丹皮酚對心梗后心室重構(gòu)大鼠心肌組織TGF-β1表達的影響*

時召平，周曉慧，徐 倩，趙靜怡，曹 凱

（承德醫(yī)學院，河北承德 067000）

基礎(chǔ)醫(yī)學

丹皮酚對心梗后心室重構(gòu)大鼠心肌組織TGF-β1表達的影響*

時召平，周曉慧，徐 倩，趙靜怡，曹 凱△

（承德醫(yī)學院，河北承德 067000）

目的：探討丹皮酚（Pae）對急性心肌梗死（AMI）后心室重構(gòu)大鼠心肌組織TGF-β1表達的影響。方法：SD大鼠隨機分為假手術(shù)組、模型組、Pae組和卡托普利組。采用結(jié)扎大鼠左冠狀動脈前降支的方法建立AMI大鼠模型，Pae組大鼠腹腔注射Pae（16.0mg/kg），卡托普利組大鼠灌胃給予卡托普利（10.0mg/kg），連續(xù)給藥4周。分別檢測各組大鼠的左心指數(shù)（LVWI）、左室膠原容積分數(shù)（CVF），免疫組化法檢測心肌組織TGF-β1蛋白的表達。結(jié)果：與模型組大鼠比較，Pae組、卡托普利組大鼠的LVWI、CVF和心肌組織TGF-β1蛋白的表達明顯降低（P＜0.01）。結(jié)論：Pae改善大鼠心室重構(gòu)的機制可能與其下調(diào)TGF-β1蛋白的表達有關(guān)。

丹皮酚；心室重構(gòu)；轉(zhuǎn)化生長因子-β1

心梗后，一方面壞死組織被疤痕組織代替，發(fā)生修復性纖維化；另一方面發(fā)生心室重構(gòu)，而心室重構(gòu)是導致慢性心力衰竭發(fā)展的重要因素。因此，延緩或阻止心室重構(gòu)是預防和治療心肌梗死發(fā)展為心力衰竭的關(guān)鍵。丹皮酚（Pae）具有抑制脂質(zhì)過氧化、抗炎鎮(zhèn)痛等藥理作用，臨床多用于心腦血管、炎癥及免疫系統(tǒng)等疾病的治療［1］。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，丹皮酚可在一定程度上改善大鼠急性心肌梗死（AMI）后心室重構(gòu)及心功能［2］。研究發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）能使心肌成纖維細胞分化為肌纖維母細胞，從而促進膠原的合成，在膠原代謝的生理及病理過程中起重要作用。本研究旨在探討Pae是否通過干預TGF-β1表達改善AMI后心室重構(gòu)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物和試劑 健康雄性SD大鼠，體重220-240g，北京華阜康生物科技股份有限公司，許可證號SCXK（京）2009-0004。丹皮酚注射液，寧波天真制藥有限公司；卡托普利片，北京亞寶生物藥業(yè)有限公司；TGF-β1兔抗多克隆抗體（Santa Cruz）；SP試劑盒、DAB顯色液，北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.2 模型建立及分組 結(jié)扎左冠狀動脈前降支制備大鼠AMI模型，以心電圖出現(xiàn)ST段抬高1/2以上視為模型建立成功。術(shù)后存活大鼠隨機分為Pae（16mg/kg/d）組、模型組、卡托普利（10mg/kg/d）組和假手術(shù)組4組，每組8只?？ㄍ衅绽M灌胃給藥、Pae組腹腔注射給藥，1次/d，連續(xù)給藥4周。

1.3 取材及檢測左心指數(shù) 大鼠稱體重后麻醉處死，摘取心臟，稱量全心重（HW）和左心室重量（LVW），計算左心指數(shù)（LVWI=LVW/HW）。取左心室梗死區(qū)包埋，10%福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋備用。

1.4 Masson染色 參考文獻［3］的方法操作并加以改進。光鏡下觀察，膠原纖維呈藍色、心肌纖維呈紅色。采用Image-Pro Plus 6.0圖像分析軟件進行分析，每張切片（×200）隨機選取10個梗死區(qū)視野進行觀察并拍照，測定心肌膠原容積分數(shù)［CVF=膠原面積/（膠原面積+心肌面積）］作為心肌纖維化指標。

1.5 免疫組化法檢測TGF-β1蛋白的表達 采用SP免疫組化染色法，以細胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為TGF-β1蛋白陽性反應。采用Image-Pro Plus 6.0圖像分析軟件進行分析，每張切片（×200）隨機選取10個梗死區(qū)視野進行觀察并拍照，測量平均光密度值（累積光密度值/染色區(qū)域的面積）。

1.6 統(tǒng)計分析 采用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計處理，多組間計量資料的比較采用單因素方差分析。

2 結(jié)果

2.1 Pae對AMI大鼠LVWI的影響 與假手術(shù)組相比，模型組大鼠的LVWI明顯升高（P＜0.01）；與模型組相比，Pae組和卡托普利組大鼠的LVWI明顯降低（P＜0.01）。提示，Pae可減輕AMI導致的心肌肥厚。見附表：

附表 各組大鼠的LVWI、CVF和心肌組織TGF-β1蛋白的表達（±s，n=8）

附表 各組大鼠的LVWI、CVF和心肌組織TGF-β1蛋白的表達（±s，n=8）

與假手術(shù)組比較：*P＜0.01；與模型組比較：#P＜0.01

組別 LVMI CVF TGF-β1蛋白表達假手術(shù)組 0.28±0.03 16.49±5.78 0.11±0.02模型組 0.34±0.02*48.32±8.63*0.27±0.03*Pae組 0.30±0.02#20.81±5.57#0.16±0.01*#卡托普利組 0.31±0.05#20.56±3.87#0.14±0.02*#

2.2 Masson染色結(jié)果 假手術(shù)組大鼠心肌Masson染色未見明顯病理改變，僅有心肌纖維輕微增生；模型組大鼠心肌纖維排列紊亂且間隙變窄，間質(zhì)結(jié)締組織增生嚴重，部分結(jié)締組織凝固性壞死，心肌細胞排列紊亂、部分細胞核消失，梗死區(qū)邊緣有癜痕出現(xiàn)；Pae組和卡托普利組大鼠心肌組織的病理變化有不同程度的減輕，梗死區(qū)有少量心肌細胞壞死和輕微炎性浸潤，纖維結(jié)締組織與模型組比較明顯減輕。與假手術(shù)組相比，模型組大鼠的CVF值明顯升高（P＜0.01）；與模型組相比，Pae組和卡托普利組大鼠的CVF值明顯降低（P＜0.01）。見附表。

2.3 Pae對AMI大鼠心肌組織TGF-β1蛋白表達的影響TGF-β1陽性表達定位于心肌細胞的胞漿，為棕黃色顆粒狀。與假手術(shù)組比較，模型組大鼠心肌TGF-β1蛋白的表達明顯升高（P＜0.01）；與模型組比較，Pae組、卡托普利組大鼠心肌TGF-β1蛋白的表達明顯降低（P＜0.01）。見附表。

3 討論

心肌梗死后導致的心室重構(gòu)包括心腔擴大、心肌細胞肥大、心肌纖維化、胞外基質(zhì)沉積以及神經(jīng)激素、細胞因子表達的變化等，最終導致心力衰竭的發(fā)生發(fā)展［4］。因此，研究心室重構(gòu)的機制及尋求有效延緩或阻止心室重構(gòu)的方法對心力衰竭的治療具有重要意義。

AMI后，梗死區(qū)心壁變薄、心腔逐漸擴張，非梗死區(qū)心肌反應性肥厚，導致LVMI和心室重構(gòu)參數(shù)發(fā)生變化，因此，LVMI和心室重構(gòu)參數(shù)以及梗死面積的大小是直接反映心肌梗死后心室重構(gòu)的指標［5］。本研究中模型組大鼠LVMI的改變提示發(fā)生了心室重構(gòu)；并且Masson染色顯示，AMI大鼠心肌間質(zhì)纖維增生。Pae干預后，CVF降低、心肌間質(zhì)纖維化程度減輕，提示Pae對AMI所致心肌纖維化有明顯的抑制作用。

Nian等［6］、Lijnen等［7］均報道，心肌梗死后心室肌組織TGF-β1的表達水平明顯升高，并且，TGF-β1mRNA的升高先于細胞外細胞基質(zhì)蛋白mRNA的升高。用抗TGF-β1抗體中和TGF-β1可以抑制細胞外基質(zhì)蛋白的表達，并抑制心肌纖維化的發(fā)生；說明細胞外基質(zhì)蛋白的增加和心肌纖維化可由TGF-β1介導，而阻斷TGF-β1可抑制心肌梗死后心肌纖維化的發(fā)生。因此，針對TGF-β1及其信號轉(zhuǎn)導系統(tǒng)的治療可能成為心肌纖維化治療的新靶點。本研究也證實了大鼠心肌梗死后心肌組織TGF-β1蛋白表達明顯增加，而應用Pae可降低TGF-β1蛋白的表達。

綜上所述，Pae不僅能降低大鼠AMI后左心指數(shù)、抑制心室重構(gòu)，同時還能降低心肌組織TGF-β1蛋白的表達，表明Pae可減輕梗死后大鼠心肌纖維化及改善AMI后室重構(gòu)，其機制可能與下調(diào)TGF-β1蛋白的表達有關(guān)。

［1］楊正生，彭振輝，姚青海，等.丹皮酚的藥理作用研究進展［J］.中國藥物與臨床，2011，11（5）：545-547.

［2］趙靜怡，張樹峰，徐倩，等.丹皮酚對大鼠急性心肌梗死后心室重構(gòu)及心功能的影響［J］.承德醫(yī)學院學報，2013，30（3）：194-196.

［3］王伯沄，李玉松，黃高昇.病理學技術(shù)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2000.61-75.

［4］Tiyyagura SR， Pinney SP. Left ventricular remodeling after myocardial infarction： past， present， and future［J］ . Mt Sinai J Med， 2006， 73（6）： 840-851.

［5］Kitayama J， Faraci FM， Gunnett CA， et al. Impairment of dilator responses of cerebral arterioles during diabetes mellitus： role of inducible NO synthase［J］. Stroke， 2006， 37（8）： 2129-2133.

［6］Nian M， Lee P， Khaper N， et al. Inflammatory cytokines and postmyocardial infarction remodeling［J］. Circ Res， 2004， 94 （12）：1543-1553.

［7］Lijnen PJ， Petrov VV， Fagard RH. Induction of cardiac f ibrosis by transforming growth factor-beta （1）［J］. Mol Genet Metab， 2000，71（1-2）： 418-435.

EFFECTS OF PAEONOL ON TGF-B1 EXPRESSION IN MYOCARDIAL TISSUE OF VENTRICULAR REMODELING RATS AFTER ACUTE MYOCARDIAL INFARCTION

SHI Zhao-ping， ZHOU Xiao-hui， XU Qian， et al

(Chengde Medical College, Hebei Chengde 067000, China)

Objective：To observe the effects of paeonol on TGF-β1expression in myocardial tissue of ventricular remodeling rats after acute myocardial infarction （AMI）. Methods： SD rats were randomly divided into sham-operation group， model group， paeonol group and captopril group. The AMI rats model was made by ligating the anterior descending branch of left coronary artery. Then the rats in paeonol group were peritoneally injected paeonol （16.0mg/kg） for 4 weeks； the rats in captopril group were lavaged with captopril （10.0mg/kg） for 4 weeks. The LVWI and collagen volume fraction （CVF）of rats in each group were detected； Immunohistochemical stain was used to detect the expression of TGF-β1in myocardial tissue. Results： Compared with rats in model group， the LVWI， CVF and TGF-β1expression in myocardial tissue of rats in paeonol group and captopril group declined obviously （P＜0.01）. Conclusions： Down regulating TGF-β1expression in myocardial tissue maybe the mechanisms of paeonol improving ventricular remodeling.

Paeonol； Ventricular remodeling； TGF-β1

R961

A

1004-6879（2015）01-0001-03

2014-07-10）

* 河北省教育廳科學研究重點項目（No.ZD20131068）