腺病毒介導(dǎo)hBMP-2轉(zhuǎn)染BMSCs復(fù)合DBM修復(fù)兔缺血性股骨頭壞死的實(shí)驗(yàn)研究

石正松，李強(qiáng)，蔡偉良，寧寅寬，李詩(shī)鵬

腺病毒介導(dǎo)hBMP-2轉(zhuǎn)染BMSCs復(fù)合DBM修復(fù)兔缺血性股骨頭壞死的實(shí)驗(yàn)研究

石正松，李強(qiáng)△，蔡偉良，寧寅寬，李詩(shī)鵬

目的評(píng)價(jià)人骨形態(tài)發(fā)生蛋白（hBMP）-2/骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）/脫鈣松質(zhì)骨（DBM）對(duì)兔股骨頭壞死的修復(fù)作用，探索臨床治療股骨頭壞死的新途徑。方法髓芯減壓聯(lián)合液氮冰凍法制備兔股骨頭壞死模型。將造模成功兔隨機(jī)分為A、B、C、D 4組（n=12），A組不植入材料，為對(duì)照組，B、C、D分別植入DBM、DBM/BMSCs、hBMP-2/BMSCs/DBM。術(shù)后4、8及12周各組分別處死4只，運(yùn)用X線技術(shù)、大體標(biāo)本觀察、HE染色技術(shù)評(píng)判股骨頭壞死修復(fù)情況。結(jié)果X線示A組股骨頭塌陷，無(wú)明顯成骨；B、C、D組股骨頭缺損區(qū)有骨再生現(xiàn)象，但D組再生情況明顯優(yōu)于B、C組。Lane-Sandhu X線評(píng)分A組＜B、C組＜D組（P＜0.05），B和C組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。大體觀示A組股骨頭塌陷，鉆孔存在；B、C組股骨頭未塌陷，鉆孔存在；D組股骨頭未塌陷，鉆孔消失。HE染色示A組骨小梁壞死、碎裂，大量空骨陷窩；B、C組可見(jiàn)成骨細(xì)胞及新生幼稚骨小梁；D組大量骨細(xì)胞，新生骨小梁與正常骨小梁無(wú)異。空骨陷窩率A組＞B、C組＞D組（P＜0.05），B和C組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論hBMP-2/BMSCs/DBM植入體內(nèi)后能夠誘導(dǎo)BMSCs向成骨方向分化，對(duì)兔股骨頭壞死具有較好的修復(fù)效果。

股骨頭壞死；疾病模型,動(dòng)物；腺病毒；骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2；脫鈣松質(zhì)骨基；骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；hBMP-2/ BMSCs/DBM

股骨頭壞死（ONFH）確切病因不明，目前公認(rèn)的致病因素有13種［1］。有研究顯示，股骨頭缺血性壞死已經(jīng)替代了髖關(guān)節(jié)結(jié)核，躍居髖關(guān)節(jié)疾病的首位［2］，并且ONFH患者有了年輕化趨勢(shì)［3］。目前對(duì)于ONFH的治療方法有中醫(yī)療法、體外微波沖擊治療、髓芯減壓［4］、髖關(guān)節(jié)置換等多種［5］，但是這些療法均存在不同程度的不良反應(yīng)。骨組織工程的發(fā)展在治療ONFH方面展現(xiàn)了良好的前景，并逐漸成為研究熱點(diǎn)。但是在采用何種種子細(xì)胞最好，選取哪種支架材料為宜，如何解決細(xì)胞調(diào)控因子持續(xù)表達(dá)的問(wèn)題方面，國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究尚無(wú)定論［6］。本研究旨在評(píng)價(jià)由腺病毒介導(dǎo)的人骨形態(tài)發(fā)生蛋白（hBMP）-2基因轉(zhuǎn)染兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）復(fù)合脫鈣松質(zhì)骨（DBM）構(gòu)建而成的組織工程骨（hBMP-2/BMSCs/ DBM）對(duì)兔ONFH的修復(fù)作用，以期為臨床治療ONFH提供新途徑。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料普通清潔級(jí)新西蘭大白兔48只，雌雄不拘，體質(zhì)量（3.12±0.19）kg，購(gòu)于桂林醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心；hBMP-2/ BMSCs/DBM（本課題組前期已利用腺病毒介導(dǎo)hBMP-2轉(zhuǎn)染BMSCs復(fù)合DBM的方法成功構(gòu)建了的組織工程骨［7］）；凝膠海綿（江西祥恩醫(yī)療科技發(fā)展有限公司）；注射用青霉素鈉（華北制藥公司）；4%多聚甲醛（北京索萊寶科技有限公司）；10%硝酸溶液（深圳市力科賢科技有限公司）；X線攝片機(jī)（島津公司）；顯微鏡（Olympus公司）；10%水合氯醛（天津大茂化學(xué)試劑廠）。

1.2 方法

1.2.1 模型制作實(shí)驗(yàn)動(dòng)物取右側(cè)股骨頭參與實(shí)驗(yàn)，參照李海冰等［8］髓芯減壓術(shù)聯(lián)合液氮冰凍的操作步驟，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物取俯臥位，10%水合氯醛3 mL/kg耳緣靜脈注射麻醉。由臀大肌與闊筋膜張肌的間隙進(jìn)入，暴露臀小肌及髓關(guān)節(jié)外旋肌群，并貼骨面將其切斷，暴露關(guān)節(jié)囊以后小十字口切開(kāi)，外旋股骨頭，使股骨頭暴露而不使其脫位，在大轉(zhuǎn)子下約1 cm處，用直徑為3.5 mm的無(wú)菌鉆頭，向股骨頭方向打孔，直至軟骨下，刮匙刮除股骨頭內(nèi)骨質(zhì)，液氮持續(xù)冷凍，約5 min。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)分組和材料植入術(shù)后4周行X線檢測(cè)，股骨頭較對(duì)側(cè)扁平、萎縮為造模成功，模型隨機(jī)分為A、B、C、D 4組，每組12只。A組為造模組，不做處理；B、C、D各組向鉆孔內(nèi)分別填塞DBM、DBM/BMSCs、hBMP-2/BMSCs/DBM，用醫(yī)用凝膠海綿封閉隧道口，逐層關(guān)閉切口；術(shù)后各組均于臀大肌處肌內(nèi)注射青霉素鈉注射液40萬(wàn)U/（只·d），連續(xù)給藥3 d，預(yù)防感染。

1.2.3 X線檢查和評(píng)分各組分別于術(shù)后4、8、12周各選取4只動(dòng)物于全麻下行雙髖關(guān)節(jié)正位X線檢查，以Lane-Sand?hu X線評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)股骨頭修復(fù)情況進(jìn)行評(píng)分。

1.2.4 股骨頭大體觀察行X線檢查后處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，取出雙側(cè)股骨，清除表面組織，觀察股骨頭形態(tài)，測(cè)量鉆孔孔徑。

1.2.5 HE染色和鏡檢沿轉(zhuǎn)子間連線鋸斷股骨頭，將股骨頭投入4%多聚甲醛固定5 d，10%硝酸脫鈣液中脫鈣5 d，梯度乙醇脫水，包埋，行5 μm厚冠狀切片，HE染色［9］。A、B、C、D組及正常組（健側(cè)股骨頭）標(biāo)本于倒置顯微鏡下觀察骨小梁形態(tài)、成骨細(xì)胞并計(jì)算空骨陷窩率?？展窍莞C率=空骨陷窩數(shù)/總骨陷窩數(shù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料用表示，方差齊者多組之間比較采用單因素方差分析，組間多重比較采用LSD-t檢驗(yàn)；方差不齊者采用Mann-Whitney U法。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 X線觀察A組術(shù)后4周時(shí)，實(shí)驗(yàn)側(cè)股骨頭鉆孔清晰可見(jiàn)，邊緣銳利，骨缺損區(qū)呈現(xiàn)低密度影，部分標(biāo)本出現(xiàn)了小囊性變，股骨頭輪廓欠規(guī)則，扁平塌陷，密度不均；術(shù)后8周時(shí)，低密度透光區(qū)仍然清晰可見(jiàn)，缺損區(qū)周?chē)泄俏宅F(xiàn)象，股骨頭關(guān)節(jié)面進(jìn)一步塌陷，且骨小梁結(jié)構(gòu)不清晰；12周時(shí)股缺損區(qū)仍然透亮，股骨頭外形縮小，缺損嚴(yán)重，完全塌陷，見(jiàn)圖1a。B組術(shù)后4周時(shí)，股骨頭骨密度降低，缺損區(qū)仍然存在，填充材料呈高密度影，未見(jiàn)明顯吸收，周?chē)?jiàn)明顯透光區(qū)，股骨頭無(wú)塌陷；術(shù)后8周時(shí)，股骨頭形態(tài)仍正常，填充材料周?chē)腹鈪^(qū)仍清晰，鉆孔區(qū)密度高而均勻，鉆孔邊緣出現(xiàn)放射狀骨小梁接合現(xiàn)象，但骨小梁結(jié)構(gòu)比較紊亂；12周股骨頭缺損區(qū)仍然存在，填充材料呈高密度影，體積較前略變小，與周?chē)吔缒：睋p區(qū)可見(jiàn)少許成骨反應(yīng)及松散骨小梁結(jié)構(gòu)，見(jiàn)圖1 b。C組4、8、12周變化與B組大致相同，見(jiàn)圖1c。D組術(shù)后4周時(shí)，人工骨影模糊，鉆孔區(qū)有密度增高影，質(zhì)地均勻，鉆孔邊緣變得模糊；術(shù)后8周時(shí)，人工骨影縮小，邊界不清，周?chē)腹鈪^(qū)影模糊；12周股骨頭內(nèi)出現(xiàn)規(guī)則連續(xù)骨小梁，鉆孔邊

緣與人工骨交界區(qū)骨小梁接合很好，界限模糊，看不到骨缺損的低密度影，鉆孔區(qū)骨密度接近周?chē)琴|(zhì)，未出現(xiàn)股骨頭塌陷和關(guān)節(jié)間隙狹窄等骨性關(guān)節(jié)炎表現(xiàn)，見(jiàn)圖1d。除B和C組4、8及12周的Lane-Sandhu X線評(píng)分差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外，其他各組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表1。

Fig.1X-ray observation at 12周after operation圖1 術(shù)后12周X線觀察

Tab.1Lane-Sandhu X-ray score in each group at different time points表1 各組不同時(shí)間Lane-Sandhu X線評(píng)分比較（n=4，分，）

Tab.1Lane-Sandhu X-ray score in each group at different time points表1 各組不同時(shí)間Lane-Sandhu X線評(píng)分比較（n=4，分，）

＊＊P＜0.01；a與A組比較，b與B組比較，c與C組比較，P＜0.05

組別A組B組C組D組F 4周0.75±0.50 1.75±0.50a 2.00±0.82a 5.00±0.82abc 29.273＊＊8周1.25±0.50 4.25±0.50a 4.00±0.82a 6.75±0.50abc 57.118＊＊12周3.25±0.50 5.00±0.82a 5.25±0.96a 10.25±0.50abc 69.560＊＊

2.2 標(biāo)本大體觀察A組術(shù)后4周鉆孔存在，孔徑（3.200±0.163）mm，鉆孔周?chē)梢?jiàn)少許纖維組織，股骨頭部分塌陷；8周孔徑（3.225±0.150）mm，纖維組織繼續(xù)增生；12周鉆孔依然存在，孔徑（3.275± 0.096）mm，股骨頸縮短，周?chē)梢?jiàn)大量鮮紅色纖維組織覆蓋，股骨頭完全塌陷，見(jiàn)圖2a。B組術(shù)后4周鉆孔清晰可見(jiàn)，孔徑（3.000±0.141）mm，股骨頭未見(jiàn)塌陷；8周時(shí)鉆孔呈橢圓形，長(zhǎng)徑（2.776±0.151），周?chē)梢?jiàn)少許成骨，股骨頭無(wú)塌陷；12周時(shí)鉆孔呈不規(guī)則形，長(zhǎng)徑（2.500±0.141）mm，股骨頭無(wú)塌陷，見(jiàn)圖2b。C組術(shù)后4周仍可見(jiàn)鉆孔，孔徑（3.200±0.163） mm，股骨頭無(wú)塌陷；8周時(shí)孔徑（2.825±0.126）mm，鉆孔周?chē)猩僭S成骨，股骨頭未見(jiàn)塌陷；12周時(shí)鉆孔徑（2.475±0.170）mm，可見(jiàn)成骨反應(yīng)，股骨頭無(wú)塌陷，見(jiàn)圖2c。D組術(shù)后4周可見(jiàn)鉆孔不規(guī)則改變，孔徑（2.475±0.170）mm，周?chē)梢?jiàn)少許成骨反應(yīng)，股骨頭未見(jiàn)塌陷；8周時(shí)孔徑（1.500±0.216）mm，周邊可見(jiàn)明顯成骨反應(yīng)，開(kāi)始有新生骨長(zhǎng)入缺損區(qū)，色澤近似周?chē)M織；12周鉆孔已經(jīng)完全消失，完全被新生骨替代，鉆孔區(qū)僅殘留少許結(jié)節(jié)樣修復(fù)痕跡，新生骨色澤與正常組織無(wú)明顯差異，股骨頭完好，見(jiàn)圖2d。

Fig.2General observation of the specimen after 12 weeks圖2 術(shù)后12周大體觀察

2.3 HE染色結(jié)果股骨頭正常結(jié)構(gòu)可見(jiàn)大量骨髓組織，骨小梁規(guī)則，骨細(xì)胞形態(tài)正常，見(jiàn)圖3a。A組術(shù)后4周時(shí)骨小梁疏松，部分?jǐn)嗔?，大量骨?xì)胞壞死；8周時(shí)骨小梁結(jié)構(gòu)紊亂、壞死，部分壞死骨小梁開(kāi)始吸收，出現(xiàn)較多破骨細(xì)胞；12周時(shí)骨小梁廣泛斷裂、壞死、吸收，髓腔內(nèi)出現(xiàn)大量壞死組織，空骨陷窩被擠壓變形，見(jiàn)圖3b。B組術(shù)后4周骨小梁結(jié)構(gòu)不規(guī)則，少許斷裂，軟骨細(xì)胞、骨細(xì)胞、骨髓細(xì)胞壞死量較A組少；8周時(shí)可見(jiàn)成骨反應(yīng)，出現(xiàn)少許結(jié)構(gòu)不規(guī)則的幼稚骨小梁；12周時(shí)缺損區(qū)周邊有成骨反應(yīng)，有向中心部生長(zhǎng)的趨向，新生骨小梁較前增多，但仍為幼稚骨小梁，仍可見(jiàn)壞死骨組織，見(jiàn)圖3c。C組變化與B組大致相當(dāng)，見(jiàn)圖3d。D組術(shù)后4周充填區(qū)周邊出現(xiàn)反應(yīng)帶，為軟骨性骨痂形成，孔隙內(nèi)見(jiàn)纖維肉芽組織及毛細(xì)血管長(zhǎng)入，未見(jiàn)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)等炎癥反應(yīng)；8周周邊新骨帶明顯增寬，成骨反應(yīng)向中心部推進(jìn)，而中心部空腔面積明顯減小，部分充填

區(qū)基本為幼稚的骨小梁所占據(jù),表面有較多的成骨細(xì)胞；12周時(shí)充填區(qū)分布相對(duì)較成熟的骨小梁致密飽滿，無(wú)硬化帶形成，表面骨細(xì)胞數(shù)量較多且清晰可見(jiàn)，見(jiàn)圖3e。除B和C組術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)空骨陷窩率、D組和正常側(cè)組12周時(shí)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外，其他各組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表2。

Fig.3Observation of bone trabeculars after 12 weeks（HE，×100）圖3 術(shù)后12周骨小梁觀察（HE，×100）

Tab.2Ratio of Empty Lacuna in each group at each time points表2 各組不同時(shí)間空骨陷窩率比較（n=4,）

Tab.2Ratio of Empty Lacuna in each group at each time points表2 各組不同時(shí)間空骨陷窩率比較（n=4,）

＊＊P＜0.01；a與A組比較，b與B組比較，c與C組比較，d與D組比較，P＜0.05

12周0.361±0.031 0.304±0.024a 0.292±0.007a 0.152±0.012abc 0.135±0.009abc 108.153＊＊組別A組B組C組D組正常組F 4周0.569±0.027 0.417±0.024a 0.415±0.047a 0.358±0.014abc 0.136±0.012abcd 128.551＊＊8周0.474±0.017 0.365±0.010a 0.379±0.019a 0.224±0.021abc 0.121±0.007abcd 307.739＊＊

3 討論

ONFH是一種由多種因素共同作用導(dǎo)致股骨頭血液供應(yīng)受損和骨組織壞死的復(fù)雜病理過(guò)程［10］。ONFH具有終身漸進(jìn)性和難治性，對(duì)髖關(guān)節(jié)有很大破壞性，預(yù)后大多不良［11-12］。目前ONFH病例約為500～750萬(wàn)，約占我國(guó)總?cè)丝诘?.38%～0.58%，并且每年約有10～15萬(wàn)的新發(fā)病例出現(xiàn)［13］。

大量研究表明，BMSCs具有多向分化能力，免疫原性小、增殖能力強(qiáng)、來(lái)源充足、取材廣泛等諸多優(yōu)點(diǎn)，目前在組織工程和臨床上已經(jīng)廣泛使用［14］。骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMP）具有誘導(dǎo)成骨作用，其中BMP-2成骨誘導(dǎo)作用最強(qiáng)，被認(rèn)為是最有前途的骨誘導(dǎo)物質(zhì)［15］。良好的支架材料不但要具有較好的吸附性和細(xì)胞安全性，還應(yīng)該具有較好的組織相容性。目前學(xué)術(shù)界使用較多的支架材料有羥基磷灰石、殼聚糖、絲素蛋白、賴氨酸鹽酸鹽、鉭金屬，也有學(xué)者運(yùn)用多種材料復(fù)合來(lái)作為支架材料，但是無(wú)論是這些單一材料還是復(fù)合材料，其本質(zhì)均是化學(xué)原料，其植入動(dòng)物體內(nèi)后的相容性均不理想。DBM是用兔同種異體骨，采用Urist法制作成的脫鈣松質(zhì)骨，具備良好的黏附率和孔隙率，利于種子細(xì)胞的黏附和生存，且其生物組織相容性遠(yuǎn)優(yōu)于上述化學(xué)材料，是比較理想的生物支架材料［16-17］。本實(shí)驗(yàn)采用腺病毒介導(dǎo)hBMP-2轉(zhuǎn)染兔BMSCs復(fù)合DBM的方法體外構(gòu)建組織工程骨，然后將該組織工程骨植入兔ONFH模型中進(jìn)行觀察，以評(píng)估hBMP-2/BMSCs/DBM對(duì)ONFH的效果。

本研究中X線檢測(cè)示A組股骨頭隨著時(shí)間的推移，外觀逐漸變形、塌陷，提示其已經(jīng)壞死，鉆孔缺損區(qū)增大，可能為壞死骨質(zhì)吸收所致；B、C、D組股骨頭外形未見(jiàn)塌陷，缺損區(qū)均有新生骨出現(xiàn)，但是D組新生骨量大于B、C 2組，提示hBMP-2/BMSCs/ DBM的修復(fù)效果好于單純DBM和BMSCs。Lane-Sandhu X線評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)是從骨形成、骨連接、骨塑性3個(gè)方面對(duì)骨的修復(fù)效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。各組在術(shù)后隨時(shí)間延長(zhǎng)，評(píng)分依次增高，提示隨著時(shí)間的推移，4組缺損均有修復(fù)，但是A組修復(fù)效果最微弱，D組修復(fù)作用最強(qiáng)，B、C 2組修復(fù)作用居于二者之間，此與Xiao等［18］結(jié)論近似。

本研究股骨頭大體觀察示A組鉆孔大而邊緣規(guī)則，表明A組鉆孔周?chē)匆?jiàn)修復(fù)或修復(fù)作用微弱，B、C組鉆孔較A組變小且形狀改變，D組鉆孔完全消失，提示B、C、D組有明顯修復(fù)效果，且D組修復(fù)效果優(yōu)于B、C組。正常骨組織中骨細(xì)胞核呈嗜堿性，細(xì)胞外基質(zhì)和骨小梁呈嗜酸性，壞死的骨細(xì)胞會(huì)溶解吸收，留下空的骨陷窩，壞死的骨小梁會(huì)由嗜酸性變?yōu)槭葔A性。蘇木素會(huì)與嗜堿性顆粒結(jié)合將其染成藍(lán)色，伊紅會(huì)與嗜酸性顆粒結(jié)合將其染成紅色。A組中可見(jiàn)骨小梁稀疏，大部分染成藍(lán)色，表明其骨小梁已經(jīng)大部分壞死并被吸收，B、C組中骨小梁尚可，但有少許亦出現(xiàn)藍(lán)染，D組中骨小梁飽滿，未見(jiàn)藍(lán)染，提示B、C、D組中股骨頭均有修復(fù)，且D

組修復(fù)作用優(yōu)于B、C組。

正常骨組織中由于細(xì)胞凋亡作用會(huì)存在一些空骨陷窩，但是其空骨陷窩率一般為12%左右。本研究顯示，隨著時(shí)間的推移和修復(fù)的進(jìn)行，B、C組空骨陷窩率小于A組，但是仍然大于正常組，表明B、C組的修復(fù)作用優(yōu)于A組，但是與正常水平仍有差距，D組12周時(shí)的空骨陷窩率與對(duì)側(cè)正常股骨頭空骨陷窩率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明D組股骨頭已經(jīng)修復(fù)至正常水平。

綜上所述，hBMP-2/BMSCs/DBM對(duì)ONFH有明顯的修復(fù)作用，且其修復(fù)效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于單純DBM組和BMSCs/DBM組。雖然本研究通過(guò)組織工程方法在成骨方面已經(jīng)取得一定成效，但是在成骨的同時(shí)亦發(fā)現(xiàn)其成血管能力較弱，如何在成骨的同時(shí)增加血管的再生能力尚需要進(jìn)一步研究深入。

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（2015-05-13收稿 2015-07-10修回）

（本文編輯 陸榮展）

Rehabilitation effect of BMSCs that was transfected with hBMP-2 through adenovirus combination with DBM on rabbit osteonecrosis in femoral head

SHI Zhengsong，LI Qiang△，CAI Weiliang，NING Yinkuan，LI Shipeng
Department of Emergency Traumatic Surgery，the Affilated Hospital of Guilin Medical University，Guilin，Guangxi 541001，China△

ObjectiveTo evaluate the effect of human bone morphogenetic protein 2（hBMP-2）/Bone Mesenchymal Stem Cells（BMSCs）/demineralized bone matrix（DBM）on repairing rabbits'femoral head after necrosis and to explore the new treatments for femoral head necrosis.MethodsFemoral head necrosis models was established by clinical core decom?pression combined with liquid nitrogen frozen.Then,animals were randomly devided into 4 groups（n=12 per group）:Group A were not implanted anything as control group,Group B were implanted with DBM.Group C were implanted with hBMP-2/ DBM.Group D were implanted with hBMP-2/BMSCs/DBM.Four rabbits from each group were sacrificed at 4,8 and 12 weeks after surgery to evaluate the the repairing effect of Osteonecrosis of the femoral head（ONFH）through X-ray examina?tion,observation of the specimen and HE staining.ResultsX-ray revealed defect of femoral head in Group A without clear bone formation.There is a little fibrous hyperplasia and no obvious osteogenic response.By contrast,the femoral head defect areas became fuzzy in group B,group C and group D with new bone trabeculars.And the regenerate phenomenons of group D were significantly better than that of group B and group C of the same time point.As to the Lane-Sandhu X Ray scores,it is lower in group A than that in group B；It is lower in group C than that in group D（P＜0.05）.There is no statistical difference between Group B and Group C.General observation of the specimen revealed that the femoral head of group A collapsed with drilling holes.The femoral heads of group B and group C showed no collapse but the drilling holes existed.Femoral head in group D was not collapsed and the drilling holes disappeared.HE staining showed that bone trabeculars became ne?crotic and fragmented in Group A with a lot of air trapped cells.There were newborn immature bone trabeculars and osteo?

femur head necrosis；disease models,animal；adenovirus；bone morphogenetic protein-2；demineralized bone matrix；bone marrow mesenchymal stem cells；hBMP-2/BMSCs/DBM

R687.3

A

10.11958/j.issn.0253-9896.2015.10.012

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（31160199）；廣西自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（2014jjAA40064）

桂林，桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院急診創(chuàng)傷外科（郵編541001）

石正松（1987），男，碩士在讀，主要從事骨組織工程研究

△通訊作者E-mail：li.q12251970@163.com

blasts in group B and group C.Group D were of large number of bone cells,fat cells,and newborn mature bone trabeculars. The ratio of empty lacuna is higher in Group A than that in Group B；it is higher in Group C than that in Group D（P＜0.05）. ConclusionhBMP-2/BMSCs/DBM can induce BMSCs differentiation into osteoblasts after being implanted.It has good re?pairing effect on ONFH with good application prospect.