輸精管結(jié)扎術(shù)后附睪液抗精子抗體的研究*

劉 晃 鄭厚斌 龐 韜 鄧順美 崔 蓉 姜彥嘉 唐運(yùn)革

廣東省計(jì)劃生育科學(xué)技術(shù)研究所， 國家衛(wèi)生和計(jì)生委男性生殖與遺傳重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（廣州 510600）

輸精管結(jié)扎術(shù)后附睪液抗精子抗體的研究*

劉 晃 鄭厚斌 龐 韜 鄧順美 崔 蓉 姜彥嘉 唐運(yùn)革

廣東省計(jì)劃生育科學(xué)技術(shù)研究所， 國家衛(wèi)生和計(jì)生委男性生殖與遺傳重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（廣州 510600）

目的 探討抗精子抗體（AsAb）在輸精管結(jié)扎術(shù)后患者附睪液中的表達(dá)及其對生育力的影響。方法對2011年1月至2014年9月住院行輸精管復(fù)通術(shù)的132例患者（A組）進(jìn)行附睪液的AsAb檢測，與同期132例育齡男性（B組）的精漿AsAb表達(dá)情況進(jìn)行對比，隨訪1年，觀察兩組對象配偶的妊娠情況。結(jié)果 A組患者附睪液AsAb的總陽性率為9.10%（12/132），其中IgG為1.52%（2/132）、IgM為0.76%（1/132）、IgA為6.82%（9/132）；B組的精漿AsAb總陽性率為8.33%（11/132），其中IgG為2.27%（3/132）、IgM為0.76%（1/132）、IgA為5.30%（7/132），兩組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。隨訪1年后，A組患者配偶的妊娠率為23.48%（31/132），略比B組34.85%（46/132）低，兩者間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 輸精管結(jié)扎術(shù)后附睪液中AsAb的表達(dá)程度與正常育齡男性精漿AsAb表達(dá)相當(dāng)，但其復(fù)通后配偶的妊娠率要略比正常育齡期男性配偶的妊娠率低，AsAb可能對輸精管復(fù)通后男性的生育力有一定影響。

輸精管； 附睪； 抗精子抗體； 生育力

世界衛(wèi)生組織（WHO）的數(shù)據(jù)顯示，全世界男性不育癥的各種病因?qū)W分類中，大概有15%～30%可能是由于體內(nèi)血清或者是精漿中存在抗精子抗體（antisperm antibody，AsAb）等免疫因素所導(dǎo)致，其目前的檢出率大約為20%～30%［1］。對于AsAb產(chǎn)生的原因，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為是由于輸精管道的梗阻，導(dǎo)致輸精管道內(nèi)壓力增高，附睪小管膨脹，精子漏出或者是附睪內(nèi)精子變性，促使精子被吞噬細(xì)胞或者是附睪上皮細(xì)胞吸收，從而刺激并啟動了自身免疫而產(chǎn)生抗體［2］。筆者對輸精管結(jié)扎術(shù)后患者附睪液中的AsAb表達(dá)程度與正常育齡男性精漿中AsAb的表達(dá)程度進(jìn)行了對比，發(fā)現(xiàn)兩者AsAb的表達(dá)卻未見明顯差異，但其復(fù)通后配偶的妊娠率要略比正常育齡期男性配偶的妊娠率低，現(xiàn)報(bào)道如下。

資料與方法

一、一般資料

A組：2011年1月至2014年9月132例輸精管結(jié)扎者，因再生育要求持當(dāng)?shù)赜?jì)劃生育管理部門證明前來我院要求行輸精管復(fù)通術(shù)。年齡在34～48歲間，平均（35.62±2.17）歲；結(jié)扎年限2～11年，平均（4.53±2.62）年；其中有一次生育史47人，有兩次或兩次以上生育史85人。住院期間進(jìn)行詳細(xì)的病史收集，排除傳染性疾病、遺傳性疾病、獲得性外傷性疾病、全身系統(tǒng)性疾病等，排除手術(shù)禁忌證等，并由專人進(jìn)行詳細(xì)的體格檢查，采用Prader's睪丸模型測量法測量睪丸大小，手術(shù)前采用化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測性激素水平（應(yīng)用德國Bayel公司試劑盒，按試劑盒要求規(guī)范操作）。

B組：為同期在我院門診進(jìn)行生育檢查的對象，年齡在33～44歲間，平均（34.47±2.93）歲，其中無生育史47人，有一次生育史52人，有兩次或以上生育史33人。所有對象在門診也由專人進(jìn)行詳細(xì)的病史收集和體格檢查，排除相關(guān)疾病，按相同方法測量睪丸體積，并檢測性激素水平。

（三）

兩組對象的配偶年齡29～40歲，平均（31.3±4.6）歲，均監(jiān)測月經(jīng)規(guī)則，輸卵管通暢，子宮狀況良好，排卵功能正常，排除宮頸疾病，無放置節(jié)育環(huán)，盡可能排除導(dǎo)致配偶不孕的相關(guān)因素。兩組一般人口學(xué)特征比較無明顯差異（P＞0.05），具有可比性。

二、方法

（一）手術(shù)方法

所有輸精管復(fù)通手術(shù)對象采用局部麻醉或者硬外麻醉下行顯微輸精管吻合術(shù)，術(shù)中用1mL注射器配鈍針頭吸取輸精管結(jié)節(jié)近睪端溢出液，個(gè)別輸精管結(jié)節(jié)近睪端溢出不多者可加注0.9%生理鹽水沖洗附睪小管后回抽，抽取所得附睪液體送實(shí)驗(yàn)室行AsAb檢測。

（二）檢測方法

A組患者按照手術(shù)方法收集附睪液標(biāo)本，B組對象參照第5版《世界衛(wèi)生組織人類精液檢查與處理實(shí)驗(yàn)室手冊》［3］的標(biāo)準(zhǔn)收集禁欲3～7d后的精液標(biāo)本。所得附睪液標(biāo)本和精液標(biāo)本，均依據(jù)WHO推薦的IBT試驗(yàn)法，按照IBT試劑盒（美國BIO-RAD公司生產(chǎn)）的使用操作說明書進(jìn)行規(guī)范操作，每份標(biāo)本同時(shí)檢測IgA、IgG、IgM。

（三）診斷標(biāo)準(zhǔn)

1. AsAb陽性標(biāo)準(zhǔn)：參照IBT試劑盒（美國BIORAD公司生產(chǎn)）的使用操作說明書標(biāo)準(zhǔn)。

2. 研究對象配偶受孕標(biāo)準(zhǔn)：有專人負(fù)責(zé)隨訪1年，以B超確診受孕或術(shù)后已分娩小孩為準(zhǔn)。

（四）統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所得數(shù)據(jù)均采用SPSS18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料比較采用x2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、兩組對象一般人口學(xué)特征比較

A、B兩組在年齡、睪丸體積、性激素水平等一般人口學(xué)特征方面比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

二、兩組AsAb表達(dá)水平與配偶妊娠情況比較

A組患者附睪液AsAb的總陽性率為9.10%（12/132），其中IgG為1.52%（2/132）、IgM為0.76%（1/132）、IgA為6.82%（9/132）；B組的精漿AsAb總陽性率為8.33%（11/132），其中IgG為2.27%（3/132）、IgM為0.76%（1/132）、IgA為5.30%（7/132）。隨訪1年后，A組患者配偶的妊娠率為23.48%（31/132），略比B組34.85%（46/132）低，兩者間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，（F1=0.051，P1=0.821；F2=4.239，P2=0.040）。

表1 兩組間一般人口學(xué)特征比較（s）

表1 兩組間一般人口學(xué)特征比較（s）

組別 例數(shù)（n） 年齡（歲） 睪丸體積（mL） FSH（mIU/mL） LH（mIU/mL） PRL（ng/mL） T（nmol/L）A組 132 35.62±2.17 14.87±2.51 7.29±1.45 5.14±1.47 8.73±2.21 9.47±1.88 B組 132 34.47±2.93 15.12±2.49 7.13±1.32 5.35±1.52 8.61±2.07 9.75±1.71 T - 0.259 -0.858 -0.708 0.855 0.961 -1.267 P - 0.396 0.194 0.238 0.191 0.173 0.102

討 論

一、輸精管結(jié)扎與AsAb的產(chǎn)生

目前國內(nèi)外眾多的學(xué)者都普遍認(rèn)為AsAb的產(chǎn)生是機(jī)體免疫系統(tǒng)異常引起，它是導(dǎo)致男性不育的一個(gè)比較明確的重要因素［4］。AsAb的基本概念是生物機(jī)體產(chǎn)生了一種能夠附著在精子表面、并且能夠與精子表面特異性抗原相互結(jié)合的特殊物質(zhì)，理論上認(rèn)為它能夠包被精子、凝集精子和抑制精子的運(yùn)動等等，通過阻礙精子與卵子的結(jié)合，阻礙受精卵的形成，從而導(dǎo)致不育癥的發(fā)生。眾所周知人類男性精子的產(chǎn)生是在睪丸的生精小管，而曲細(xì)精管有著血睪屏障的保護(hù)作用，使得精子被隔離開來，避免了機(jī)體免疫系統(tǒng)的識別，從而完成了減數(shù)分裂和精子的發(fā)生，然而當(dāng)這種特殊的屏障環(huán)境受到破壞的情況下，生精小管產(chǎn)生的精子就有可能被自身免疫系統(tǒng)所識別，從而產(chǎn)生AsAb，影響生殖的繁衍。當(dāng)前多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，輸精管結(jié)扎術(shù)后，生殖管道受到了梗阻，勢必會導(dǎo)致精液淤積，引起生殖管道內(nèi)的壓力增高，附睪小管膨脹，精子漏出形成精子肉芽腫或者是刺激了附睪內(nèi)皮細(xì)胞，造成內(nèi)皮細(xì)胞對精子的吸收加強(qiáng)和吞噬細(xì)胞的吞噬作用加強(qiáng)，刺激了人類敏感的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫反應(yīng)，從而引起AsAb的發(fā)生［2］。國外學(xué)者利用動物模型進(jìn)行了相應(yīng)的研究，其中Chehval等［5］發(fā)現(xiàn)成年大鼠在切去單側(cè)輸精管后15d，大鼠體內(nèi)血液中便開始有AsAb的產(chǎn)生。Flickinger等［6］發(fā)現(xiàn)輸精管結(jié)扎后立即吻合的大鼠產(chǎn)生的血清AsAb明顯比結(jié)扎后一段時(shí)間后吻合的大鼠少。在人類輸精管結(jié)扎術(shù)與AsAb的研究中，國內(nèi)外學(xué)者發(fā)現(xiàn)，輸精管結(jié)扎術(shù)后男性血清AsAb的陽性率可以高達(dá)50%～80%，而且多數(shù)是在術(shù)后半年到1年之間AsAb的表達(dá)程度達(dá)到最高峰，有的輸精管結(jié)扎后男性可以在術(shù)后20～30年內(nèi)均存在AsAb［7］。我們在研究中也發(fā)現(xiàn)，A組132例輸精管結(jié)扎對象在行輸精管結(jié)扎術(shù)2～11年，平均（4.53±2.62）年后仍有9.10%（12/132）的對象能從附睪液中檢測到AsAb的表達(dá)，本研究的AsAb表達(dá)程度比相關(guān)文獻(xiàn)的低，這可能與我們檢測的標(biāo)本不同有一定關(guān)系，我們檢測是的附睪液，而目前多數(shù)學(xué)者檢測的是血清。這表明血清AsAb與附睪液AsAb的表達(dá)不一定相關(guān)，這與國內(nèi)外有關(guān)學(xué)者的研究相一致［8，9］。

二、附睪液AsAb對生育力的影響

有研究分析出人類抗精子抗體的產(chǎn)生時(shí)間可以短至數(shù)天，當(dāng)機(jī)體免疫系統(tǒng)做出免疫應(yīng)答后數(shù)天內(nèi)即可在人體內(nèi)檢測到AsAb的存在，其可以存在血液、精液、睪丸鞘膜積液或者是女性宮頸黏液等人類體內(nèi)組織液中。Safarinejad對行睪丸鞘膜積液手術(shù)的患者進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)在睪丸鞘膜積液中可以檢測到AsAb的存在，其檢出率高達(dá)27%［10］。人類的AsAb主要有IgM 、IgG和IgA三種亞型。首先表達(dá)的時(shí)間也有先后之分，以IgM最早出現(xiàn)，繼而轉(zhuǎn)化為IgG和IgA并可以長期存在于體內(nèi)，其中IgG主要分布于血液中，IgA主要分布于除血液以外的其他組織液中。各種亞型的AsAb的作用部位和作用機(jī)制也有所區(qū)別，國外學(xué)者［11，12］發(fā)現(xiàn)IgM型主要作用于是抑制頂體反應(yīng)；IgG型主要是使得精子凝聚，制約精子活動能力；IgA型能夠降低精子的宮頸粘液穿透能力；他們還發(fā)現(xiàn)當(dāng)AsAb結(jié)合于精子頭部或者是精子表面全部時(shí)，生育的能力下降80%以上，當(dāng)AsAb結(jié)合的部位是精子尾部或者是體部時(shí)，生育的能力下降30%左右。國外還有分析認(rèn)為［13］，血清學(xué)AsAb的表達(dá)強(qiáng)度與生育力水平呈負(fù)相關(guān)，其中11例AsAb滴度≥1 024的男性竟然無1例能夠生育。我們在既往的研究中也發(fā)現(xiàn)，雖然輸精管復(fù)通術(shù)后的患者其精子質(zhì)量能夠在一年后達(dá)到正常參考范圍，但是其配偶受孕率要低于育齡人群自然受孕率［14］；而輸精管附睪吻合術(shù)后再通的患者2年內(nèi)的配偶受孕率也比WHO育齡人群2年的自然受孕率低［15］，其可能原因尚不明確。在此次研究中我們發(fā)現(xiàn)，132例復(fù)通術(shù)后的A組患者在附睪液中AsAb的總陽性率為9.10%（12/132），其中IgG為1.52%（2/132）、IgM為0.76%（1/132）、IgA為6.82%（9/132），主要是以IgA的形式存在，隨訪1年內(nèi)A組患者配偶的妊娠率為23.48%（31/132），略比B組34.85%（46/132）低，兩者間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），因此，我們認(rèn)為這可能是由于AsAb的作用部位不同所導(dǎo)致了兩組的配偶受孕率出現(xiàn)一定的差異，這也可能是解釋我們既往研究所發(fā)現(xiàn)的復(fù)通術(shù)后配偶受孕率會比正常育齡人群低的一個(gè)重要原因，AsAb可能對輸精管復(fù)通后對象的生育力存在一定的影響。

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（2015-09-12收稿）

Study on antisperm antibody in epididymal fi uid after vasectomy*

Liu Huang， Zheng Houbin， Pang Tao， Deng Shunmei， Cui Rong， Jiang Yanjia， Tang Yunge
Family Planning Research Institute of Guangdong Province， Guangzhou 510600 ， China

Objective To investigate the expression of antisperm antibody in epididymal fi uid after vasectomy and explore its effects on the fertility. Methods Total of 132 patients （group A） who underwent vasectomy reversal during the 2011-1 ～ 2014-9 were enrolled in the study. The antisperm antibody in the epididymal fi uid of patients were detected. Other 132 fertile men （group B） were set as the controls. All subjects were followed up for 1 year， and their spouse's pregnancy were observed. Results The total positive rate of antisperm antibodies in the epididymal fi uid of group A was 9.10%（12/132）， among them the IgG was 1.52%（2/132）， IgM was 0.76% （1/132）， IgA was 6.82% （9/132）， and the total positive rate of antisperm antibody in the seminal plasma of group B was 8.33% （11/132） ， among them the IgG was2.27% （3/132）， IgM was 0.76% （1/132）， IgA was 5.30% （7/132）， there was no significant difference between the two groups （P＞0.05）， after followed up for 1 years， the spouse's pregnancy rate of group A was 23.48%（31/132）， it was little lower than that of the group B（ 34.85%，46/132）， There was statistical difference between the two groups（P＜0.05）. Conclusion The expression level of antisperm antibody in the epididymal fi uid of the patients after vasectomy was close to that of the normal reproductive age men， but the spouse's pregnancy rate of the patients who underwent vasectomy reversal is little lower than that of the normal reproductive male's apouse.

epididymis； vas deferens； antisperm antibody； fertility

資助: 廣東省醫(yī)學(xué)科研基金（項(xiàng)目編號：A2015245）

10.3969/j.issn.1008-0848.2015.11.011

R 169.4