白芨無菌播種快繁體系的建立

朱虹嫻，馬美蘭，戚正華，張悅凱

(東陽市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所,浙江東陽 322100)

白芨無菌播種快繁體系的建立

朱虹嫻，馬美蘭，戚正華，張悅凱

(東陽市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所,浙江東陽 322100)

通過試驗篩選出白芨種子萌發(fā)、叢生芽增殖、壯苗生根3個階段的最佳配方,建立起一套白芨無菌播種快繁體系。結(jié)果表明,白芨種子萌發(fā)的最佳培養(yǎng)基配方為MS+1.0 mg·L-1NAA+8%土豆+2%蔗糖+ 0.6%瓊脂;當(dāng)添加NAA的濃度為0.5 mg·L-1,6-BA的濃度為2.0 mg·L-1時,白芨叢生芽增殖率達到最高;白芨壯苗生根的適宜培養(yǎng)基為MS+0.5 mg·L-1IBA+0.5 mg·L-1NAA+8%香蕉+2%蔗糖+0.6%瓊脂+ 0.5 g·L-1活性炭。

白芨;無菌播種;配方篩選;快繁體系

文獻著錄格式:朱虹嫻,馬美蘭,戚正華,等.白芨無菌播種快繁體系的建立[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué),2015,56(9):1409-1410,1523.

DOI 10.16178/j.issn.0528-9017.20150917

白芨(Bletilla striata)又名連及草、甘根、白給、箬蘭、紫蘭、百笠,是蘭科白芨屬多年生球根草本植物?；ㄉ话銥樽霞t色,花期4-5月,觀賞價值較高。作為中草藥具有收斂止血、消腫生肌的功效。隨著對白芨功效研究的深入,近年來市場需求量大增,價格也逐年攀升。由于長期無限制地人工采挖,野生白芨資源枯竭,一般采用分割假鱗莖的方式進行繁殖,1個假鱗莖1年僅能形成1～5個新假鱗莖[1],生產(chǎn)效率低,經(jīng)濟效益不佳。經(jīng)測驗,白芨蒴果內(nèi)含種子數(shù)萬粒,但自然條件下極難萌發(fā)和生長,實生苗的栽培也較為困難[2-3],采用無菌播種則能獲得較高的萌發(fā)率,可有效促進規(guī)模化生產(chǎn)白芨種苗。本試驗通過篩選白芨種子萌發(fā)、叢生芽增殖及壯苗生根的最佳培養(yǎng)基,建立一套白芨無菌播種快繁體系。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗采用東陽本地種植戶采集提供的白芨成熟蒴果。

試驗所需試劑有大量元素,微量元素,有機物,鐵鹽溶液,75%酒精,升汞,無菌水,蔗糖,瓊脂,活性炭,芐基腺嘌呤(6-BA),萘乙酸(NAA),吲哚丁酸(IBA),pH試紙。添加物有土豆,香蕉。

1.2 方法

將成熟未裂開的蒴果先用75%的酒精表面消毒30 s,再用0.1%的升汞消毒10 min,無菌水沖洗5～6次,用無菌濾紙吸干表面水分[4]。置于培養(yǎng)皿中備用。

各種培養(yǎng)基中都添加20 g·L-1蔗糖,6 g·L-1瓊脂,調(diào)節(jié)pH值為5.8～6.0。

種子萌發(fā)培養(yǎng)基篩選。以MS為基本培養(yǎng)基,在添加40或80 g·L-1土豆的基礎(chǔ)上,再分別加0.0,0.5,1.0 mg·L-1NAA共6個配方。將準備好的成熟種子切開均勻撒在添加不同植物激素的6種培養(yǎng)基上,每個配方10瓶。先放在培養(yǎng)箱進行暗培養(yǎng)7 d,培養(yǎng)溫度(25±2)℃,再移至培養(yǎng)室,培養(yǎng)溫度(25±2)℃,光照強度2 000～2 500 lx,光照12 h·d-1[4],環(huán)境濕度60%～80%。培養(yǎng)10 d后統(tǒng)計發(fā)芽情況。

叢生芽增殖培養(yǎng)基篩選?；九囵B(yǎng)基配方為MS+0.5 g·L-1活性炭+0.5 mg·L-1NAA,分別加0.5,1.0,1.5,2.0 mg·L-16-BA,以不加激素的作對照(CK)。種子萌發(fā)后將培養(yǎng)高1～2 cm的白芨小苗接種于試驗培養(yǎng)基中,每個配方重復(fù)10次,每瓶接種8個點,培養(yǎng)條件為溫度(25± 2)℃,光照強度2 000～2 500 lx,時間12 h·d-1,環(huán)境濕度60%～80%。培養(yǎng)30 d,觀察增殖情況。

壯苗生根培養(yǎng)基篩選。共設(shè)置3組試驗:在MS+0.5 g·L-1活性炭+8%香蕉的基礎(chǔ)上,添加0.5,1.0 mg·L-1NAA;在MS+0.5 g·L-1活性炭+8%香蕉+0.5 mg·L-1IBA的基礎(chǔ)上,添加0,0.5,1.0 mg·L-1NAA;在MS+0.5 g·L-1活性炭+0.5 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-1IBA的基礎(chǔ)上,分別添加0,40,80 g·L-1的香蕉。取由增值培養(yǎng)所得2～3 cm高的種苗,棄去黃化和發(fā)育不良的個體,接種于試驗培養(yǎng)基中。每個配方重復(fù)10次,每瓶接種8個點。在室溫為(25±2)℃,環(huán)境濕度60%～80%,光照強度2 500～3 600 lx,光照12 h·d-1的條件下進行培養(yǎng)。30 d后進行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 種子萌發(fā)培養(yǎng)基

表1表明,以MS為基本培養(yǎng)基,不添加NAA的白芨種子萌發(fā)狀態(tài)不佳;隨著NAA濃度的增大,萌發(fā)時間縮短,NAA添加量為1.0 mg·L-1時,萌發(fā)數(shù)量最多,時間最短。另外,添加土豆的配方,萌發(fā)的芽都可以轉(zhuǎn)綠,土豆添加量80 g·L-1優(yōu)于40 g·L-1,種子萌發(fā)快、芽較綠。結(jié)果顯示,MS +1.0 mg·L-1NAA+80 g·L-1土豆的培養(yǎng)基利于白芨種子萌發(fā)。

2.2 叢生芽增殖培養(yǎng)基

表2表明,直接在MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)的白芨小苗增殖不明顯;添加6-BA配合一定量的NAA有利于小苗的增殖;當(dāng)6-BA 2.0 mg·L-1和NAA 0.5 mg·L-1配比時白芨小苗增殖最佳。結(jié)果顯示, MS+2.0 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA+0.5 g· L-1活性炭的培養(yǎng)基利于白芨小苗增值。

表1 白芨種子在不同基本培養(yǎng)基上的萌發(fā)表現(xiàn)

表2 白芨小苗在不同培養(yǎng)基上的增殖表現(xiàn)

2.3 壯苗生根培養(yǎng)基

表3表明,不添加任何植物激素時,白芨苗長勢最弱;當(dāng)添加IBA 0.5 mg·L-1和NAA 0.5 mg· L-1時,生根時間最短,且苗長勢粗壯,塊根膨大最明顯。香蕉的量對白芨生根狀況有影響,當(dāng)添加80 g·L-1的香蕉時,白芨生根情況最好。結(jié)果顯示,MS+0.5 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-1IBA+ 80 g·L-1香蕉+0.5 g·L-1活性炭的培養(yǎng)基利于白芨壯苗生根。

表3 白芨苗在不同培養(yǎng)基上壯苗生根的表現(xiàn)

3 小結(jié)與討論

試驗建立了一套從白芨蒴果無菌播種到壯苗生根的快繁體系。種子萌發(fā)培養(yǎng)基以MS+1.0 mg· L-1NAA+8%土豆+2%蔗糖+0.6%瓊脂為最佳,有利于種子萌發(fā)轉(zhuǎn)綠長成小苗,張燕等[5-6]認為土豆對白芨種子的萌發(fā)效果最佳,本試驗也證明了這點;叢生芽增殖率最高的配方為MS+2.0 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA+0.5 g·L-1活性炭+2%蔗糖+0.6%瓊脂,增殖的白芨小苗葉綠、長勢好;壯苗生根以MS+0.5 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-1IBA+80 g·L-1香蕉+0.5 g·L-1活性炭+2%蔗糖+0.6%瓊脂為好,能夠培養(yǎng)出塊根膨大、苗壯根多的白芨優(yōu)質(zhì)苗。

[1] 和壽星,徐中志,薛潤光,等.白芨無菌播種育苗技術(shù)[J].云南農(nóng)業(yè)科技,2010(6):38-39.

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[4] 葉靜,鄭曉君,管常東,等.白芨的無菌萌發(fā)與組織培養(yǎng)[J].云南大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版,2010,32(增刊1): 422-425.

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[6] 張燕,黎斌,李思鋒.不同培養(yǎng)基上白芨的種子萌發(fā)與幼苗形態(tài)發(fā)生[J].西北植物學(xué)報,2009,29(8): 1584-1589.

(責(zé)任編輯：張才德)

S 567

A

0528-9017(2015)09-1409-02

2015-06-15

東陽市科技局(14-206)

朱虹嫻(1990-),女,助理農(nóng)藝師,主要從事植物組培技術(shù)研究工作。E-mail:739540610@qq.com。