受體羊?qū)ε咛ヒ浦残Ч绊懙难芯?/h1>
2015-11-26 02:00:28韓麗娟
中國草食動物科學(xué) 2015年6期
韓麗娟
（山東省青州市畜牧局,青州 262500）
受體羊?qū)ε咛ヒ浦残Ч绊懙难芯?/p>
韓麗娟
（山東省青州市畜牧局,青州 262500）
試驗對受體羊埋植自制型陰道海綿栓13 d進(jìn)行同期發(fā)情處理，并根據(jù)分組安排分別在撤栓的同時肌肉注射PMSG 200 IU/只、第1次發(fā)情的同時肌肉注射LHRH-A325 μg/只或16.7 μg/只或不注射藥物，觀察胚胎移植效果。結(jié)果表明：受體在撤栓后不注射藥物組的移植利用率各組間均有顯著差異（P<0.05），移植妊娠率各組間均沒有顯著差異（P>0.05）。受體以往的繁殖情況對移植妊娠率有極顯著影響（P<0.01）。受體卵巢上有功能黃體存在時，卵泡的有無及大小對移植妊娠率的影響較?。≒>0.05）。
綿羊；胚胎移植
胚胎移植（embryotransfer，ET）技術(shù)是在短時間內(nèi)迅速擴大優(yōu)良種畜的有效方法。提供胚胎的母畜稱為供體（donor），接受胚胎的母畜稱為受體（recipient）。雖然，國內(nèi)外對綿羊及胚胎移植技術(shù)的研究已有多年歷史，但在實踐應(yīng)用中往往受到各種因素的影響，效果還不太穩(wěn)定。
1 材料
1.1 試驗動物
受體羊為東北細(xì)毛羊、半細(xì)毛羊、東北半細(xì)毛羊與小尾寒羊的雜交羊及肉用雜種羊，共367只。
飼養(yǎng)方式相同：為全年半放牧半舍飼的方式，試驗期間以舍飼為主。精料組成：豆餅10%+玉米25%+食鹽0.3%+預(yù)混料2.7%。
1.2 試驗藥品
釋放型陰道海綿栓：自制；CIDR：新西蘭哈密爾頓生物公司產(chǎn)；孕馬血清促性腺激素（PMSG）：1 000 IU/支，寧波市激素制品有限公司；垂體促卵泡素（FSH）：100 IU/支，寧波市激素制品有限公司；氯前列烯醇（cloprostenol）：0.2 mg/支，寧波市激素制品有限公司；促排卵素3號（LHRH-A3）：20 IU/支，寧波市激素制品有限公司；絨毛膜促性腺激素（HCG）：100 IU/支，寧波市激素制品有限公司；酒精，碘酒，生理鹽水，雙蒸水，新潔爾滅，青霉素，鏈霉素，等等。
1.3 儀器與設(shè)備
Motic SMZ-140體視顯微鏡，Motic SMZ-140體視顯微鏡（麥克奧迪實業(yè)集團(tuán)有限公司制造）；手術(shù)移植活動保定車8臺（自制）；MICROLIGHT150型雙穿刺腹腔鏡（澳大利亞產(chǎn)）；移植針（澳大利亞Castell公司提供）；常用手術(shù)等器械（國產(chǎn)）。
2 方法
2.1 受體的胚胎移植
為防止手術(shù)時腹壓過大而造成操作困難和生殖器官的損傷，于手術(shù)前24 h將受體羊單獨圈養(yǎng)，斷食，空腹。手術(shù)器械等用0.15%的新潔爾滅溶液浸泡30 min進(jìn)行常規(guī)消毒。
受體羊在其乳房下3～5 cm腹中線兩側(cè)各作一切口，借助腹腔鏡和子宮鉗翻動、撥開卵巢系膜，暴露卵巢以觀察兩側(cè)卵巢上的黃體情況。將判定合格的受體羊黃體側(cè)子宮角前端用子宮鉗牽引出腹腔外，并用鈍針在子宮角前端無血管處扎孔，以裝有合格胚胎的移植針穿過扎孔處移入子宮角內(nèi)腔中，之后將子宮角放回腹腔，兩側(cè)切口各作一針常規(guī)縫合、消毒，同時肌肉注射青、鏈霉素各1支。
2.2 受體移植后觀察及飼養(yǎng)管理
受體羊移植手術(shù)后即少量逐步地給水和飼料，第2天放回大群放牧，維持較高的營養(yǎng)水平，細(xì)心觀察，避免產(chǎn)生應(yīng)激。每天早、晚2次定時試情，觀察受體羊的返情和流產(chǎn)情況。移植后2個情期不返情者，按妊娠母羊進(jìn)行飼養(yǎng)管理。
2.3 受體羊同期發(fā)情處理
埋植陰道海綿栓中的148只受體羊撤栓后隨機分組，并在第1次表現(xiàn)發(fā)情時用不同的藥物組合進(jìn)行處理：第1組，200 IU PMSG+16.7 μgLHRH-A3；第2組，200IU PMSG+25 μg LHRH-A3；第3組，200 IU PMSG；第4組，25μgLHRH-A3；第5組，生理鹽水。具體處理方法見表1。
表1 受體羊撤栓后不同藥物處理方法
2.4 數(shù)據(jù)處理
本試驗數(shù)據(jù)采用SAS軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。
3 結(jié)果與分析
3.1 受體撤栓后不同藥物處理組合對胚胎移植的影響
從表2可見，在移植利用率方面，第1組（60.87%）與其他4組間均沒有顯著差異（P>0.05）；第5組與第3、4組間也沒有顯著差異（P>0.05）；第4組與第3組間差異顯著（P<0.05）；第2組與第3組間差異極顯著（P<0. 01）。移植妊娠率在5組之間沒有顯著差異（P>0.05），但注射生理鹽水的第5組最低（57.89%），注射200 IU PMSG+25 μgLRH-A3的第2組最高（68.42%）。
表2 受體羊撤栓后不同藥物處理組合對胚胎移植的影響
3.2 受體羊以往繁殖情況對移植效果的影響
本組試驗通過對受體羊以往繁殖記錄情況的分析，選擇具有不同繁殖史（即分為正常妊娠生產(chǎn)、上次未受胎和未經(jīng)產(chǎn)的育成羊3種情況）的羊作為受體進(jìn)行胚胎移植試驗，比較移植后該群受體羊的妊娠情況。具體結(jié)果見表3。
表3 受體羊以往繁殖情況對移植效果的影響
由表3可見，上次未受胎母羊的移植妊娠率（40.30%）與以往繁殖機能正常即有正常生產(chǎn)記錄母羊的移植妊娠率（58.97%）和育成羊（63.64%）相比，均差異極顯著（P<0.01）。但繁殖機能正常組羊與育成羊組差異不顯著（P>0.05）。
3.3 受體卵巢上卵泡對胚胎移植結(jié)果的影響
對211只移入胚胎受體羊卵巢上的卵泡和黃體情況進(jìn)行統(tǒng)計分析。所有移入胚胎的受體羊卵巢上都有一級黃體或有一級黃體存在的同時，還有直徑小于3 mm、個數(shù)少于2個的卵泡。
由表4可見，受體羊卵巢上存在一級黃體并有卵泡的移植妊娠率（31.03%）低于無卵泡的受體羊（58.24%），但兩者間差異不顯著（P>0.05）。由表5可見，當(dāng)受體羊卵巢上存在一級黃體卵泡直徑在1 mm以下移植后的妊娠率（31.25%）高于卵泡直徑在1～3 mm的妊娠率（30.77%），但差異也不顯著（P＞0.05）。
表4 卵巢上的卵泡對受體羊移植妊娠率的影響
表5 卵巢上直徑小于3 mm的卵泡對受體羊移植妊娠率的影響
4 討論
4.1 受體撤栓后不同藥物處理組合對胚胎移植的影響
本試驗結(jié)果表明，受體撤栓后注射200 IU PMSG+25 μg LHRH-A3的妊娠率最高（68.42%），但與其他組相比均差異不顯著（P>0.05），說明受體在埋植陰道栓后再注射PMSG和LH類的激素會影響受體的發(fā)情及妊娠，外源的PMSG和LH類藥物可以促進(jìn)卵泡的發(fā)育、排卵和黃體的形成，有利于胚胎的移植存活。
4.2 受體以往的繁殖情況對其妊娠率的影響
在胚胎移植試驗及生產(chǎn)實踐中受體羊的選擇和使用既關(guān)系到胚胎移植效果，又關(guān)系到移植費用。所以有必要研究受體羊以往不同的繁殖情況對胚胎移植的影響。
本試驗對211只受體羊以往的繁殖情況進(jìn)行了調(diào)查，上次未受胎羊的受胎率極顯著低于繁殖機能正常組（P<0.01）和育成羊組（P<0.01）。因此，為了提高胚胎移植的成功率，應(yīng)選有正常繁殖史的母羊做受體羊。育成羊也可用做受體羊，可以得到相近的移植妊娠率。
丁建平等［1］報道，受體羊第3次重復(fù)同期發(fā)情有效率、功能黃體形成比率均顯著低于第1次（P<0.05）；第2次低于第1次，但差異不顯著（P>0.05）；受體羊連續(xù)3次手術(shù)移植其妊娠率分別為66.2%、66.7%和66.7%，胚胎成羔率分別為54.9%、55.7%和50.0%，3次結(jié)果間均無顯著差異（P>0.05）。表明受體羊的重復(fù)移植并不影響妊娠率。
4.3 受體卵巢上卵泡和黃體對胚胎移植的影響
受體羊的同期發(fā)情處理對移植利用率和受胎率有直接影響，生理狀況越接近，同期自然狀態(tài)越有利于胚胎著床、發(fā)育和妊娠的維持。不同個體對同期發(fā)情處理產(chǎn)生反應(yīng)所需藥物劑量存在差異。在大規(guī)模生產(chǎn)處理中，以相似的激素劑量進(jìn)行處理時必定會對不同個體發(fā)情和發(fā)情后的生理過程產(chǎn)生影響，使受體羊卵巢上的卵泡在移植時處于有無或大、小不一的狀態(tài)。激素處理開始時卵巢上卵泡狀態(tài)在個體間的不一致，是導(dǎo)致同期發(fā)情發(fā)生變異的一個重要原因［2］，從而在發(fā)情后第7天手術(shù)時卵巢上呈現(xiàn)不同大小的卵泡。參與募集的卵泡并非都能夠發(fā)育排卵，大多數(shù)卵泡會發(fā)生閉鎖退化，少量被選擇優(yōu)勢化卵泡也并非都能成熟排卵。因此，卵泡閉鎖可發(fā)生在卵泡發(fā)育的各個階段。決定優(yōu)勢卵泡是否成熟排卵的主要因素是卵泡波與黃體溶解的同步性［3］。當(dāng)有黃體存在時，雖然LH振幅較高，但高孕酮濃度致使LH釋放頻率較低，只有同時具備高振幅和高頻率才能使LH濃度升高到促進(jìn)卵泡成熟和排卵的水平［4］。
在卵泡生長過程中，激素失調(diào)可導(dǎo)致以后形成的黃體功能異常，如：FSH、LH分泌的紊亂。優(yōu)勢卵泡的顆粒細(xì)胞分泌的抑制素不足，不能完全抑制FSH分泌，使其余卵泡不能大部分閉鎖，改變了卵巢內(nèi)環(huán)境，影響了優(yōu)勢卵泡的發(fā)育。
從本試驗的結(jié)果可以看出：受體卵巢上當(dāng)存在一級黃體時，卵巢上有無直徑1～3 mm的卵泡并不影響胚胎的移植妊娠率。
［1］ 丁建平，章孝榮，琚書存，等.受體羊重復(fù)使用對同期發(fā)情和胚胎移植效果的影響［J］.中國畜牧獸醫(yī)，2005，32（6）：31-32.
［2］ 陳兵，魏泓.羊卵泡發(fā)育動態(tài)變化及超數(shù)排卵方法的改進(jìn)［J］.中國獸醫(yī)學(xué)報，2004，24（2）：202-204.
［3］ 吳延光，于元松，譚景和.哺乳動物卵泡發(fā)育模式及其調(diào)控機理［J］.動物學(xué)雜志，2002，37（6）：83-86.
［4］ MihmM，Baguisi A，Boland MP，et al.Association between the duration ofdominance ofthe ovulatoryfollicle and pregnancyrate in beef heifers［J］.Reprod Fertil，1994，102：123-130.
S826.3
A
2095-3887（2015）06-0068-03
10.3969/j.issn.2095-3887.2015.06.022
2015-08-13
韓麗娟（1972-），女，畜牧師，研究生學(xué)歷。研究方向：動物遺傳育種與繁殖。
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韓麗娟
（山東省青州市畜牧局,青州 262500）
受體羊?qū)ε咛ヒ浦残Ч绊懙难芯?/p>
韓麗娟
（山東省青州市畜牧局,青州 262500）
試驗對受體羊埋植自制型陰道海綿栓13 d進(jìn)行同期發(fā)情處理，并根據(jù)分組安排分別在撤栓的同時肌肉注射PMSG 200 IU/只、第1次發(fā)情的同時肌肉注射LHRH-A325 μg/只或16.7 μg/只或不注射藥物，觀察胚胎移植效果。結(jié)果表明：受體在撤栓后不注射藥物組的移植利用率各組間均有顯著差異（P<0.05），移植妊娠率各組間均沒有顯著差異（P>0.05）。受體以往的繁殖情況對移植妊娠率有極顯著影響（P<0.01）。受體卵巢上有功能黃體存在時，卵泡的有無及大小對移植妊娠率的影響較?。≒>0.05）。
綿羊；胚胎移植
胚胎移植（embryotransfer，ET）技術(shù)是在短時間內(nèi)迅速擴大優(yōu)良種畜的有效方法。提供胚胎的母畜稱為供體（donor），接受胚胎的母畜稱為受體（recipient）。雖然，國內(nèi)外對綿羊及胚胎移植技術(shù)的研究已有多年歷史，但在實踐應(yīng)用中往往受到各種因素的影響，效果還不太穩(wěn)定。
1 材料
1.1 試驗動物
受體羊為東北細(xì)毛羊、半細(xì)毛羊、東北半細(xì)毛羊與小尾寒羊的雜交羊及肉用雜種羊，共367只。
飼養(yǎng)方式相同：為全年半放牧半舍飼的方式，試驗期間以舍飼為主。精料組成：豆餅10%+玉米25%+食鹽0.3%+預(yù)混料2.7%。
1.2 試驗藥品
釋放型陰道海綿栓：自制；CIDR：新西蘭哈密爾頓生物公司產(chǎn)；孕馬血清促性腺激素（PMSG）：1 000 IU/支，寧波市激素制品有限公司；垂體促卵泡素（FSH）：100 IU/支，寧波市激素制品有限公司；氯前列烯醇（cloprostenol）：0.2 mg/支，寧波市激素制品有限公司；促排卵素3號（LHRH-A3）：20 IU/支，寧波市激素制品有限公司；絨毛膜促性腺激素（HCG）：100 IU/支，寧波市激素制品有限公司；酒精，碘酒，生理鹽水，雙蒸水，新潔爾滅，青霉素，鏈霉素，等等。
1.3 儀器與設(shè)備
Motic SMZ-140體視顯微鏡，Motic SMZ-140體視顯微鏡（麥克奧迪實業(yè)集團(tuán)有限公司制造）；手術(shù)移植活動保定車8臺（自制）；MICROLIGHT150型雙穿刺腹腔鏡（澳大利亞產(chǎn)）；移植針（澳大利亞Castell公司提供）；常用手術(shù)等器械（國產(chǎn)）。
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2.2 受體移植后觀察及飼養(yǎng)管理
受體羊移植手術(shù)后即少量逐步地給水和飼料，第2天放回大群放牧，維持較高的營養(yǎng)水平，細(xì)心觀察，避免產(chǎn)生應(yīng)激。每天早、晚2次定時試情，觀察受體羊的返情和流產(chǎn)情況。移植后2個情期不返情者，按妊娠母羊進(jìn)行飼養(yǎng)管理。
2.3 受體羊同期發(fā)情處理
埋植陰道海綿栓中的148只受體羊撤栓后隨機分組，并在第1次表現(xiàn)發(fā)情時用不同的藥物組合進(jìn)行處理：第1組，200 IU PMSG+16.7 μgLHRH-A3；第2組，200IU PMSG+25 μg LHRH-A3；第3組，200 IU PMSG；第4組，25μgLHRH-A3；第5組，生理鹽水。具體處理方法見表1。
表1 受體羊撤栓后不同藥物處理方法
2.4 數(shù)據(jù)處理
本試驗數(shù)據(jù)采用SAS軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。
3 結(jié)果與分析
3.1 受體撤栓后不同藥物處理組合對胚胎移植的影響
從表2可見，在移植利用率方面，第1組（60.87%）與其他4組間均沒有顯著差異（P>0.05）；第5組與第3、4組間也沒有顯著差異（P>0.05）；第4組與第3組間差異顯著（P<0.05）；第2組與第3組間差異極顯著（P<0. 01）。移植妊娠率在5組之間沒有顯著差異（P>0.05），但注射生理鹽水的第5組最低（57.89%），注射200 IU PMSG+25 μgLRH-A3的第2組最高（68.42%）。
表2 受體羊撤栓后不同藥物處理組合對胚胎移植的影響
3.2 受體羊以往繁殖情況對移植效果的影響
本組試驗通過對受體羊以往繁殖記錄情況的分析，選擇具有不同繁殖史（即分為正常妊娠生產(chǎn)、上次未受胎和未經(jīng)產(chǎn)的育成羊3種情況）的羊作為受體進(jìn)行胚胎移植試驗，比較移植后該群受體羊的妊娠情況。具體結(jié)果見表3。
表3 受體羊以往繁殖情況對移植效果的影響
由表3可見，上次未受胎母羊的移植妊娠率（40.30%）與以往繁殖機能正常即有正常生產(chǎn)記錄母羊的移植妊娠率（58.97%）和育成羊（63.64%）相比，均差異極顯著（P<0.01）。但繁殖機能正常組羊與育成羊組差異不顯著（P>0.05）。
3.3 受體卵巢上卵泡對胚胎移植結(jié)果的影響
對211只移入胚胎受體羊卵巢上的卵泡和黃體情況進(jìn)行統(tǒng)計分析。所有移入胚胎的受體羊卵巢上都有一級黃體或有一級黃體存在的同時，還有直徑小于3 mm、個數(shù)少于2個的卵泡。
由表4可見，受體羊卵巢上存在一級黃體并有卵泡的移植妊娠率（31.03%）低于無卵泡的受體羊（58.24%），但兩者間差異不顯著（P>0.05）。由表5可見，當(dāng)受體羊卵巢上存在一級黃體卵泡直徑在1 mm以下移植后的妊娠率（31.25%）高于卵泡直徑在1～3 mm的妊娠率（30.77%），但差異也不顯著（P＞0.05）。
表4 卵巢上的卵泡對受體羊移植妊娠率的影響
表5 卵巢上直徑小于3 mm的卵泡對受體羊移植妊娠率的影響
4 討論
4.1 受體撤栓后不同藥物處理組合對胚胎移植的影響
本試驗結(jié)果表明，受體撤栓后注射200 IU PMSG+25 μg LHRH-A3的妊娠率最高（68.42%），但與其他組相比均差異不顯著（P>0.05），說明受體在埋植陰道栓后再注射PMSG和LH類的激素會影響受體的發(fā)情及妊娠，外源的PMSG和LH類藥物可以促進(jìn)卵泡的發(fā)育、排卵和黃體的形成，有利于胚胎的移植存活。
4.2 受體以往的繁殖情況對其妊娠率的影響
在胚胎移植試驗及生產(chǎn)實踐中受體羊的選擇和使用既關(guān)系到胚胎移植效果，又關(guān)系到移植費用。所以有必要研究受體羊以往不同的繁殖情況對胚胎移植的影響。
本試驗對211只受體羊以往的繁殖情況進(jìn)行了調(diào)查，上次未受胎羊的受胎率極顯著低于繁殖機能正常組（P<0.01）和育成羊組（P<0.01）。因此，為了提高胚胎移植的成功率，應(yīng)選有正常繁殖史的母羊做受體羊。育成羊也可用做受體羊，可以得到相近的移植妊娠率。
丁建平等［1］報道，受體羊第3次重復(fù)同期發(fā)情有效率、功能黃體形成比率均顯著低于第1次（P<0.05）；第2次低于第1次，但差異不顯著（P>0.05）；受體羊連續(xù)3次手術(shù)移植其妊娠率分別為66.2%、66.7%和66.7%，胚胎成羔率分別為54.9%、55.7%和50.0%，3次結(jié)果間均無顯著差異（P>0.05）。表明受體羊的重復(fù)移植并不影響妊娠率。
4.3 受體卵巢上卵泡和黃體對胚胎移植的影響
受體羊的同期發(fā)情處理對移植利用率和受胎率有直接影響，生理狀況越接近，同期自然狀態(tài)越有利于胚胎著床、發(fā)育和妊娠的維持。不同個體對同期發(fā)情處理產(chǎn)生反應(yīng)所需藥物劑量存在差異。在大規(guī)模生產(chǎn)處理中，以相似的激素劑量進(jìn)行處理時必定會對不同個體發(fā)情和發(fā)情后的生理過程產(chǎn)生影響，使受體羊卵巢上的卵泡在移植時處于有無或大、小不一的狀態(tài)。激素處理開始時卵巢上卵泡狀態(tài)在個體間的不一致，是導(dǎo)致同期發(fā)情發(fā)生變異的一個重要原因［2］，從而在發(fā)情后第7天手術(shù)時卵巢上呈現(xiàn)不同大小的卵泡。參與募集的卵泡并非都能夠發(fā)育排卵，大多數(shù)卵泡會發(fā)生閉鎖退化，少量被選擇優(yōu)勢化卵泡也并非都能成熟排卵。因此，卵泡閉鎖可發(fā)生在卵泡發(fā)育的各個階段。決定優(yōu)勢卵泡是否成熟排卵的主要因素是卵泡波與黃體溶解的同步性［3］。當(dāng)有黃體存在時，雖然LH振幅較高，但高孕酮濃度致使LH釋放頻率較低，只有同時具備高振幅和高頻率才能使LH濃度升高到促進(jìn)卵泡成熟和排卵的水平［4］。
在卵泡生長過程中，激素失調(diào)可導(dǎo)致以后形成的黃體功能異常，如：FSH、LH分泌的紊亂。優(yōu)勢卵泡的顆粒細(xì)胞分泌的抑制素不足，不能完全抑制FSH分泌，使其余卵泡不能大部分閉鎖，改變了卵巢內(nèi)環(huán)境，影響了優(yōu)勢卵泡的發(fā)育。
從本試驗的結(jié)果可以看出：受體卵巢上當(dāng)存在一級黃體時，卵巢上有無直徑1～3 mm的卵泡并不影響胚胎的移植妊娠率。
［1］ 丁建平，章孝榮，琚書存，等.受體羊重復(fù)使用對同期發(fā)情和胚胎移植效果的影響［J］.中國畜牧獸醫(yī)，2005，32（6）：31-32.
［2］ 陳兵，魏泓.羊卵泡發(fā)育動態(tài)變化及超數(shù)排卵方法的改進(jìn)［J］.中國獸醫(yī)學(xué)報，2004，24（2）：202-204.
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S826.3
A
2095-3887（2015）06-0068-03
10.3969/j.issn.2095-3887.2015.06.022
2015-08-13
韓麗娟（1972-），女，畜牧師，研究生學(xué)歷。研究方向：動物遺傳育種與繁殖。
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