盆栽鐵線蓮Crystal Fountain組織培養(yǎng)技術

朱宏芬，施永泰，倪建剛，黃 堅

(寧波市農業(yè)科學研究院,浙江寧波 315040)

盆栽鐵線蓮Crystal Fountain組織培養(yǎng)技術

朱宏芬，施永泰，倪建剛，黃 堅

(寧波市農業(yè)科學研究院,浙江寧波 315040)

以鐵線蓮Crystal Fountain嫩莖為外植體,在添加各種激素的培養(yǎng)基上進行誘導、增殖和生根培養(yǎng),結果表明,MS+0.2 mg·L-1TDZ+0.01 mg·L-1NAA為最佳增殖培養(yǎng)基,增殖系數(shù)達到3.3,芽健壯,生長快;1/2MS+0.5 mg·L-1IBA為最佳生根培養(yǎng)基,生根率達82%。

盆栽鐵線蓮;水晶噴泉;組織培養(yǎng)

文獻著錄格式:朱宏芬,施永泰,倪建剛,等.盆栽鐵線蓮Crystal Fountain組織培養(yǎng)技術[J].浙江農業(yè)科學,2015,56(9):1440-1442.

DOI 10.16178/j.issn.0528-9017.20150930

鐵線蓮屬植物(Clematis L.)隸屬于毛茛科(Ranunculaceae),是一種觀賞價值高、具有多種抗逆性的藤本植物,分布于世界各地,約300余種,我國各地均有分布,有140多種[1]。由于其花形新穎別致、花朵色澤多變、花期較長,在歐美庭園應用廣泛,尤其在垂直綠化中具有相當重要的作用,被譽為藤本皇后。鐵線蓮屬水晶噴泉(Crystal Fountain)為日本園藝品種,重瓣大花,淡藍色,奶黃色雄蕊(瓣化)如同涌出的噴泉,花期長且豐花,是較合適的盆栽品種,具有極高的觀賞性和開發(fā)前景。但是Crystal Fountain不能進行有性繁殖,組織培養(yǎng)技術能有效解決該問題。張啟香等[2-3]分別以不同品種鐵線蓮葉片、莖尖和莖段為外植體進行培養(yǎng),對愈傷組織誘導、繼代增殖培養(yǎng)和生根培養(yǎng)進行了研究,建立了比較完整的快繁體系,獲得了再生植株,大大提高了該屬植物的繁殖率。本試驗在前人研究的基礎上,以Crystal Fountain帶芽莖段為外植體,研究不同激素對芽誘導增殖和生根的影響,為利用組織培養(yǎng)快速繁殖該品種提供技術參考。

1 材料和方法

1.1 材料

以寧波市農業(yè)高新技術試驗園區(qū)的Crystal Fountain嫩莖為外植體材料。

1.2 方法

外植體滅菌。將材料用自來水沖洗10 min,在超凈工作臺上,用75%酒精浸泡5 s,0.1%升汞消毒6～8 min,無菌水沖洗3遍;然后把材料切成1.0～1.5 cm長、帶1個腋芽的莖段,接種到啟動培養(yǎng)基中。

啟動培養(yǎng)基選用MS+0.5 mg·L-16-BA+ 30 g·L-1蔗糖+6.5 g·L-1瓊脂,pH調至5.8～6.0。培養(yǎng)條件為溫度(25±2)℃,光照強度0.15萬～0.2萬lx,每天光照時間12 h。

誘導與增殖培養(yǎng)。待啟動培養(yǎng)基中培養(yǎng)的外植體側芽長至2～3 cm時,將其切下,剪成單芽莖段,轉接于添加不同激素配比的MS培養(yǎng)基上,培養(yǎng)條件同上,培養(yǎng)30 d后觀察不同培養(yǎng)基中芽的生長情況和增殖系數(shù)。共設22個處理,每處理重復5瓶,每瓶接種1個帶芽莖段。

生根培養(yǎng)。以1/2MS為基本培養(yǎng)基,將2～3 cm長的芽接種到添加不同激素的生根培養(yǎng)基上,培養(yǎng)條件同上,培養(yǎng)25 d時觀察不定根生長情況。共設6個處理,每處理重復5瓶,每瓶接種10株。

1.3 數(shù)據處理

增殖系數(shù)=增殖芽數(shù)/接種芽總數(shù)×100,生根率/%=生根苗數(shù)/接種苗數(shù)×100。

2 結果與分析

2.1 啟動培養(yǎng)

外植體在啟動培養(yǎng)基中培養(yǎng)7 d左右芽開始萌動,10 d后開始抽出側芽,30 d后側芽可長至2～3 cm,芽較健壯,綠色。

2.2 激素對增殖培養(yǎng)的影響

表1為不同種類及濃度的細胞分裂素(6-BA, KT和TDZ)和NAA組合對Crystal Fountain增殖的影響。3種細胞分裂素與NAA組合均可促進增殖,細胞分裂素KT的增殖效果最差,增殖系數(shù)最高為2.0,苗長勢一般,生長緩慢,葉片有枯黃現(xiàn)象。6-BA的增殖效果好于KT,0.01 mg·L-1NAA組合增值效果好于0.05 mg·L-1NAA組合,當NAA濃度為0.01 mg·L-1時,增殖系數(shù)基本與6-BA濃度成正比;當NAA濃度為0.05 mg·L-1時,增殖系數(shù)隨6-BA濃度的遞增呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢,且6-BA濃度大于1.00 mg·L-1時,基本以基部產生叢生芽為主。TDZ的增殖效果最好,且葉片無枯黃現(xiàn)象,低濃度TDZ更有利于苗的生長和增殖,表現(xiàn)為芽健壯,生長快,節(jié)間短粗,葉色深綠,長勢好,有效芽多;當TDZ濃度達到0.50 mg· L-1時,增殖系數(shù)最高,但苗生長不良,節(jié)間縮短,畸形,玻璃化嚴重。綜合分析增殖系數(shù)和芽長勢情況,結果表明,MS+0.20 mg·L-1TDZ+ 0.01 mg·L-1NAA為Crystal Fountain組培最佳增殖培養(yǎng)基。

表1 不同種類及濃度細胞分裂素和NAA處理對Crystal Fountain增殖的影響

2.3 不同NAA和IBA濃度對生根培養(yǎng)的影響

在生根培養(yǎng)基中,10 d后組培苗基部出現(xiàn)白色根原基,12 d可見白色根系出現(xiàn),25 d時根系粗壯,生根率和平均根數(shù)如表2所示,不同濃度NAA和IBA都能誘導芽生根,IBA處理的生根效果好于NAA,其中1/2MS+0.5 mg· L-1IBA培養(yǎng)基的生根率最高,達82%,且生根條數(shù)也最多,平均根數(shù)為3.8條,根較粗壯,白色。隨著NAA濃度的升高,生根率先上升后下降,當NAA濃度達到1.5 mg·L-1時,基部產生大量愈傷,生根率明顯下降,根系細弱,褐色,長勢差。

表2 NAA和IBA處理對Crystal Fountain生根的影響

3 小結與討論

TDZ具有生長素和細胞分裂素的雙重功能,在蘋果、藍莓、樹莓等植物離體培養(yǎng)中,通過愈傷或器官發(fā)生途徑誘導芽的發(fā)生和增殖[3-4]。在鐵線蓮中以莖尖為外植體進行胚性愈傷組織及體細胞胚的誘導[5-6]。本試驗以鐵線蓮Crystal Fountain莖段為外植體,在培養(yǎng)基中添加3種不同水平的激素,通過比較不同培養(yǎng)基中Crystal Fountain芽的增殖情況發(fā)現(xiàn),低濃度的TDZ對鐵線蓮Crystal Fountain側芽和不定芽的萌發(fā)及誘導有促進作用,相比6-BA、KT,其增殖苗更加健壯。0.2 mg·L-1TDZ的誘導效果最好,植株最健壯;當TDZ濃度大于0.5 mg· L-1時,會導致植株畸形,玻璃化嚴重。

本研究結果表明,不同生長素類物質對鐵線蓮Crystal Fountain不定芽生根的誘導效果不同,IBA對不定芽的生根誘導效果好于NAA,0.5 mg·L-1IBA的生根率最高,生根數(shù)最多,且根系粗壯。

[1] 中國科學院中國植物志編輯委員會.中國植物志[M].北京:科學出版社,1980.

[2] 張啟香,方炎明,呂梅,等.鐵線蓮‘Multi-Blue’不定芽及體細胞胚發(fā)生的初步研究[J].園藝學報,2007,34 (2):465-468.

[3] 徐曉峰,黃學林.TDZ:一種有效的植物生長調節(jié)劑[J].植物學報,2003,20(2):227-237.

[4] 張宗勤,董麗芬,張波,等.TDZ對樹莓微繁殖的影響[J].經濟林研究,2004,22(4):50-52.

[5] 張啟香,胡恒康,方炎明.鐵線蓮‘Multi-Blue’體細胞胚誘導和植株再生[J].南京林業(yè)大學學報:自然科學版, 2010,34(6):18-22.

[6] 王磊,史俊,周余華,等.鐵線蓮‘Utopia’無菌外植體的建立[J].北方園藝,2010(5):156-157.

(責任編輯：侯春曉)

S 687.3

B

0528-9017(2015)09-1440-02

2015-05-28

寧波市科技局農業(yè)攻關項目(2014C10066)

朱宏芬(1974-),女,浙江寧波人,農藝師,主要從事植物組培及栽培技術研究與推廣工作。E-mail:nbnkyzhu @163.com。