǎo)致的損失與感染的PRRSV毒力大小、豬群免疫狀態(tài)、豬群所處生長階段、繼發(fā)和協(xié)同感染的病原以及環(huán)境和管理水平有關(guān)。目前學(xué)術(shù)界和業(yè)界對于研究如何控制豬繁殖與呼吸綜合征取得了一定進(jìn)展，其中可行的方法包括種豬群閉群200d凈化技術(shù)、后備豬的血清馴化、嚴(yán)格的生物安全與豬群分類別飼養(yǎng)模式、減群和清群措施、合理利用抗生素控制細(xì)菌病以及活疫苗免疫技術(shù)等[6，7]。

已經(jīng)證明中和抗體在預(yù)防PRRSV感染和病毒清楚中扮演重要角色[8]，臨床上合理有效的利用疫苗來控制PRRS可以取得顯著效果，能夠減少病毒傳播及病理損傷，改善生產(chǎn)性能及降低發(fā)病率和死亡率等[9]。研究表明，疫苗毒與野毒基因序列同源性越高，豬群免疫保護(hù)效果越好，然而PRRSV的持續(xù)變異特點(diǎn)也給當(dāng)前防控PRRS和疫苗研發(fā)帶來挑戰(zhàn)[10]。關(guān)于豬群是否使用PRRS疫苗，使用哪種疫苗以及怎樣使用疫苗（免疫方式和時機(jī)）應(yīng)由豬群本身的感染狀況、豬群感染的優(yōu)勢毒株、疫苗本身特點(diǎn)以及場內(nèi)的飼養(yǎng)管理、生物安全水平來確定。

評估豬群PRRSV的感染狀態(tài)、了解其感染的優(yōu)勢毒株是控制PRRS的前提和基礎(chǔ)。未免疫的豬群可以根據(jù)豬只PRRSV抗體血清效價來判斷本身所處的PRRSV感染狀態(tài)，一般可分為陰性豬場、穩(wěn)定不活動場、穩(wěn)定活動場、不穩(wěn)定場[11]；而對于免疫豬群則可以通過分析各生產(chǎn)階段的抗體S/P值及其離散度變化，并結(jié)合場內(nèi)PRRSV抗原的檢測來評估PRRSV是否活躍及其活躍時間。

本試驗(yàn)的豬場為湖北省某大白豬原種豬場，通過前期對疑似發(fā)病豬組織樣的檢測分析，發(fā)現(xiàn)本地區(qū)存在變異HP-PRRSV（高致病性PRRSV）的感染和流行，因此在防控PRRS上選擇采用高致病性減毒活疫苗免疫技術(shù)和藥物預(yù)防相結(jié)合的綜合防控方案。為較好評估本場PRRS疫苗免疫效果和病毒的感染狀態(tài)（豬只血清抗體消漲規(guī)律），通過疫苗初步免疫試驗(yàn)及對2015年各類豬群的血清樣本的檢測分析研究，旨在為本場和本地區(qū)有效綜合控制PRRS提供臨床和實(shí)踐依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 豬只血清樣品 采集試驗(yàn)豬場2015年各飼養(yǎng)階段仔豬、育肥豬、7～8月齡選留配種前后備種豬、全部基礎(chǔ)母豬的血清樣本（前腔靜脈采血，EDTA-Na2抗凝）。

1.1.2 免疫疫苗 本試驗(yàn)豬場所免疫用疫苗為廣東某公司生產(chǎn)的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征弱毒疫苗（JXA1-R株）。

1.1.3 豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測試劑盒

豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測試劑盒為IDEXX公司產(chǎn)品（IDEXX-PRRS X3）。

1.2 方法

1.2.1 豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗的免疫試驗(yàn) 為初步確定高致病性豬繁殖與呼吸綜合征弱毒疫苗（JXA1-R株）疫苗免疫效果，選取20頭哺乳期健康仔豬（不同4窩，每窩5頭）在35日齡時免疫疫苗，免疫劑量為1頭份/頭。分別在免疫前1 d和免疫后1個月采血檢測其抗體水平。

1.2.2 豬群疫苗免疫程序 根據(jù)試驗(yàn)場內(nèi)實(shí)際生產(chǎn)情況，制定PRRS疫苗免疫程序如下：母豬產(chǎn)后14 d和配種前后備豬免疫一次疫苗，免疫劑量為1頭份/頭；仔豬、育肥豬、公豬均不免疫。

1.2.3 豬只PRRS抗體水平的檢測及結(jié)果判定 按照IDEXX-PRRS X3抗體檢測試劑盒說明書進(jìn)行ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）抗體水平檢測，結(jié)果判定：S/P值≥0.4判定為抗體陽性；S/P值<0.4判定為抗體陰性。

1.2.4 數(shù)據(jù)分析 分別計(jì)算PRRS抗體陽性S/P值平均數(shù)和CV值（離散度），CV=（標(biāo)準(zhǔn)偏差/樣本平均值）×100%。

2 結(jié)果與分析

2.1 豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（JXA1-R株）的免疫試驗(yàn)結(jié)果

PRRS活疫苗（JXA1-R株）免疫前后的抗體水平見表2。由表2可知，試驗(yàn)的20頭仔豬在35日齡時的PRRS抗體陽性率為10%，免疫疫苗后4周即65日齡時的抗體陽性率為85%，且抗體離散度低，初步表明該疫苗可穩(wěn)定提高豬只的抗體水平，疫苗免疫效果良好。

2.2 哺乳至育肥階段豬只PRRS抗體水平檢測結(jié)果

2015年2～4月分批次采集、檢測了20～30日齡哺乳期仔豬血樣96份，60日齡育肥前期豬只血清39份，120日齡育肥中期豬只血清25份，檢測結(jié)果見表3。結(jié)果表明仔豬豬繁殖與呼吸綜合征抗體水平與母源抗體直接相關(guān)，從20～60日齡抗體監(jiān)測結(jié)果看，PRRS抗體值呈現(xiàn)梯度下降，且抗體陽性S/P值均小于2.0，未有大于2.5的個體值（PRRS野毒感染抗體），表明所檢測的生長階段豬只未發(fā)生PRRSV的垂直感染（或者母豬本身不帶毒）。而在70～120日齡階段時抗體值升高，且在120日齡時檢測的抗體陽性S/P均值大于2.0，其中大于2.5的個體值占40%（10/25），表明該試驗(yàn)場育肥前期豬群存在PRRSV感染的風(fēng)險，由于HP-PRRS弱毒疫苗（JXA1-R株）免疫后14 d可產(chǎn)生中和抗體[12]，因此推斷需要針對斷奶后豬只PRRS弱毒疫苗的免疫，從而減輕野毒感染后造成的生產(chǎn)損失。

2.3 全部基礎(chǔ)母豬群、后備豬群PRRS抗體水平的檢測結(jié)果

2015年2～4月分批次共采集、檢測了全部基礎(chǔ)母豬（妊娠前期、妊娠中后期、哺乳—空懷期）的血清樣本量分別為47份、138份、80份；免疫PRRS弱毒活疫苗4周后的后備豬血樣共65份，檢測結(jié)果見表4。結(jié)果表明，該試驗(yàn)場全部基礎(chǔ)母豬群PRRS抗體陽性率為87%（231/265），其中免疫疫苗后抗體S/P值>2.5（PRRS野毒感染抗體）的個體共24頭，比例為9.1%，而陽性抗體值過高的個體中18頭為1～3胎母豬，表明青年母豬較成年母豬易感染PRRS野毒；后備豬群體免疫PRRS弱毒疫苗后抗體陽性率為92%，其抗體值未出現(xiàn)異常個體（S/P>2.5的），表明后備豬群體弱毒疫苗免疫穩(wěn)定、馴化措施有效。

3 小結(jié)與討論

PRRS弱毒疫苗由于誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的時間較長兼具體液免疫和細(xì)胞免疫，具有較強(qiáng)的免疫優(yōu)勢而備受關(guān)注。疫苗毒與田間野毒基因序列的同源性大小、弱毒疫苗的安全性和穩(wěn)定性（減毒是否徹底）、疫苗免疫后的抗體產(chǎn)生時間及持續(xù)時間、免疫方式和時機(jī)等是影響PRRS活疫苗免疫效果的主要因素，另外豬群整體的健康水平及是否存在其它免疫抑制性疾病等也會有不同程度的影響。相關(guān)臨床研究表明，以JXAI-R株等為代表的第4亞群PRRS活疫苗相較經(jīng)典毒株能較快誘導(dǎo)豬體的免疫應(yīng)答——疫苗株產(chǎn)生的中和抗體時間和效價明顯強(qiáng)于經(jīng)典疫苗株，且豬群帶毒現(xiàn)象（疫苗產(chǎn)生的病毒血癥）隨著時間的推移自然消除時間快，疫苗的安全性較高[12，13]。本研究通過對35日齡仔豬的活疫苗免疫試驗(yàn)，結(jié)果其在免疫后4周抗體陽性率達(dá)85%，抗體值在2.0≥S/P≥0.4，且CV值（離散度）低，表明該疫苗免疫效果良好。

正如前文所述，了解豬群的感染狀態(tài)是合理控制PRRS的前提和基礎(chǔ)。筆者通過對哺乳——育肥階段的未免疫豬只、全部基礎(chǔ)母豬和配種前后備豬的免疫群體中PRRS抗體的檢測分析，表明該試驗(yàn)豬場為PRRSV感染陽性穩(wěn)定場，但臨床上育肥前期（70～120日齡）豬只仍存在較大的野毒感染風(fēng)險，這與缺乏母源抗體保護(hù)和自身未免疫疫苗有關(guān)；母豬群和后備豬群體PRRS活疫苗總體上免疫穩(wěn)定（抗體值主要在2.5≥S/P≥0.4，且離散度低于60%為免疫穩(wěn)定群）[14]，其中部分母豬可能在妊娠期接觸野毒而呈現(xiàn)抗體值的升高，這或與PRRS疫苗免疫抗體的衰減及疫苗毒對野毒的保護(hù)效率有關(guān)。

目前PRRS主要以持續(xù)性感染、亞臨床感染、免疫抑制和繼發(fā)細(xì)菌感染為流行特點(diǎn)，給臨床防控帶來困難。疫苗免疫作為防控PRRS的技術(shù)措施之一，不能完全清除病毒，養(yǎng)殖場需要統(tǒng)計(jì)分析各飼養(yǎng)周期豬群生產(chǎn)成績（如母豬窩平產(chǎn)活仔數(shù)、育成率、育肥豬呼吸道疾病的發(fā)病率等）和抗體監(jiān)測結(jié)果來綜合評判疫苗的免疫效果，同時也應(yīng)加強(qiáng)生物防范措施和飼養(yǎng)管理來防控該病。另外，為深入了解該病的致病機(jī)制和免疫機(jī)理，加強(qiáng)地區(qū)PRRSV分子流行病學(xué)調(diào)查、監(jiān)測病原變異趨勢的研究也是必要的。

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