非小細(xì)胞肺癌中nueropilin-1的表達(dá)及臨床意義

白 珀，董 茜（第二炮兵總醫(yī)院呼吸內(nèi)科，中國人民解放軍6646部隊(duì)，北京 00088）

非小細(xì)胞肺癌中nueropilin-1的表達(dá)及臨床意義

白 珀1，董 茜2（1第二炮兵總醫(yī)院呼吸內(nèi)科，2中國人民解放軍61646部隊(duì)，北京 100088）

目的：探討 neropilin-1（NRP-1）在非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）中的表達(dá)及臨床意義．方法：應(yīng)用免疫組化 SP法檢測(cè)68例NSCLC及癌旁組織中 NRP1的表達(dá)，分析其表達(dá)與NSCLC臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系．結(jié)果：NSCLC組織中 NRP-1陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織（P<0．05）．NRP-1在NSCLC組織中的表達(dá)與腫瘤直徑、P-TNM分期及里淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)（P<0．05）．結(jié)論：NRP-1過度表達(dá)在NSCLC發(fā)生、發(fā)展過程中起重要作用，可能與 NSCLC發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)．

neropilin-1；非小細(xì)胞肺癌；免疫組織化學(xué)

0 引言

非小細(xì) 胞 肺癌 （non-small cell lung cancer，NSCLC）是肺癌常見的類型，預(yù)后較差，術(shù)后腫瘤轉(zhuǎn)移和侵襲是 NSCLC患者治療失敗和死亡的主要原因．neuropilin-1（NRP-1）是神經(jīng)纖毛蛋白中的一類，神經(jīng)軸突的生長、血管的生長發(fā)育在腫瘤轉(zhuǎn)移中起重要作用．研究發(fā)現(xiàn)，NRP-1在胃癌、乳腺癌等多種腫瘤組織及癌細(xì)胞株中表達(dá)異常增高，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)［1－3］，但 NRP-1在NSCLC中的表達(dá)研究少見．本研究中采用免疫組化技術(shù)觀察了組織中的表達(dá)情況，并分析其與臨床病理特征的關(guān)系．

1 材料和方法

1．1 材料 NSCLC組織及癌旁組織標(biāo)本來源于2012-01／2014-12我院行手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)的NSCLC患者．癌旁組織取距腫塊邊緣 5 cm以上的組織．所有患者術(shù)前均未接受放療、化療或其他治療．其中男 52例，女 16例；年齡 42．8±6．5歲（29～65歲），中位年齡52歲；低分化26例，中分化24例，高分化18例；臨床分期按1997年修訂的P-TNM分期標(biāo)準(zhǔn):Ⅰ～Ⅱ期32例，Ⅲ～Ⅳ期36例；腺癌41例，鱗癌20例，大細(xì)胞癌7例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35例，無淋巴轉(zhuǎn)移33例．SP免疫組織化學(xué)試劑盒購于福州邁新有限公司．二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色劑購自北京中杉生物技術(shù)有限公司．兔抗人NRP-1蛋白多克隆抗體購自美國 Santa Cruz公司產(chǎn)品．

1．2 方法 所有標(biāo)本均經(jīng)過甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片．切片脫蠟至水后用0．01 mol／L檸檬酸緩沖液抗原修復(fù)；30 mL／L H2O2室溫下孵育 10 min，PBS沖洗5 min×3次；滴加NRP-1（1∶150），4℃過夜，PBS沖洗5 min×3次，滴加生物素化二抗工作液，室溫孵育 20 min，PBS沖洗 5 min×3次；滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液，室溫孵育30 min，PBS沖洗5 min×3次；DAB顯色，顯微鏡下觀察，適時(shí)終止反應(yīng)，自來水充分沖洗；蘇木素復(fù)染，脫水透明，中性樹脂封片．用已知的 NRP-1陽性片做陽性對(duì)照，用PBS代替一抗做陰性對(duì)照．NRP-1表達(dá)一腫瘤細(xì)胞的胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性．每張切片在高倍鏡下隨機(jī)選取10個(gè)視野，按陽性細(xì)胞占同類細(xì)胞總數(shù)的百分比來計(jì)算．≤5為陰性（－），6%～25%為弱陽性（＋），25%～75%為表達(dá)陽性（＋＋），陽性細(xì)胞數(shù)> 75%為表達(dá)強(qiáng)陽性（＋＋＋）．將陰性和弱陽性合計(jì)為陰性總數(shù)，陽性和強(qiáng)陽性合計(jì)為陽性總數(shù)．

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用 SPSS13．0統(tǒng)計(jì)軟件包，計(jì)數(shù)資料運(yùn)用 χ2檢驗(yàn)．以 P<0．05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義．

2 結(jié)果

2．1 NRP-1在 NSCLC和癌旁組織的表達(dá) 68例NSCLC組織中有47例NRP-1呈陽性表達(dá)（69．1%），而對(duì)應(yīng)癌旁組織中NRP-1均呈陰性表達(dá)．NSCLC組織中NRP-1陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織（P＜0．05，表1）．

2．2 NRP-1在 NSCLC臨床病理學(xué)參數(shù)的相關(guān)性

NRP-1在 NSCLC組織中的表達(dá)與腫瘤直徑、P-TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)（P＜0．05），而與其他臨床病理學(xué)參數(shù)無關(guān)．

表1 NRP-1的表達(dá)與 NSCLC臨床病理學(xué)參數(shù)的相關(guān)性

3 討論

肺癌一直是發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重地威脅著人類健康與生命．隨著腫瘤分子生物學(xué)的發(fā)展和化療及分子靶向藥物的開發(fā)應(yīng)用，人們對(duì)非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）的發(fā)病機(jī)制有了進(jìn)一步的認(rèn)識(shí)，其治療效果較前有所改善，但患者總體預(yù)后仍然較差．目前認(rèn)為肺癌發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多個(gè)基因或多個(gè)分子水平各自發(fā)揮或相互協(xié)調(diào)作用的復(fù)雜過程，因此尋找、研究和揭示腫瘤的有價(jià)值分子標(biāo)志物或標(biāo)志物與腫瘤的關(guān)系將有助于揭示NSCLC發(fā)生與發(fā)展的分子機(jī)制，為腫瘤診斷、有效防治、預(yù)測(cè)預(yù)后及術(shù)后輔助治療提供科學(xué)依據(jù)［4－5］．NRP-1是近年來發(fā)現(xiàn)的VEGF的新型受體，NRP-1在胃癌、乳腺癌、前列腺癌等多種腫瘤中均呈高表達(dá)，與腫瘤細(xì)胞生長和腫瘤血管生成密切相關(guān)，可能作為許多腫瘤進(jìn)展的標(biāo)志物之一［6－7］．本研究結(jié)果顯示，68例NSCLC組織中NRP-1均呈高表達(dá)，而對(duì)應(yīng)癌旁組織中 NRP-1呈陰性表達(dá)，NSCLC組織中 NRP-1陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織（P<0．05）．提示NRP-1可能參與了 NSCLC的惡變、發(fā)生過程，在其中可能扮演重要角色．同時(shí)本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，NRP-1在 NSCLC組織中的表達(dá)與腫瘤直徑、P-TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)（P<0．05），而與組織分化、組織學(xué)類型等臨床病理學(xué)參數(shù)無關(guān)，說明NRP-1過度表達(dá)在 NSCLC發(fā)生、發(fā)展過程中起重要作用，可能與NSCLC發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，但在不同病理類型和不同分化程度 NSCLC的發(fā)生發(fā)展中可能具有普遍意義．但目前對(duì) NRP-1在 NSCLC發(fā)生、侵潤和轉(zhuǎn)移過程中所發(fā)揮的具體作用機(jī)制尚不清楚．

［1］龔 宇，胡國華，湯為學(xué)，等．NRP-1對(duì)喉癌Hep-2細(xì)胞增殖侵襲及體外癌細(xì)胞促血管形成的影響［J］．重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，33（12）:1479－1483．

［2］張 佳，張速勤，董 頻，等．喉鱗癌組織中 NRP-1、VEGF的表達(dá)變化及意義［J］．山東醫(yī)藥，2010，50（18）:95－96．

［3］Starzec A，Vassy R，Martin A，et al．Antiangiogenic and antitumor activities of peptide inhibiting th vascular endothelial growth factor binding to neuropilin-1［J］．Life Sci，2006，79（25）:2370－2381．

［4］哈敏文，李建鵬，鞏克亭，等．BAG-1在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及意義［J］．廣東醫(yī)學(xué)，2010，31（12）:1552－1554．

［5］秦旭東，丁 偉，姚祖仁，等．B7-H4分子在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及臨床意義［J］．陜西醫(yī)學(xué)雜志，2010，39（1）:19－22．

［6］Miao HQ，Klagsbrun M．Neuropilin is a mediator of angiogenesis［J］．Cancer Metast Rev，2000，19（1-2）:29－37．

［7］Murga M，F(xiàn)ernandez-CapetilloO，Tosato G．Neuropilin-1 regulatesattachment in human endothelial cell independently of vascular endothelial growth factor receptor-2［J］．Blood，2005，105（5）:1992－1999．

Expression of nueropilin-1 in non-small cell lung cancer and its clincal significance

BAIPo1，DONGQian21Second Artillery General Hospital PLA，2No．61646 PLA，Beijing 100088，China

AIM:To investigate the expression of nueropilin-1 in non-small cell lung cancer（NSCLC）and its clincal significance．METHODS:The expression of nueropilin-1 protein was detected with immunohistochemical technique in 68 cases of NSCLC and normal lung tissues．RESULTS:The positive expression rates of nueropilin-1 protein in NSCLC was significantly higher than that in normal lung tissues（P<0．05）．The expression of nueropilin-1 protein in NSCLC were positively related to tumor diamete，P-TNM stage and lymphnode metastasis（P＜0．05）．CONCLUSION:Nueropilin-1 may play an improtant role in the oncogenesis and progression of NSCLC，and itmay be relevant to invasion and metastasis of NSCLC．

nueropilin-1；non-small cell lung；immunohistochemical technique

R365

A

2095-6894（2015）03-032-02

2015-01-10；接受日期：2015-01-28

白 珀．碩士．研究方向:呼吸內(nèi)科．E-mail:danger_0_0_0@ sina．com