五味子、烏梅對60株廣泛耐藥鮑曼不動桿菌的抑菌作用

吳賢麗　龐載元　敖茂程　蘇德永　李靖　華毅

（攀枝花市中心醫(yī)院，四川攀枝花617067）

五味子、烏梅對60株廣泛耐藥鮑曼不動桿菌的抑菌作用

吳賢麗龐載元敖茂程蘇德永李靖華毅

（攀枝花市中心醫(yī)院，四川攀枝花617067）

目的：通過研究五味子、烏梅對廣泛耐藥鮑曼不動桿菌的抑菌作用，為臨床治療其感染尋找新的出路。方法：采用中藥抗菌試驗試管倍比稀釋法測定藥物的最低抑菌濃度。結果：五味子、烏梅對60株廣泛耐藥鮑曼不動桿菌有一定的體外抑菌作用，最小抑菌濃度均值分別為63.54 mg/mL，58.85 mg/mL。結論：五味子、烏梅對60株廣泛耐藥鮑曼不動桿菌有一定的抑菌作用，本地與外地收集的菌株，抑菌作用無顯著性差異（P＞0.05）。

五味子；烏梅；廣泛耐藥鮑曼不動桿菌；體外抑菌試驗

鮑曼不動桿菌具有強大的獲得耐藥性和克隆傳播的能力，多重耐藥、廣泛耐藥、全耐藥鮑曼不動桿菌呈世界性流行，已成為我國院內感染最重要的病原菌之一［1］。廣泛耐藥鮑曼不動桿菌是指對臨床常用的5類抗生素耐藥，僅對1～2種潛在有抗不動桿菌活性的藥物（主要指替加環(huán)素或多黏菌素）敏感的菌株［1］。多黏菌素類藥物的腎毒性及神經系統(tǒng)不良反應發(fā)生率高，且多黏菌素E存在明顯的異質性耐藥，常需聯(lián)合應用其他抗菌藥物［2］。替加環(huán)素對耐亞胺培南鮑曼不動桿菌有較好的抗菌活性［3］，但血藥濃度、腦脊液濃度低且價格過于昂貴，常需與其他抗菌藥物聯(lián)合應用［4］。開發(fā)新的抗生素是克服該菌耐藥性的有效途徑，但新藥開發(fā)周期長、投資大，醫(yī)藥經費負擔重。

中藥治療感染性疾病有悠久的歷史，常用的抗菌中草藥有近百種［5］，經文獻檢索，有關中藥抑菌的研究較多，但未見五味子、烏梅對廣泛耐藥鮑曼不動桿菌抑菌、殺菌的研究報道，因此，研究其對廣泛耐藥鮑曼不動桿菌的體外抗菌活性具有重大的現(xiàn)實意義。

本實驗采用中藥抗菌試驗試管倍比稀釋法，參考了有關文獻［6］，并做了相應的改進?，F(xiàn)報告如下：

1　材料與方法

1.1材料

孵箱，1 000 μL無菌吸頭，1 000 μL加樣槍，帶帽無菌試管若干，比濁儀，API 0.85%3 mL無菌鹽水管，梅里埃的非苛養(yǎng)革蘭陰性桿菌藥敏專用肉湯，試管架若干。

1.2菌株的選擇

收集近期（2010年4月-2014年3月）來自本院和外地（浙江大學醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院）的廣泛耐藥鮑曼不動桿菌60株，選擇標準菌株ATCC 27853，ATCC25922，ATCC25923作對比分析。

1.3中藥的選擇

通過查閱文獻，選擇五味子、烏梅（四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司生產，產品批號分別為：1410063，1401008）2種有抗菌活性的中藥配方顆粒。

1.4中藥藥液的制備

取50 mL的無菌燒杯，用無菌蒸餾水溶解中藥配方顆粒，使其藥液相當于生藥的質量濃度為1 000 mg/mL。

1.5細菌的培養(yǎng)與稀釋

將選定的實驗菌株，接種血平板培養(yǎng)基37℃孵育24 h。取API 0.85%3 mL無菌鹽水管，挑取菌落配制成0.5麥氏比濁單位，使其含菌量為1.5× 108cfu/L。

1.6最小抑菌濃度（MIC）的測定

按臨床標準化協(xié)會（CLSI）推薦的液體稀釋法測定實驗菌株的MIC。具體應用倍比稀釋法對藥物進行稀釋，稀釋液為梅里埃的非苛養(yǎng)革蘭陰性桿菌藥敏專用肉湯。

1.7操作步驟

在10支無菌試管中各加入1 mL肉湯，于第一管加1 mL中藥（1 000 mg/mL），充分混勻后取出1 mL加入第2管，混勻后取出1 mL加入第3管，反復操作至第9管，混勻后第9管取出1 mL液體丟棄，第10管不加藥液作陽性對照，在每支試管中加入0.5麥氏單位的菌液20 μL，第9管不加菌液做陰性對照，充分混勻后放置37℃孵箱中培養(yǎng)，24 h后觀察細菌生長情況。在陽性對照管細菌生長正常，陰性對照管無菌生長的條件下，判斷無渾濁試管的最小濃度即為MIC。以上所有無菌操作均需在生物安全柜中進行。

2　結果

見表1。五味子、烏梅對60株廣泛耐藥鮑曼不動桿菌有不同程度的體外抑菌作用，MIC均值分別為63.54 mg/mL，58.85 mg/mL。

3　討論

抗生素的廣泛和不合理應用，使細菌的耐藥性日趨嚴重，醫(yī)院由廣泛耐藥鮑曼不動桿菌引起的感染呈現(xiàn)逐年升高的趨勢，特別是重癥監(jiān)護室（ICU）尤為嚴重。由于可供選擇的藥物少，且療效差、不良反應大，給臨床治療帶來了困難，而中藥對廣泛耐藥鮑曼不動桿菌有一定的體外抑菌作用。

由表1可見，五味子、烏梅對60株廣泛耐藥鮑曼不動桿菌有不同程度的體外抑菌作用，MIC均值分別為63.54 mg/mL，58.85 mg/mL。五味子抑菌濃度比冷會勇等［7］報道的多重耐藥鮑曼不動桿菌的抑菌濃度高。2種中藥的抑菌濃度比龐載元等［8］報道的廣泛耐藥銅綠假單胞菌抑菌濃度低，2種中藥本地與外地收集的菌株，抑菌作用無顯著性差異（P＞0.05）。

常用的抗菌中藥有近百種，其抑菌濃度遠高于抗生素［9］，按常規(guī)劑量口服血藥濃度遠遠達不到抑菌濃度。以本實驗為例：五味子MIC均值為63.54 mg/mL，按成人4 000 mL體液算，需要一次口服254 g生藥才可能在體內達到抑菌濃度，而五味子的常規(guī)劑量為3～6 g［10］，遠遠達不到治療所需的血藥濃度；烏梅MIC均值為58.85 mg/mL，按成人4 000 mL體液算，需要一次口服235 g生藥才可能在體內達到抑菌濃度，而烏梅的常規(guī)劑量為3～30 g［10］，也遠遠達不到治療的血藥濃度。彭乙華等［11］研究報道中藥單體注射制劑棓丙酯對多重耐藥鮑曼不動桿菌有較高的抑菌活性，體外最低抑菌濃度范圍64～128 μg/mL，但按成人體液4 000 mL算，需要藥物256～512 mg，而棓丙酯靜脈滴注1次的允許用量，不超過180 mg，在人體內也很難達到有效抑菌濃度。按傳統(tǒng)給藥模式難以發(fā)揮中藥的抗菌作用。

表1　2種中藥對60株廣泛耐藥鮑曼不動桿菌的抑菌作用

中藥治療呼吸道感染，吸入給藥是不錯的選擇。由于呼吸道面積大，毛細血管豐富、致密，藥物吸收快，吸收速率僅次于靜脈給藥［12］，藥物用量少，可以克服口服血藥濃度過低的瓶頸，通過霧化吸入，藥物可直達病所。中藥霧化吸入治療肺炎［13-15］和上呼吸道感染［16-18］的報道較多，療效肯定。本研究資料顯示，雖然五味子、烏梅對廣泛耐藥鮑曼不動桿菌有不同的體外抗菌活性，但按常規(guī)劑量口服在體內遠遠不能達到應有的抑菌濃度。中藥霧化吸入治療廣泛耐藥鮑曼不動桿菌引起的肺炎是值得一試的方法。

在中藥抗菌研究的過程中，前人的研究結果提示中藥在抗菌作用上蘊藏著巨大潛力。中藥的給藥途徑有很多，在應用研究上需要打破常規(guī)，不斷創(chuàng)新與開拓，才能使中藥更好地造福于人類。

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Bacteriostatic Effect of Schisandra and Jaume on Sixty Strains of Extensively Drug-resistant Acinetobacter baumannii

Wu Xianli，Pang Zaiyuan，Ao Maocheng，Su Deyong，Li Jing，Hua Yi
（Central Hospital of Panzhihua City，Sichuan Panzhihua 617067，China）

Objective：To investigate the bacteriostatic effect of schisandra and jaume on extensively drug-resistant Acinetobacter baumannii as well as a novel route to the treatment of clinical infection.Methods：The minimum inhibiting concentrations（MICs）of drugs were determined by antibacterial test with doubling dilution in tube. Results：Both schisandra and jaume showed inhibitory effects on the 60 extensively drug-resistant Acinetobacter baumannii strains，of which the mean MICs were 63.54 and 58.85 mg/mL respectively.Conclusion：Schisandra and jaume showed a certain inhibitory effect on 60 extensively drug-resistant Acinetobacter baumannii strains，which showed no difference in local and nonlocal isolates（P＞0.05）.

Scutellaria；Jaume；Extensively Drug-Resistant Acinetobacter baumannii；In vitro Antibacterial Test

10.3969/j.issn.1672-5433.2015.12.003

2015-08-28）

攀枝花市2015年度市級財政科技專項資金項目（2015cy-s-25）

吳賢麗，女，技師。研究方向：臨床微生物檢驗。E-mail：12252935@qq.com

龐載元，男，副主任技師。研究方向：臨床微生物檢驗。通訊作者E-mail：yangfan621225@qq.com