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    陳舊性血跡的DNA檢驗

    2015-11-19 09:13:56泉州市公安局孫琳琳
    海峽科學(xué) 2015年10期
    關(guān)鍵詞:血跡檢材陳舊性

    泉州市公安局 孫琳琳 程 沖

    隨著 DNA檢驗技術(shù)及其數(shù)據(jù)庫在偵查破案和執(zhí)法辦案中的作用越來越突出,部分在當年未進行 DNA檢驗的檢材被要求重新整理并送檢。這部分生物檢材由于存放時間過長,并受存放場所條件的限制,DNA的降解是不可避免的。本實驗利用Chelex-100法和M48磁珠提取法分別提取陳舊性血跡進行DNA檢驗。

    1 材料與方法

    1.1 實驗樣本

    1~21號檢材(其中所有檢材存放時間均為10~14年)。

    1.2 方法

    1.2.1 DNA提取

    1.2.1.1 Chelex-100法。剪取檢材適量,置于0.5mL離心管中,加入 200μL 10%Chelex-100 和 5μL PK(10mL/mL);56℃1h,震蕩,100 ℃ 10min,13000rpm 離心3min。

    1.2.1.2 M48磁珠提取法。剪取檢材適量,置于1.5mL離心管中,加入200μL G2溶液和20μL 1mg/mL PK,56℃保溫1h,13,000rpm離心3min,取上清液,加入600μL MTL溶液和30μL磁珠,充分混勻,室溫放置15min,期間震蕩數(shù)次。用500μL 80%乙醇溶液洗滌 3次,65℃晾干 10min,加入 30μL去離子水洗脫。

    1.2.2 PCR-STR檢測

    用Identifiler Plus試劑盒進行擴增,總體系為10μL,模板DNA1μL,PCR熱循環(huán)采用29個循環(huán);擴增產(chǎn)物ABI3130XL遺傳分析儀檢測,GeneMapper軟件進行STR分型。

    2 結(jié)果

    表1 STR分型結(jié)果統(tǒng)計

    圖1 用Chelex-100法提取檢材的分型圖譜

    圖2 用M48磁珠法提取檢材的分型圖譜

    用Chelex-100法提取的21例樣本中,有14例出現(xiàn)等位基因缺失,且有15例平均峰高≤400RFU ;使用M48磁珠法提取的樣本中僅有1例存在等位基因缺失,2例平均峰高≤400RFU。圖1與圖2是針對同一樣本使用兩種不同方法的STR分型結(jié)果,圖1的檢測結(jié)果顯示該樣品出現(xiàn)小片度優(yōu)勢擴增,大片段等位基因缺失,等位基因擴增不平衡等現(xiàn)象;圖2的檢測結(jié)果并未出現(xiàn)等位基因缺失,峰值在 400~4000RFU之間,各等位基因間的均衡性良好。

    3 討論

    現(xiàn)場的生物檢材多種多樣,檢材的 DNA質(zhì)量受溫度、濕度、化學(xué)及生物等多種因素的影響,其保存時間越久、降解也越嚴重,而且檢材中越容易摻入PCR抑制劑。本次實驗所使用的樣本均是 10年以上的陳舊性血跡檢材,通過Chelex-100法提取的結(jié)果提示大部分樣本 DNA發(fā)生不同程度的降解,這是與當時提取的情況及保存時間和條件有一定關(guān)聯(lián)。與Chelex-100法相比較,M48磁珠法可能更適合陳舊性血跡這類DNA發(fā)生降解含有大量抑制物的檢材。M48磁珠提取法是利用細胞裂解液促使細胞膜、核膜破裂,并使與DNA結(jié)合的蛋白質(zhì)變性,DNA游離釋放,它是以磁珠為載體,通過磁珠吸附DNA,而雜質(zhì)不被吸附,然后利用磁力架聚集磁珠,通過洗滌去除雜質(zhì),從而得到純度和濃度很高的DNA。而Chelex-100是一種化學(xué)整合樹脂,由苯乙烯、二乙烯苯共聚體組成,含有成對的亞氨基二乙酸鹽離子來整合多價金屬離子。它不能有效去除雜質(zhì)及降解的 DNA片段;無細胞裂解液裂解細胞,只是利用溫度變化和PK促使細胞核膜破裂釋放DNA,這就使DNA含量和純度受到一定影響。

    綜上所述,對于陳舊性血跡在使用常規(guī)的Chelex-100法效果欠佳的情況下,可考慮采用M48磁珠提取法進行復(fù)檢,以最大可能獲得完整的STR分型圖譜。

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